绘图教学法在解剖学教学中的应用

人体解剖学是一门重要的医学基础形态学科,内容、结构和名词繁多,形态和毗邻关系复杂,直观性较强,但易学难记,因而找到更合适的教学方法显得尤为重要[1].目前教学过程中标本、挂图、模型及多媒体的应用较为普遍,而老一辈的绘图教学法有逐渐萎缩的趋势,课堂上能熟练地在黑板上绘制线条简图来讲解内容的老师越来越少,大多年轻教师忽视了绘图的重要性.

探析多学科知识在解剖学教学中的应用

唯物辩证法认为世界上没有孤立存在的事物，每一种事物都是和其他事物相互联系的，联系是客观的、多样的。解剖学名词繁多、内容单一、枯燥，理论性强，需大量记忆，学生容易产生厌烦情绪，丧失学习兴趣。

专业学位研究生《应用解剖学》教学的实践与思考

医学专业学位研究生培养要求学生具有较强的临床分析和思维能力,能独立处理本学科的常见病,达到卫生部颁发的《临床住院医师规范化培训大纲》中第一阶段培训结束时要求的临床工作水平.培训期间要做到理论知识、临床工作能力和教学科研能力相结合,基础培训和专科培训相结合[1-2].临床应用解剖学从应用角度对人体形态学进行研究,更贴近临床,是医学专业学位研究生培养中重要的桥梁课程.本院从2009年起在专业学位研究生中开设《应用解剖学》,深受学生欢迎,现将在临床医学专业学位研究生《应用解剖学》的教学实践加以总结.

人体解剖学教学数字化资源库的建立

数字化教育资源库建设是开展信息化、网络化教育的基础，也是当前教育改革与素质教育的要求。教学实践表明，有效地利用数字化教学资源，对培养学生的学习能力、求知意识及探索精神具有重要意义。由于我校系统解剖学课程的数字化教育资源（互动教学平台）刚刚引进，目前还处于初步开发阶段，存在较多问题，唯有建立合理的数字化教育资源发展策略，才能更好地促进系统解剖学课程数字化教育资源建设，发挥其最大效益，

系统解剖学教学方法的改革与实践探讨

课堂提问是系统解剖学课堂的一种重要教学方式，运用得当能够有效地启迪学生的思维，引发学生创新的灵感，但滥用提问也会导致相反的结果”。在教学中我们发现，提问这种最古老、最常用的教学方式被轻视与忽略了。看到的往往是教师简单、随意、重复的提问，缺乏科学性、有效性；学生则是不敢或不愿提出问题，或不能、不善于提出问题。目前，课堂教学普遍存在着“假问题”和“满堂问”现象，而且提问的问题大多是一些简单的对错题或者事实性问题，学生可以不假思索进行回答或通过记忆背诵回答，对激发学生思维、启迪学生智慧价值不大，因此在课堂教学中应紧紧围绕如何精心设计有价值的问题，构建一种高效、快乐的课堂教学思路来进行，为此我们提出“问题导航法”来解决这一问题。

三七三醇皂苷对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨三七三醇皂苷(PTS)对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用及机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组及治疗组,糖尿病组及治疗组腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病动物模型,治疗组给予PTS 50 mg·kg-1·d-1灌胃,1个月后免疫荧光组化双标检测Nogo受体与RGC特异性标志物Brn3a的共存情况,Western blot检测视网膜Nogo受体表达,试剂盒检测视网膜丙二醛(MDA)含量,HE染色观察RGC数量。结果 Brn3a与Nogo受体于视网膜内大量共存。与对照组相比,糖尿病组视网膜Nogo受体表达上调,MDA含量增加,RGC数量减少(均P<0.001);与糖尿病组相比,治疗组视网膜Nogo受体表达减少,MDA含量降低,RGC数量增加(P<0.001)。结论 PTS可能通过抑制糖尿病大鼠视网膜RGC内Nogo受体的表达,抑制视网膜氧化应激,从而保护糖尿病视网膜RGC。

地黄多糖诱导骨髓间充质干细胞为神经样细胞后的突触功能

目的：探讨地黄多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化为神经元样细胞后是否具有神经突触功能。方法：贴壁筛选法分离纯化BMSCs，地黄多糖进行诱导，激光共聚焦显微镜检测细胞在高钾刺激下细胞膜电位的变化，细胞内钙流变化及细胞突触循环功能。结果：地黄多糖诱导24h，连续培养7d后，光学显微镜下显示诱导后的细胞伸出突起交互成复杂网状；免疫荧光细胞化学显示诱导后的细胞神经元巢蛋白阳性表达率为97．9％±1．3％，神经元特异性烯醇化酶阳性率95．4％±1．9％，突触小泡蛋白阳性率为94．2％±2．2％；激光共聚焦显微镜显示诱导后细胞在高钾刺激下细胞膜电位迅速升高，细胞内钙离子流增加，细胞突触发生了胞吞胞吐现象。结论：地黄多糖可以诱导BMSCs分化为神经样细胞，此细胞具有神经细胞的神经生理功能。

人血管生成素-1基因真核表达载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达

目的构建人血管生成素-1(Ang-1)基因的真核表达载体,并检测其在人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)中的表达,为进一步研究Ang-1防治糖尿病视网膜病变(DR)的血管渗漏提供实验依据。方法提取人胎盘组织中的总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)特异性扩增Ang-1编码区序列,亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1。将pEGFP-N1-Ang-1导入UC-MSCs,然后应用含质量分数10%胎牛血清的DMEM培养基对人UC-MSCs进行培养,荧光显微镜下观察Ang-1在人UC-MSCs中的表达,Western blot法检测重组体的表达。结果 RT-PCR法成功克隆人Ang-1基因编码区序列,纯度为1.82;PCR扩增的片段长度为1.5 kb,与预期片段大小相近。双酶切鉴定法可识别重组pEGFP-N1-Ang-1转染质粒,目的基因与预期基因序列的同源性为100%。人UC-MSCs转染的pEGFP-N1/Ang-1质粒能够表达Ang-1蛋白,呈现绿色荧光。转染pEGFP-N1的人UC-MSCs和对照组人UC-MSCs均未见相应的Ang-1蛋白表达。结论成功地克隆出人的Ang-1基因并构建了真核表达载体pEGFP-N1-Ang-1,为将Ang-1基因转染至人UC-MSCs治疗DR奠定了基础。

Ang-1对高糖环境中RF/6A单层的保护作用

目的探讨高浓度葡萄糖及血管生成素-1(Ang-1)对内皮细胞(EC)单层通透性的影响。方法将猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6A)接种于0.8μm聚碳酸酯微孔滤膜,形成致密单层后分3个组培养。正常对照组:含葡萄糖25mmol/L;高糖组:含葡萄糖40mmol/L;Ang-高糖组:含葡萄糖40mmol/L+Ang-1(250ng/mL)。于1、3、5、7d,4个时间点建立EC单层通透性模型,检测蛋白质渗透压反射系数(δ)及滤过系数(Kf),以监测EC单层通透性的变化;利用Westernblot(NBT/BCIP显色法)检测5d时survivin的表达。结果3、5、7d时,高糖组EC单层通透性增高(P<0.01),Ang-高糖组在5d及7d时,EC单层通透性升高(P<0.01),但仍低于高糖组;Westernblot结果显示,Ang-高糖组survivin表达明显高于其他各组(P<0.01)。结论高糖能够增加EC单层通透性,Ang-1能对抗高糖的这种生物学作用。可能是通过上调凋亡抑制基因survivin的表达,抑制RF/6A的凋亡而发挥生物学作用的。

骨髓基质细胞促进永久性局灶性脑缺血大鼠脑室下区的神经发生

目的探讨移植骨髓基质细胞(BMSCs)对永久性局灶性脑缺血大鼠脑室下区(SVZ)细胞增殖的影响及其增殖细胞类型分析。方法制作永久性局灶性脑缺血大鼠模型,分为空白对照组(MCAO)、PBS对照组(MCAO+PBS)和治疗组(MCAO+BMSCs),每组动物再分为脑缺血后7d和14d亚组。空白对照组不予处理,PBS对照组在脑缺血后1d移植PBS,治疗组在脑缺血后1d移植BMSCs。用Zausinger六分法检测神经功能恢复情况;注射5-溴脱氧鸟嘧啶核苷(BrdU)标记SVZ的新增殖细胞,免疫荧光双重标记检测新增殖细胞的类型。结果在脑缺血后7d和14d,与两个对照组相比,治疗组的神经功能评分较高,有显著性差异(P<0.05);脑缺血后14d,治疗组的大鼠患侧SVZ的BrdU阳性细胞较其余两组高,存在显著差异(P<0.05);免疫荧光双重标记显示,新增殖细胞表达神经元和星形胶质细胞的标志物,提示新增殖细胞为神经元和神经胶质细胞的混合体。结论BMSCs可以改善永久性局灶性脑缺血大鼠的神经功能,其机制可能与促进SVZ的神经细胞增殖有关。

Ang-1/Tie2系统与病理性血管形成的关系

血管生成素1(Ang-1)是继血管内皮生长因子(VEGF)之后,人们发现的又一重要的促血管生成因子。血管生成素家族包括Ang-l、Ang-2、Ang-3、Ang-4四种分子。其共同的特异性受体为Tie-2。目前对Ang-1/Tie2系统参与新生血管形成、促进血管成熟、抑制血管渗漏及炎症的作用研究相对深入,在创伤后修复、缺血后再通、肿瘤、糖尿病并发症及子宫内膜异位等多种病理性血管形成过程中起重要作用。

α-硫辛酸对染铅幼年大鼠骨代谢的影响

目的探讨α-硫辛酸对染铅大鼠骨代谢的影响。方法将31只SD大鼠随机分为2组,空白对照组8只和铅染毒组(230 mg/L的醋酸铅灌胃)23只,40 d后各组取3只大鼠测血铅和骨铅,将已染铅大鼠随机分为4组,即铅对照组、3个α-硫辛酸治疗组[30、60、100 mg/(kg.d)]每组5只。α-硫辛酸治疗80 d后处死动物,测定血铅、骨铅,骨钙素放免分析法测含量,碱性磷酸酶免疫组化法检测表达。结果①各α-硫辛酸治疗组大鼠血铅、骨铅水平均低于铅对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。②α-硫辛酸100 mg治疗组大鼠骨钙素含量、碱性磷酸酶表达与铅对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论α-硫辛酸能够减轻铅对骨代谢的毒性作用。

人脐血基质细胞生物学特性的实验研究

目的:探讨人脐血基质细胞的生物学特性,为骨组织工程选择理想的种子细胞来源。方法:采用加入10%FBS、20ng/mlbFGF的L-DMEM培养基培养人脐静脉血基质细胞,以人骨髓基质细胞(BMSCs)做为对照。应用倒置显微镜观察细胞形态学特征,描绘生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期。同时原代细胞进行成骨诱导分化培养。碱性磷酸酶染色和Von-Kossa染色法检测成骨能力。结果:①人脐血基质细胞原代培养形态呈长梭形,需21～30d长满瓶底,传代后细胞增殖缓慢并逐渐死亡。②在成骨诱导培养基里,脐血基质细胞增殖速度减慢,诱导前后形态无明显改变。碱性磷酸酶染色:脐血基质细胞阳性率为46.0%。Von-Kossa染色提示脐血基质细胞成骨诱导后形成钙化结节。结论:脐血基质细胞增殖能力有限,较骨髓基质细胞难于培养,成骨诱导证实可以向成骨细胞分化。

姜黄素对高浓度葡萄糖诱导的RF/6A细胞损伤的抑制作用

目的:探讨姜黄素对高浓度葡萄糖培养的恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞(rhesus choroido-retinal endothelial cell,RF/6A)损伤的保护作用及机制。方法:RF/6A细胞分4组培养(n=6/组),对照组:DMEM培养基+100/L胎牛血清;高糖组:对照组培养基添加40mmol/L葡萄糖;姜黄素组:对照组培养基添加30μmol/L姜黄素;姜黄素-高糖组:对照组培养基添加40mmol/L葡萄糖及30μmol/L姜黄素。分组培养5d后,显微镜观察各组细胞生长状态,噻唑蓝比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测各组细胞活力,琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder判断凋亡,Western-blot检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达。结果:与对照组相比,高糖组RF/6A细胞生长状态较差,活力明显降低(P<0.01),而姜黄素组及姜黄素-高糖组RF/6A活力无明显变化(P>0.05)。高糖组RF/6A出现明显的DNA ladder,对照组、姜黄素组以及姜黄素-高糖组未见明显DNA ladder。与对照组相比,高糖组TNF-α表达上调(P<0.01),姜黄素组及姜黄素-高糖组TNF-α表达无明显变化(P>0.05)。结论:姜黄素抑制高浓度葡萄糖诱导的RF/6A细胞凋亡、维持细胞活力,可能与姜黄素恢复高浓度葡萄糖诱导的TNF-α表达有关。

PBL、TBL教学模式在局部解剖学教学中的应用探索

以问题为导向的教学方法（problem-based learning,PBL）主要是以小组讨论形式,在辅导教师的参与下,围绕某一医学专题或具体病例的诊治等问题进行研究、学习。目前很多医学院校分别在基础课、临床课和实验课中部分试行了PBL教学法,取得了良好的效果。PBL教学模式在全世界很多国家的临床医学本科生教育中已经推行了近30年时间,在我国部分医学院校也试行了20多年,

骨髓基质细胞移植促进脑缺血大鼠海马巢蛋白的表达

目的:探讨移植骨髓基质细胞(BMSCs)对永久性局灶性脑缺血大鼠海马巢蛋白表达的影响。方法:制备永久性局灶性脑缺血大鼠模型,分为PBS对照组和治疗组,再将每组动物随机均分为脑缺血后7d和14d亚组。PBS对照组在脑缺血后1d注射PBS,治疗组在脑缺血后第1日移植BMSCs。Zausinger六分法检测神经功能恢复情况;免疫组织化学方法检测大鼠海马的巢蛋白表达。结果:在脑缺血后第7日和第14日两个时相点,治疗组的神经功能评分均较高,与PBS对照组之间存在显著性差异;齿状回的颗粒细胞下层、颗粒细胞层和海马锥体细胞层均有巢蛋白表达,在脑缺血后第14日,治疗组的大鼠患侧海马的巢蛋白阳性细胞较对照组表达高,存在显著性差异。结论:BMSCs可以改善脑缺血大鼠的神经功能;促进海马内神经干细胞或反应性星形胶质细胞增殖可能为其修复缺血脑损伤的机制之一。

Ang-1对高糖环境中猴脉络膜-视网膜内皮细胞单层通透性的影响

目的:利用猴脉络膜-视网膜内皮细胞建立内皮细胞(EC)单层模型,观察高浓度葡萄糖及血管生成素-1(Ang-1)对该模型通透性的影响.方法:待EC于孔径0.8μm的聚碳酸酯微孔滤膜上形成致密单层后分3组进行培养:对照组(DMEM培养基含25 mmol/L葡萄糖)、高糖组(DMEM培养基含30 mmol/L葡萄糖)、Ang-高糖组(DMEM培养基含30mmol/L葡萄糖+0.25 mg/L Ang-1).于1,3,5,7 d 4个时间点,以含白蛋白1 g/L的D-Hanks液灌注滤膜,检测蛋白质渗透压反射系数(δ)及滤过系数(Kf);并于5 d和7 d利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder.结果:3,5,7 d时,高糖组EC单层的通透性高于对照组(P<0.01);Ang-高糖组与对照组之间EC单层的通透性无差异(P>0.05).高糖组EC的琼脂糖凝胶电泳在5 d及7 d均出现DNA ladder,对照组及Ang-高糖组未见DNA ladder.结论:高糖能够促进细胞凋亡,增加EC单层通透性;Ang-1能抑制EC的凋亡,对抗高糖所致的EC单层通透性增高.

Nogo受体在早期糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用

目的:探讨Nogo受体(nogo receptor,NgR)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用及机制。方法:链脲佐菌素诱导SD大鼠DM模型,实验分4组,对照组;DM组;siNgR组:DM大鼠玻璃体内给予NgR反义核苷酸序列;siRNA空白组:DM大鼠玻璃体内给予阴性核苷酸序列。1mo后TUNEL染色检测视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)凋亡,试剂盒检测视网膜丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Western-blot检测视网膜NgR及caspase-3含量。结果:对照组、DM组、siRNA空白组及siNgR组MDA含量分别为3.74±0.49,7.21±0.96,6.41±1.34及4.02±0.53nmol/mg prot。与对照组相比,DM组及siRNA空白组视网膜RGC凋亡增加,NgR及caspase-3表达上调,MDA含量升高(P<0.05),而siNgR组视网膜RGC数量、NgR及caspase-3表达、MDA含量较对照组均无明显变化(P>0.05)。结论:NgR表达增加是糖尿病RGC凋亡的重要原因之一,其机制可能与NgR诱导视网膜氧化应激、上调caspase-3表达有关。

Nogo受体对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的探讨Nogo受体对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响及机制。方法 SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱导30只糖尿病模型。分为对照组、糖尿病组、siNgR组、siRNA空白组,每组10只。siNgR组糖尿病大鼠玻璃体内注射Nogo受体反义核苷酸序列;siRNA空白组糖尿病大鼠玻璃体内注射阴性核苷酸序列。1个月后,免疫荧光组化检测Nogo受体与RGC标志物Brn3a的共存;以TUNEL染色观察RGC凋亡;试剂盒检测视网膜丙二醛(MDA)含量;Western blot检测视网膜Nogo受体及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达。结果 Nogo受体大量表达于视网膜RGC内,对照组、糖尿病组、siRNA空白组及siNgR组MDA含量分别为(3.68±0.47)、(8.07±1.24)、(7.54±1.53)及(5.12±0.62)μmol/g蛋白,RGC凋亡率分别为(5.1±0.2)%、(49.3±2.7)%、(45.6±1.8)%及(12.4±0.6)%,Nogo受体相对表达量分别为(0.18±0.07)%、(0.45±0.12)%、(0.40±0.09)%及(0.16±0.09)%,caspase-3相对表达量分别为(0.16±0.05)%、(0.40±0.18)%、(0.42±0.12)%及(0.17±0.08)%。与对照组相比,糖尿病组及siRNA空白组视网膜RGC凋亡明显,Nogo受体及caspase-3表达上调,MDA含量增加(P<0.05)。与糖尿病组相比siNgR组视网膜RGC凋亡减少、Nogo受体及caspase-3表达下调、MDA含量降低(P<0.05)。结论 Nogo受体表达上调参与了糖尿病视网膜RGC凋亡,其机制可能与Nogo受体上调caspase-3表达、诱发视网膜氧化应激有关。

牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞的保护作用

目的探讨牛磺酸对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜Müller细胞的影响及机制。方法取雄性SD大鼠随机分为对照组、DM组、牛磺酸组、PBS组(n=6/组),对照组正常大鼠腹腔注射柠檬酸缓冲液,DM组大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱导的DM模型,牛磺酸组DM大鼠腹腔注射牛磺酸,PBS组DM大鼠腹腔注射PBS。3个月后试剂盒检测视网膜还原型谷胱甘肽(reduced glutathione hor-mone,GSH)及含量丙二醛(malondialdehyde,MDA),Western blot检测视网膜胶质纤维酸性蛋白(glial fi-brillary acidic protein,GFAP)及谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)表达。结果对照组MDA及GSH含量分别为(3.52±0.51)nmol/mg prot及(95.47±8.73)mg/g prot;DM组及PBS组MDA含量分别为(6.72±0.75)、(7.22±0.54)nmol/mg prot,较对照组明显增高(P<0.05),而GSH含量分别为(46.38±5.31)、(63.21±6.48)mg/g prot,较对照组明显降低(P<0.05);牛磺酸组MDA及GSH含量分别为(4.01±0.38)nmol/mg prot、(85.39±8.47)mg/g prot较对照组,差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,DM及PBS组视网膜GFAP表达上调,GS表达下调,牛磺酸组GFAP及GS表达无明显变化。结论抑制DM视网膜氧化应激是牛磺酸保护Müller细胞,上调GS表达的重要机制之一。