北京地区散发性戊型病毒性肝炎238例临床研究

目的探讨北京地区散发性戊型病毒性肝炎的临床特征,为临床诊治提供参考。方法回顾2007年11月至2009年7月在首都医科大学附属北京佑安医院住院的238例戊型病毒性肝炎患者的临床及实验室特点,分析散发性戊型病毒性肝炎的临床特征和实验室特点。结果 238例戊型病毒性肝炎患者分布于不同的年龄段,其中40～49岁、50～59岁及60岁以上年龄段戊型肝炎患者显著多于39岁以下年龄段,老年患者占27.3%,未见学龄及学龄前儿童;黄疸型221例(占92.9%),无黄疸型17例(占7.1%);单纯戊型肝炎病毒感染209例(占88%),重叠感染29例(占12%),均为乙、戊型肝炎病毒重叠感染。戊型病毒性肝炎ALT显著增高,41.6%的患者大于1000IU/L,20%以上的患者出现PTA低于正常范围,6(2.5%)例患者的PTA低于40%。老年戊型病毒性肝炎患者肝脏合成及储存指标均低于其他年龄组患者,血清白蛋白和胆碱酯酶下降明显。结论散发性戊型病毒性肝炎患者临床特征及生化指标符合急性肝损伤的表现,以急性黄疸型肝炎为主,也有病情较重患者,不能忽视。尤其是老年戊型肝炎患者,在治疗肝病期间一定要注意并发症的治疗。

非酒精性脂肪性肝炎的药物和生物标志物发展中的挑战和机遇:美国肝病研究协会-美国食品药品管理局联合工作组的调查和建议

2015年Hepatology发表了美国肝病研究协会（AASLD）与美国食品药品监督管理局（FDA）联合工作组完成的《非酒精性脂肪性肝炎的药物和生物标志物发展中的挑战和机遇》

肝细胞癌诊断与治疗研究进展

肝细胞癌(HCC)是世界范围内的第5大常见肿瘤,且男性肿瘤病死率居第3位。病毒性肝炎、肥胖和代谢综合征是HCC发病的明确危险因素。本文关注最新数据和推荐指南,回顾性分析HCC的诊断和治疗方法。HCC早期诊断依赖于动态加强的典型放射影像,肝移植、手术切除和射频消融是HCC的治愈性疗法,而索拉非尼和经动脉化疗性栓塞多推荐用于晚期HCC,由肝脏病学、外科学、放射学、肿瘤学和病理学专家组成的多学科综合治疗是未来HCC治疗的发展方向。

逆转肿瘤上皮间质化药理研究进展

上皮间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞来源的恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程,是肿瘤侵袭和转移过程的重要启动步骤,与恶性肿瘤的进展和预后密切相关,EMT已经成为抗肿瘤药理研究的重要靶点。该文从药理筛选模型、靶向药物、细胞毒类药物、天然药物几个方面综述近几年来有关逆转肿瘤EMT药理方面的研究,对于研发能够逆转恶性肿瘤EMT的抗肿瘤药物具有重要指导意义。

ASPP2蛋白的结构特征和生物学功能研究进展

p53凋亡刺激蛋白2抗体（ASPP2）又被称为53BP2L,是p53结合蛋白家族的一个促凋亡成员。临床研究显示ASPP2在人类癌症组织中常常表达下调,这种表达受抑与肿瘤的发生进展以及不良预后密切相关。

乙肝病毒核心启动子区和前C区突变与肝细胞自噬的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)核心启动子区和前C区突变与肝细胞自噬的关系。方法构建前C区和C启动子区突变的1.3mer HBV质粒G1613A、A 1762T/G1764A、,G1896A;HepG2细胞分别转染GFP-LC3质粒和突变的HBV质粒。免疫荧光染色法检测HBV感染的细胞LC3荧光颗粒表达水平,免疫印迹法分析内源性LC3表达水平,实时定量PCR检测转染后细胞内自噬相关基因Atg5、Atg7和Beclin-1 mRNA的转录水平。结果免疫荧光显示,转染HBV G1613A、A 1762T/G1764A、G1896A质粒的细胞LC3荧光颗粒表达水平分别为(12.5±0.2)%、(11.7±0.2)%、(8.5±0.2)%,低于转染野生型HBV质粒的细胞[(14.5±0.2)%],差异有统计学意义(P﹤0.05)。实时定量PCR显示,自噬相关基因Atg5 mRNA在转染HBV G1613A、A 1762T/G1764A、G1896A质粒的细胞中的转录水平均明显低于野生型HBV(P﹤0.01),Atg7和Beclin-1在转染G1896A HBV质粒细胞中的基因转录水平低于野生型HBV转染的细胞,且Beclin-1的降低具有统计学意义(P<0.05)。结论 HBV前C区和C启动子区G1613A、A 1762T/G1764A、G1896A突变能够降低HBV感染的肝细胞自噬。

外源性AFP对肝癌细胞增殖和抗凋亡的作用研究

目的探讨外源性甲胎蛋白(AFP)对体外培养的肝癌细胞系的生物学功能及意义。方法该实验选用了HepG2(AFP阳性)和HLE(AFP阴性)两种常见的肝癌细胞系,再加入不同浓度的外源性AFP处理24 h后,用MTT检测细胞的增殖情况;在这两种细胞系中加入凋亡诱导剂ATRA处理的同时加入外源性AFP,检测AFP对于细胞的抗凋亡能力的影响。结果在HepG2和HLE细胞中,加入不同浓度的外源性AFP后,MTT结果显示AFP可以明显促进肝癌细胞的增殖;而加入凋亡诱导剂ATRA之后,FCM结果显示细胞凋亡明显增加,加入外源性AFP后,细胞凋亡的情况明显好转,外源性AFP可以增强肝癌细胞的抗凋亡能力。结论外源性AFP不仅可以促进肝癌细胞系的增殖,同时还可以增强肝癌细胞的抗凋亡能力。

葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶siRNA对7702肝细胞增殖的影响及机制研究

目的探讨糖鞘脂合成代谢在肝细胞增殖中的可能作用机制。方法体外培养肝细胞株7702细胞,利用UDP-葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)si RNA转染肝细胞。采用MTT法检测细胞增殖,采用实时荧光定量PCR法检测Bcl-2、Bax和Caspase 3基因水平,采用Western blot法检测肝细胞Caspase 3蛋白表达情况。结果 UGCG si RNA干扰组细胞糖化神经酰胺合成酶基因水平比对照组明显下调(P<0.05);干扰糖化神经酰胺合成酶基因表达后,转染组细胞Bcl-2 m RNA水平显著下降(P<0.05),Bax m RNA水平显著升高,Caspase 3 m RNA及其蛋白表达水平均上调(P值均<0.05)。结论糖化神经酰胺合成酶的缺乏引起的鞘脂代谢改变可能参与肝细胞的增殖的过程中,这可能与BCL2/BAX调节的细胞信号通路有关。

山奈酚对HepG2细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨山奈酚对人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的影响及其机制。方法以不同浓度山奈酚作用于HepG2细胞,在不同时间采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测细胞存活率;采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力定量测定试剂盒检测细胞上清液LDH的活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白质印迹法(western blot,WB)检测细胞凋亡途径各标志物mRNA的相对表达量及蛋白表达水平。结果山奈酚作用于HepG2细胞24 h后,5、10、25、50和100μmol/L山奈酚组细胞存活率分别为(102.3±1.9)%、(96.1±5.3)%、(86.7±10.3)%、(79.8±8.4)%和(60.2±2.9)%,其中,50μmol/L和100μmol/L山奈酚组细胞存活率与溶剂对照组的(99.6±0.6)%比较,差异有统计学意义(P=0.015,P<0.001);100μmol/L山奈酚作用于HepG2细胞3、6、12、24 h后细胞存活率分别为(99.8±4.1)%、(92.6±7.3)%、(80.2±8.0)%和(62.5±2.7)%,其中12 h和24 h山奈酚组与溶剂对照组的(99.6±0.4)%比较,差异有统计学意义(P=0.015,P<0.001)。5、10、25、50、100μmol/L山奈酚作用于HepG2细胞24 h后,细胞上清液中LDH活力单位分别为(198.6±28.8)、(370.0±10.2)、(395.2±16.5)、(444.5±45.1)、(475.9±33.3)U,其中,10、25、50和100μmol/L山奈酚组与溶剂对照组的(216.7±32.4)U比较,差异有统计学意义(P=0.001,P=0.001,P=0.002,P=0.001);100μmol/L山奈酚作用于HepG2细胞3、6、12和24 h后,细胞上清液中LDH活力单位分别为(236.3±47.4)、(238.7±52.0)、(311.6±50.3)、(425.4±28.4)U,与溶剂对照组的(162.3±31.9)U比较,12 h和24 h山奈酚组LDH活性明显升高,差异有统计学意义(P=0.012,P=0.000)。5、10、25、50、100μmol/L山奈酚作用于HepG2细胞24 h后均可诱导凋亡发生,凋亡率分别为(3.6±0.5)%、(4.7±0.3)%、(5.3±0.7)%、(10.4±0.8)%和(16.4±0.3)%,随着山奈酚浓度的升高,凋亡率随之增加,各浓度山奈酚组细胞凋亡率显著高于溶剂对照组的(1.0±0.4)%,差异有统计学意义(P=0.003,P=0.000,P=0.001,P<0.001,P<0.001);100μmol/L山奈酚作用于HepG2细胞3、6、12、24 h后,细胞凋亡率分别为(4.8±0.4)%、(7.9±0.4)%、(11.4±0.5)%和(16.5±1.0)%,且各组细胞凋亡率均显著高于溶剂对照组的(0.4±0.1)%,差异有统计学意义(P均<0.001)。山奈酚作用于HepG2细胞后,Bax、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、葡萄糖调节蛋白94(glucose-regulated protein 94,GRP94)、蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)、裂解的活化转录因子6(cleaved activating transcription factor 6,cleaved ATF6)、肌醇需求酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)和C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)m RNA的相对表达量及裂解caspase3、caspase4蛋白表达水平随着山奈酚浓度的升高及作用时间的延长逐渐增加;各组Bcl-2 mRNA的相对表达量与溶剂对照组相比,差异无统计学意义。结论山奈酚可以通过线粒体途径和内质网应激途径诱导HepG2细胞凋亡,可能具有潜在的抗肝癌活性。

人ASPP2重组腺病毒质量控制研究

目的对人ASPP2重组腺病毒制剂进行质量分析,并针对其关键质量特性建立质控方法。方法采用PCR法对重组腺病毒的载体结构特征基因E2B和目的基因ASPP2进行扩增,琼脂糖电泳进行分子量鉴定;采用UV-SDS法测定重组腺病毒的病毒颗粒数;采用组织培养半数感染剂量法(TCID50)测定重组腺病毒的感染滴度;采用Western blot法对重组腺病毒感染靶细胞后目的蛋白ASPP2的表达情况进行检测;通过MTT实验观察重组腺病毒对肝癌细胞的生物学效应;采用A549细胞进行重组腺病毒的复制型病毒检测。结果腺病毒载体E2B基因和目的基因ASPP2的鉴定结果与理论值相符;重组腺病毒的病毒颗粒数为每毫升5.6×10^(12)VP,病毒滴度为每毫升2×10^(11)IU,比活性为3.5%;病毒感染靶细胞24 h后可检测出ASPP2蛋白的表达;重组腺病毒对肝癌细胞具有生长抑制作用;复制型腺病毒(RCA)水平小于1 RCA/3.0×10^(10)VP,符合中国食品药品监督管理局(SFDA)的标准。结论建立了人ASPP2重组腺病毒的关键特征的质量控制方法,为该重组腺病毒质量标准的建立及相关应用奠定了基础。

HIV-1感染者中枢神经系统的病毒学特征研究

目的探讨HIV-1感染者中枢神经系统(CNS)的病毒学特征。方法通过克隆测序分析病毒亚型,观察CNS中HIV-1变异性和离散率;依据V3环11/25法则并结合10例有偿献血HIV-1感染者尸检脑组织标本免疫荧光试验分析中枢神经HIV-1复合受体的使用。结果有偿献血人群感染的HIV-1显示B和B′亚型特征,脑脊液(CSF)和外周血序列有嵌合现象;CSF C2-V5区序列变异性明显低于外周血,两者的离散率差异无统计学意义;依据11/25法则分析V3环序列可见中枢神经HIV-1大多数使用CCR5复合受体。结论 CNS HIV-1病毒变异性明显小于外周血;CNS HIV-1具有CCR5嗜性。

癌基因Ras及其常见突变与P53协同作用对结肠癌细胞化疗药物敏感性的研究

目的探讨P53与Ras及常见Ras突变协同作用对结肠癌细胞化疗药物敏感性的影响。方法 P53-/-的结肠癌细胞(HCT116 P53-/-)中分别单转染Ras野生型、Ras V12、Ras N17质粒,另外3组细胞分别转染以上质粒后感染P53腺病毒。用奥沙利铂处理12 h后分别用钙黄绿素-AM(Calcein-AM)和碘化丙啶(PI)染色、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)、免疫印迹(WB)检测各组凋亡水平。结果 Calcein-AM/PI染色显示,Ras V12转染组凋亡率[(16.8±1.7)%]显著高于Ras[(8.3±1.5)%,P<0.01]和Ras N17转染组[(4.4±1.6)%,P<0.01],Ras N17转染组凋亡率最低(P=0.016);P53腺病毒处理3组凋亡率均显著增高,仍以Ras V12转染组凋亡率[(25.9±2.2)%]为最高,Ras N17转染组最低[(7.6±1.2)%]。Real-time PCR和WB显示,P53存在与不存在条件下,Ras V12转染组Bax m RNA和蛋白表达均显著高于Ras和Ras N17转染组;Bcl-2水平则与Bax水平相反(P均<0.05)。结论 Ras突变体Ras V12过表达能够引起奥沙利铂作用下细胞凋亡的增加,而突变体RAS N17能够降低细胞凋亡;P53与Ras有协同作用,能够提高Ras的促细胞凋亡作用,提高细胞对奥沙利铂化疗药的敏感性。

慢性乙型肝炎患者外周血调节性B细胞与乙肝病毒DNA定量的相关性

细胞免疫应答在乙型肝炎病毒（HBV）感染后的清除过程中发挥了重要的作用．但是研究发现,慢性乙型肝炎患者体内特异性T细胞对HBV呈现了免疫低反应性，其确切机制仍不清楚。传统观点认为B细胞主要发挥体液免疫应答和抗原提呈作用。实际上．B细胞也具有免疫负调节作用。最近的研究证实，调节性B细胞（Bregs）自身免疫性疾病、炎症性疾病和癌症中具有致病作用。

表达谱基因芯片筛选肝癌细胞中ATRA下游基因的应用研究

目的全反式维甲酸(All Trans-Retinoic acid,ATRA)处理肝癌细胞系HepG2细胞后进行表达谱基因芯片技术分析,探索其对肝癌细胞基因表达谱的影响。方法 80μmol/L的全反式维甲酸处理HepG2细胞24 h后,提取细胞的mRNA,应用基因表达谱芯片技术对差异表达的mRNA进行检测和分析,以等体积无水乙醇处理作为对照组。结果全反式维甲酸处理HepG2细胞后,共筛选出661个差异表达基因,这些差异基因与肿瘤细胞的信号转导、增殖分化等都有密切的关系。结论成功的应用表达谱芯片技术筛选出ATRA处理细胞后的差异表达基因,为进一步探讨ATRA对肝癌细胞的作用机制奠定了基础,也为临床应用ATRA诱导肝癌分化提供理论依据。

蛋白芯片研究进展

蛋白芯片技术已经成为在微小样本中筛查多项指标的可靠研究工具，在疾病诊断和个性化医疗方面表现出巨大的潜力。含有捕获分子的微小液滴有规律的固定住固体载体上，排列成整齐的行列，与检测样本中相匹配的分子结合，形成的微滴复合物检测，利用荧光、化学发光、质谱分析、放射性或电化学原理获得结果数据。蛋白芯片方法已经成功的应用于分析抗体一抗原、蛋白质一蛋白质、蛋白质一核酸、蛋白质一脂类、蛋白质一小分子化合物的相互作用以及酶与底物的相互作用研究。本文简要综述了目前蛋白芯片的研究进展。

应用基因芯片技术研究抗肿瘤传统和天然药物相关文献分析

目的:为基因芯片技术在传统和天然药物防治肿瘤研究的应用提供参考。方法:查阅2000年1月-2014年1月所有应用基因芯片技术进行抗肿瘤传统和天然药物研究的国内外文献,建立了相应的数据库,从文章发表情况、药物干预种类、研究领域、样品来源、芯片平台、芯片技术重复、差异基因评判标准和验证性等方面总结基于基因芯片技术传统和天然药物防治肿瘤的相关经验和成果,深入分析该技术应用的不足之处。结果:基因筛选实验多局限在细胞水平,应该更加关注动物水平和临床水平的实验;在芯片平台的选择上,学者多关注m RNA的表达水平的差异,而对于基因调控水平和表观遗传研究的micro RNA芯片和DNA甲基化芯片关注度较少;基因芯片实验缺少重复性,直接影响差异基因的评判结果,降低了差异基因筛选的可信度;基因筛选结果的验证,不仅包括m RNA水平的验证,还应该增加蛋白水平的验证。结论:基因芯片是目前最为成熟的基因表达水平检测技术之一,在传统和天然药物抗肿瘤的研究领域应用广泛,研究者在实验设计中如果涉及到了基因芯片技术,应该尽量避免上述的不足之处。

核苷类似物对小鼠中枢神经线粒体毒性研究

目的探讨长期使用核苷类似物是否产生中枢神经元线粒体损伤。方法取7周龄Balb/C小鼠40只,分为4组,每组10只。实验组每天分别喂饲司它夫定(D4T)50 mg/kg、齐多夫定(AZT)100 mg/kg和拉米夫定(3TC)50 mg/kg,每周5 d,连续16周;对照组喂服双蒸水。通过激光单细胞捕获技术抓取小鼠大脑皮层神经元,每组200个细胞,通过实时定量PCR观察线粒体DNA(mtDNA)含量变化。结果 COXⅡ基因扩增显示,喂饲核苷类似物可明显减低小鼠大脑皮层神经元mtDNA拷贝数,其中D4T组减少至对照组的(22.2±3.2)%,AZT组减少至对照组的(53.6±7.1)%,3TC组减少至对照组的(34.6±8.2)%。同时,与对照组相比,ND4基因扩增显示,mtDNA主环拷贝数明显减低,D4T、AZT、3TC组分别为对照组的(25.2±7.3)%、(46.3±9.1)%和(42.3±7.4)%。与对照组比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。但是,3组ND1基因扩增显示,mtDNA小环拷贝数依次为对照组的(67.7±5.2)%、(53.5±9.2)%和(94.4±8.3)%。AZT与对照组比较,mtDNA小环拷贝数明显降低(P﹤0.05),其他两组与对照组比较则无明显变化。结论长期使用核苷类似物可产生小鼠神经元mtDNA损伤,且以主环缺失为主。

抗ICAM-5单克隆抗体的制备及实验研究

目的制备抗细胞间黏附分子5(intercellular adhesion molecule-5,ICAM-5)单克隆抗体(McAb)并进行实验研究。方法采用淋巴细胞杂交瘤技术制备小鼠源性单克隆抗体。采用ELISA法测定腹水ICAM-5McAb的效价,通过免疫荧光技术及Western blotting检测McAb的抗体特异性。结果获得3株分泌ICAM-5McAb的杂交瘤细胞株。ELISA检测效价可达1∶(4×105),免疫荧光与Western blotting显示3株McAb与ICAM-5分子具有良好的结合活性。结论成功制备了抗ICAM-5的McAb,为其进一步研究和应用奠定了基础。

脂质代谢相关新基因与肝肿瘤发生研究进展

研究发现,恶性肿瘤存在基因异常和代谢异常,后者表现在能量代谢的异常较突出,而作为肿瘤能量来源底物的脂肪酸代谢研究并不多见。本文讨论了与脂质代谢相关的新基因,如ALDOC、TUBB5、ANXA2、FABP4、ApoA1和AOP1,CIDE家族蛋白(Cidea、Cideb、Fsp27),在产生癌症相关性恶病质中起关键作用的脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)和激素敏感性脂肪酶(HSL),长链酰基辅酶A脱氢酶(ACADL),SCD1、FASN或ACC1等。由于肿瘤细胞与正常细胞在能量代谢上存在明显的差异,因此根据这种区别以能量代谢途径上的某个分子作为肿瘤治疗的靶点是完全有可能的。

北方汉族和蒙古族人群中运动能力差异相关基因ACTN3多态性研究

目的调查北方汉族与蒙古族人群α-辅肌动蛋白3(ACTN3)基因R577X多态性频率分布特征。方法2019年9-11月选择在北京佑安医院参与健康体检的北方汉族人群85名和包头医学院蒙古族2019级预科班的健康体检人群58名作为研究对象。用高通量荧光实时定量聚合酶链式反应分析不同种族、性别ACTN3基因R577X多态性。结果3种基因型在不同组人群中均符合Hardy-Weinberg平衡。北方汉族基因型频率(RR)、等位基因频率(R)高于蒙古族人群,差异有统计学意义(P<0.05)。北方汉族、蒙古族人群不同性别ACTN3基因R577X基因型分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。北方汉族与蒙古族不同性别的不同基因型频率、等位基因频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论北方汉族与蒙古族人群ACTN3基因R577X基因型频率和等位基因频率差异与性别无关,与爆发力相关的RR基因型频率在北方汉族人群中较高,反映耐力的XX基因型频率在蒙古族人群中较高。