三亚市汉族和黎族女性MTHFR与MTRR基因多态性分布特征

目的分析三亚市汉族和黎族女性5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)与甲硫氨酸合成酶还原酶(methionine synthase reductase,MTRR)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)分布特征,为个体化指导女性增补叶酸及预防出生缺陷提供依据。方法以三亚市420例黎族女性及1 590例汉族女性为研究对象,采集其口腔黏膜上皮细胞,提取基因组DNA,采用荧光定量PCR方法对MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因位点多态性进行检测分析,并与其他已报道的民族进行比较。结果三亚市黎族女性MTHFR C677T位点基因多态性分布与思南苗族、延边朝鲜族、南宁壮族、乌苏哈萨克族、银川回族、新疆维吾尔族、张家界土家族相比均有显著性差异(P <0.05)。MTHFR A1298C位点基因多态性分布与三亚汉族、思南苗族、延边朝鲜族、银川回族、张家界土家族相比均有显著性差异(P <0.05)。MTRR A66G位点基因多态性分布与三亚汉族、思南苗族、延边朝鲜族、南宁壮族、银川回族、张家界土家族相比均有显著性差异(P <0.05)。结论三亚市黎族女性MTHFR和MTRR基因多态性分布不同于其他民族,具有民族特异性。

三亚地区综合性医院213株产ESBLs肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药性基因的检测

目的了解三亚市人民医院肺炎克雷伯菌的标本来源及耐药基因情况,为临床合理用药和控制院内感染提供依据。方法从2013年1月至2014年12月各临床送检标本中分离肺炎克雷伯菌,采用Phoenix-100全自动细菌鉴定药敏系统进行药敏试验,按照标准纸片扩散法进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型的筛选和确证,依据当年的美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准判读结果,用WHONET 5.6软件对所有数据进行统计分析。用聚合酶链反应(PCR)对213株产ESBLs的肺炎克雷伯菌进行常见的几种的耐药基因进行检测。结果分离并确认213株产ESBLs肺炎克雷伯菌,标本来源主要是痰、呼吸道分泌物,占78.4%;其次是分泌物标本和中段尿,分别占8.92%和5.2%。对头孢噻肟耐药率最高(98.1%);对亚胺培南的耐药率最低(2.86%)。213株产ESBLs肺炎克雷伯菌中有195株能检测到1个或多个耐药基因,分别为CMY,CTX,TEM,SHV,DHA1和KPC,其检出率分别为6.10%、76.53%、59.62%、76.06%、12.21%和2.82%。结论该院肺炎克雷伯菌主要分离自痰、呼吸道分泌物,对常用抗菌药物均产生了一定的耐药性,应进一步了解该院产ESBLs菌株的耐药基因的分布,预防医院感染的发生和多重耐药菌的产生。

三亚地区妇女人乳头瘤病毒感染的分子流行病学调查

目的分析三亚地区妇女人乳头瘤病毒(HPV)的感染状况以及病毒亚型在人群中的分布情况。方法采用核酸分子快速导流杂交技术,对2009年2月至2011年4月在三亚地区医院妇产科门诊就诊的2 302例妇女进行生殖道21种HPV基因型的筛查。结果 2 302例妇女中共检出HPV阳性562例,阳性率为24.41%,其中≤20岁年龄组HPV阳性率最高(36.00%),阳性率随年龄增加呈下降趋势。多重感染比例为58.54%,以二重感染最多见。HPV基因型检出率由高到低依次为:HPV16(21.06%)、HPV6(14.16%)、HPV58(13.02%)、HPV18(9.63%)、HPV52(9.29%)、HPV11(6.80%)、HPV31(6.34%)、HPVCP8304(5.21%)、HPV42(3.06%)、HPV53(2.04%)、HPV51(1.70%)、HPV66(1.70%)、HPV68(1.02%)、HPV33(0.91%)、HPV39(0.68%)、HPV44(0.68%)、HPV35(0.57%)、HPV45(0.57%)、HPV56(0.57%)、HPV43(0.57%)、HPV59(0.45%)。结论三亚地区妇女HPV感染率及多重感染率均较高,HPV常见高危型别依次为16、58、18、52和31型,分布具有一定区域性。

海南地区多重耐药肠杆菌科细菌产NDM-1酶现状调查

目的了解海南地区多重耐药肠杆菌科细菌产新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1酶)现状,为临床做好预防和控制提供依据。方法收集海南地区2012年8月至2013年8月临床分离的多重耐药肠杆菌科细菌425株,采用Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定和药敏试验,对亚胺培南最低抑菌浓度(MIC)≥2μg/mL的菌株采用双纸片增效试验进行NDM-1表型确认,PCR特异性扩增blaNDM-1基因,并对扩增产物进行测序和BLAST比对分析。结果 425株多重耐药肠杆菌科细菌中,大肠埃希菌271株,占63.8%;肺炎克雷伯菌69株,占16.2%;阴沟肠杆菌41株,占9.6%;其他肠杆菌44株,占10.4%。经表型筛查对亚胺培南MIC≥2μg/mL的菌株有38株,双纸片增效试验有18株阳性,其中11株在约813 bp处扩增出blaNDM-1基因目的条带,经测序和比对结果证实为blaNDM-1基因。结论海南地区多重耐药肠杆菌科细菌中检到blaNDM-1基因,临床应加强合理用药并做好预防和控制工作。

三亚地区神经症状患者莱姆病血清筛查分析

目的了解三亚地区神经症状患者的莱姆病感染情况,为临床诊断该病提供参考。方法收集三亚地区251例神经系统症状就诊的患者血清标本,采用间接免疫荧光法(IFA)检测莱姆病抗体,对初筛阳性标本使用蛋白免疫印迹法(Western blot)进行确证。结果 IFA法检测251例神经症状患者血清,阳性42例,初筛阳性率16.73%。42例初筛阳性标本应用Western blot法复检,阳性10例,阳性率3.98%。结论三亚地区神经症状患者已检出莱姆病,因此神经症状就诊的患者应考虑是否感染莱姆病病原体。

海南省三亚地区珠蛋白生成障碍性贫血的基因分型研究

目的初步对三亚地区人群珠蛋白生成障碍性贫血(简称地贫)进行基因分型以了解该地区地贫患病率及其高发的基因类型。方法收集1 164例外周血,用跨跃断裂点聚合酶链反应及反向斑点膜条杂交技术进行地贫基因分型检测。结果 1 164例外周血中。地贫344例(29.55%),β地贫92例(7.90%),αβ复合型地贫10例(0.86%)。地贫阳性率为38.3%。α地贫前4位的基因型及基因构成比分别是:-α^(3.7)/αα(128例)37.20%、-α^(4.2)/αα(82例)23.84%、——^(SEA)/αα(50例)14.53%、-α^(3.7)/-α^(4.2)(38例)11.05%;β地贫前4位的突变位点名称分别是:CD41-42(66例)、IVS-Ⅱ-654(12例)、-28(6例)、-29(4例)。结论三亚地区地贫以α地贫为主,具有区域性的特点,且发生率较高,加强对育龄人群的地贫全面筛查及基因诊断。

三亚地区呼吸道感染者肺炎支原体IgM抗体检测结果分析

目的分析三亚地区呼吸道感染者肺炎支原体(MP)感染情况。方法采用间接免疫荧光法对2014年1~12月就诊的2 942例呼吸道感染患者血清Ig M抗体进行检测分析。结果 2 942例患者中MP-Ig M阳性616例,总阳性率20.94%,男性阳性率为18.42%(337/1 830)、女性阳性率25.09%(279/1 112),女性阳性率高于男性,两者比较差异有统计学意义(P<0.01);≤2岁组阳性率最高(27.57%,169/613),≥60岁组最低(14.67%,104/709),各年龄组间阳性率差异有显著统计学意义(P<0.01);MP感染者全年均有发病,4~10月份为本地区的发病高峰期。结论三亚地区MP总感染率不高,女性高于男性,婴幼儿及学龄前儿童为高危感染人群,临床上应加强对MP的监控。

三亚地区血流感染病原菌分布及常见菌株耐药性分析

目的：了解三亚地区血流感染病原菌的流行分布和耐药情况，为临床医生合理使用抗菌药物提供科学依据。方法采用上海奥普双相血培养瓶（2011年1~5月）和美国BD BACTEC FX全自动血培养仪（2011年6月至2013年8月）进行血培养，用美国BD Phoenix l00自动细菌鉴定仪和珠海迪尔的DL-96细菌鉴定系统进行生化鉴定和药物敏感性分析。结果血培养阳性率为8.68%，其中革兰氏阴性杆菌占55.32%，革兰氏阳性球菌占40.62%，真菌占2.9%。革兰氏阴性菌排名前三位的是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、假鼻疽伯克霍尔德菌；革兰氏阳性菌则以金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和其他凝固酶阴性葡萄球菌为主。哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星对血流感染的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌敏感率均〉90.0%。未发现碳青霉烯类耐药的革兰氏阴性杆菌。MRCNS的检出率明显高于MRSA，尚未发现万古霉素和利奈唑胺耐药的葡萄球菌。结论我院血流感染的病原菌种类较多，临床医生应掌握本地区细菌分布情况和耐药特征，根据药敏结果和患者情况采取有效的治疗方案，这对提高治愈率和控制耐药菌株的泛滥具有十分重要的意义。

2019年三亚市某医院细菌耐药性监测结果分析

目的了解海南省三亚市某医院临床分离菌对临床常用抗菌药的敏感性和耐药性。方法收集2019年1月1日-2019年12月31日海南省三亚市某医院临床分离株,细菌鉴定和药敏试验采用细菌鉴定药敏分析仪进行测定,并用纸片扩散法补充进行。根据美国临床和实验室标准化协会标准判断结果,用WHONET 5.6软件进行数据分析。结果2019年共收集临床分离株共3853株,其中革兰阳性菌858株,占22.27%,革兰阴性菌2603株,占67.56%。金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中甲氧西林耐药株的平均检出率分别为11.29%和43.31%。甲氧西林耐药株对多数测试药的耐药率均高于甲氧西林敏感株,未发现耐万古霉素的菌株。粪肠球菌对多数测试抗菌药的耐药率均低于屎肠球菌,未发现万古霉素的耐药株。肺炎链球菌非脑膜炎株对青霉素的耐药率为6.25%。鲍氏不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为29.21%和34.92%。铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为1.57%和1.83%。结论临床应加强细菌耐药监测,遏制耐药细菌的进一步流行播散。

血清学指标联合卵巢癌风险预测模型指数在卵巢癌诊断中的应用价值

目的分析人附睾分泌蛋白4(human epididymis protein 4,HE4)、糖类抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)、高迁移率族蛋白A2(high mobility group protein A2,HMGA2)、基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)及卵巢癌风险预测模型(risk of ovarian malignancy algorithm,ROMA)指数在卵巢癌诊断中的应用价值。方法选取2020年1月至2022年5月海南省海口市中医医院收治并经病理证实的100例卵巢癌患者作为恶性卵巢肿瘤组,并以同期收治的100例良性卵巢肿瘤患者作为良性卵巢肿瘤组、100例健康体检女性作为对照组,检测HE4、CA125、HMGA2、MMP-1水平,计算ROMA指数,比较三组上述指标的差异,并绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估HE4、CA125、HMGA2、MMP-1和ROMA指数对卵巢癌的诊断价值。结果恶性卵巢肿瘤组血清HE4、CA125、HMGA2、MMP-1水平高于良性卵巢肿瘤组和对照组,良性卵巢肿瘤组血清CA125、HMGA2水平高于对照组(P<0.05),而血清HE4、MMP-1水平与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。ROC曲线分析显示,HE4、CA125、HMGA2、MMP-1联合诊断卵巢癌的敏感度为83.00%,曲线下面积为0.787,均高于各项单独检测;ROMA指数诊断卵巢癌的敏感度为86.00%,曲线下面积为0.832,高于HE4、CA125、HMGA2、MMP-1联合诊断;HE4、CA125、HMGA2、MMP-1及ROMA指数联合诊断卵巢癌的敏感度为96.00%,曲线下面积为0.931,高于HE4、CA125、HMGA2、MMP-1联合及ROMA指数单独诊断(P<0.05)。结论血清HE4、CA125、HMGA2、MMP-1水平联合ROMA指数对卵巢癌的诊断价值较高,有利于卵巢癌的早期诊断及治疗,值得临床应用。

类鼻疽肺炎的临床特征与CT影像学表现

【目的】归纳与分析类鼻疽肺炎的临床特征与CT影像学表现,以提高对其的认识。【方法】回顾性分析2012年1月1日至2023年4月1日间68例类鼻疽肺炎的临床与CT影像资料。【结果】在68例确诊患者中,62例患者为急性感染,6例患者为慢性感染。88.2%患者为男性,85.3%患者是海南原籍居民,85.3%患者职业为农民,77.9%患者发病于夏、秋两季,66.2%患者有糖尿病,100%患者的首发临床症状为发热。88.2%患者经血液培养试验阳性确诊。多数患者的白细胞计数、中性粒细胞比例、C-反应蛋白以及降钙素水平升高,而淋巴细胞比率则普遍下降,但是在急性感染和慢性感染组间的差异无统计学意义(P>0.05)。36.8%患者治愈,42.6%患者较治疗前好转,11.8%患者迁延不愈,8.8%患者死亡。肺内病变在CT图像上的形态主要表现为结节或肿块、斑片状磨玻璃影和大片状实变影,三种形态可同时并存。急性感染和慢性感染组的影像学表现差异在于主要的病变形态(P=0.01),其余的影像征象的差异并无统计学意义。此外,36.8%患者出现肺外感染,其中8.8%患者为多部位脓肿形成。【结论】对于有疫区旅居史、糖尿病、高热、病情进展迅速的患者,并且CT提示肺内存在多发炎症性病灶,医务人员应提高对此病的警惕。

无乳链球菌致眼内炎1例

无乳链球菌(S.agalactiae)属于链球菌属,是一种兼性厌氧革兰阳性球菌,触酶阴性,最早在20世纪30年代因引起奶牛的牛乳腺炎而得名。无乳链球菌定植于消化道和泌尿生殖道,定植率为15%~30%[1],是引起妊娠孕产妇围产期感染和新生儿败血症、脑膜炎等的重要病原菌之一[2-3]。近年来,非妊娠无乳链球菌有较多的病例报道,主要见于伤口等,而对于眼睛部位的感染尚未见报道。我院从角膜脓性分泌物中分离出无乳链球菌1例,报道如下。

海南省关节炎和神经系统疾病患者莱姆病调查

目的了解我国海南省关节炎或神经性疾病患者的莱姆病感染状况,并确认海南省是否存在莱姆病人。方法海南省三亚市人民医院提供血清542份,均为关节炎或神经性疾病患者。采用间接免疫荧光法(Indirect Fluorescent-Antibody Test,IFA)和免疫印迹法(Western Blot,WB)对血清标本进行莱姆病抗体检测;并采用巢式PCR法对WB抗体阳性的血清标本进行病原学检测。结果 IFA方法检测血清样本542份,54份阳性,阳性率为9.96%。应用WB法对上述54份IFA阳性血清样本进行检测,12份阳性。采用巢式PCR方法检测12份WB阳性样本,2份阳性,测序结果表明两份均为B.garinii基因型。结论本研究证实了海南省人群中存在莱姆病。建议当地医生在诊治关节炎和神经性疾病患者时,可以考虑其是否罹患莱姆病。

特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法的建立和优化

目的以16S rRNA编码序列为靶基因,建立特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法并优化。方法以类鼻疽伯克霍尔德菌标准菌株K96243的16S rRNA编码序列为靶序列,通过Primer Premier 5软件搜索特异的引物,以该菌为模板,优化特异引物PCR的退火温度、退火时间和反应循环数等条件。得到最优PCR反应条件后,将该方法用于检测临床分离的类鼻疽伯克霍尔德菌菌株和常见细菌感染病原体(大肠杆菌、痢疾志贺菌、伤寒沙门菌、幽门螺旋杆菌、金黄色葡萄球菌、甲型链球菌和乙型链球菌),评价该方法的有效性和特异性。结果共设计3对引物,分别扩增16S rRNA编码序列283～672、760～1 061、771～1 193片段,优化后PCR反应条件为:94℃预变性4 min,94℃变性40 s,54.5℃退火20 s,72℃延伸40 s,24个循环,最后延伸1 min;特异性分析发现此方法能将类鼻疽伯克霍尔德菌与其他常见感染病原菌进行有效地鉴别诊断。结论成功建立并优化一种快速鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌的方法,通过此方法能有效的从单个菌落中和基因组水平鉴定临床分离的8株类鼻疽伯克霍尔德菌。

海南1例感染类鼻疽伯克霍尔德菌的溯源调查

目的对海南1例类鼻疽患者进行感染溯源调查,为类鼻疽防控提供科学依据。方法采集患者住所周边环境中的泥土、水等样品并进行类鼻疽病原菌分离。通过细菌学试验、16SrDNA测序、特异诊断PCR等方法对疑似菌株进一步鉴定。通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)、多位点可变数串联重复序列分析(MLVA_4)等技术比较并确定环境分离菌株与临床菌株的同源性。结果采集的58份环境样品中,自患者及邻居家水井水中共分离出3株类鼻疽伯克霍尔德菌(简称类鼻疽伯克菌)。PFGE、MLST、MLVA等分子分型结果证实,1株自患者家井水中分离的类鼻疽伯克菌与患者临床分离株同源。结论患者及其邻居家水井均被类鼻疽伯克菌污染,水井水很可能是该患者感染类鼻疽病的感染源。

脂蛋白相关磷脂酶A2与缺血性脑卒中的相关性研究

目的探讨脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)与缺血性脑卒中的相关性。方法选取2016年4月-2019年12月海南省三亚市人民医院收治的缺血性脑卒中患者94例作为研究组,并根据入院时美国国立卫生研究院卒中量表评分(NIHSS)将患者分为神经功能缺损轻度组31例、中度组49例、重度组14例;根据出院时改良Rankin量表评分(mRS)将患者分为预后不良组25例、预后良好组69例;另同期体检健康者92例作为对照组。比较各组血清Lp-PLA2水平,分析Lp-PLA2与患者神经功能缺损及预后的关系。结果研究组血清Lp-PLA2水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。重度组血清Lp-PLA2水平高于中度组、轻度组;中度组血清Lp-PLA2水平高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson分析显示,Lp-PLA2与神经功能缺损呈正相关(r=0.779,P=0.000)。预后不良组血清Lp-PLA2水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,Lp-PLA2是患者短期预后不良的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,Lp-PLA2预测患者短期预后的AUC为0.802,最佳临界值为370.57,灵敏度为72%、特异度为81.2%。结论Lp-PLA2与缺血性脑卒中发生、发展密切相关,是评估患者神经功能缺损程度的重要指标,对患者短期预后具有一定预测价值。

下呼吸道感染患者血清维生素D水平分析

目的探讨下呼吸道感染患者血清维生素D水平变化及其与下呼吸道感染的关系,为临床治疗提供依据。方法收集该院下呼吸道感染患者156例和健康体检者60例分别作为感染组和健康对照组,对感染组痰标本进行细菌培养鉴定,并分析两组血清维生素D水平。结果感染组、健康对照组血清维生素D水平分别为25.76、49.81ng/mL,差异有统计学意义(P<0.01)。感染组中肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、真菌感染患者血清维生素D水平分别为(25.79±7.17)、(24.11±10.27)、(27.76±9.27)、(24.79±6.95)、(22.93±3.71)和(30.59±21.31)ng/mL,与健康对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论下呼吸道感染患者血清维生素D水平低于健康人群,其水平与下呼吸道感染存在关联,但具体机制有待进一步研究。

三亚市幼儿园2019年儿童蛲虫感染状况

目的了解三亚市幼儿园儿童的蛲虫感染现状,为该地区儿童的蛲虫病防治提供科学依据。方法分层整群随机抽取三亚市城区和农村18所幼儿园1234名儿童为调查对象,连续3 d采用圆底试管透明胶带肛周粘贴法采集肛拭标本,用显微镜进行观察。结果蛲虫卵阳性者280名,感染率为22.69%。男童感染率为22.92%,女童为22.43%,差异无统计学意义(χ~2=0.04,P>0.05)。小班感染率为19.77%,中班为22.5%,大班为25.23%,各年级间差异无统计学意义(χ~2=3.34,P>0.05)。城区幼儿园儿童感染率为18.10%,农村幼儿园儿童为26.91%,差异有统计学意义(χ~2=13.60,P<0.01)。汉族儿童感染率为19.50%,回族儿童为19.29%,黎族儿童为35.46%,各民族间差异有统计学意义(χ~2=29.29,P<0.01)。父/母文化程度为初中及以下的儿童感染率最高(父亲为27.02%,母亲为26.45%),并且感染率随着父/母文化程度的提高而下降,差异有统计学意义(χ~2值分别为9.94,8.32,P值均<0.05)。结论三亚市幼儿园儿童的蛲虫感染率较高,建议相关部门采取综合性防治措施,降低蛲虫感染率。

miR-106a-5p通过调控TLR4表达对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-106a-5p通过调控TLR4对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外培养RA滑膜成纤维细胞MH7A,将细胞分为8组:miR-NC组(转染miR-NC)、miR-106a-5p组(转染miR-106a-5p)、si-NC组(转染siNC)、si-TLR4组(转染si-TLR4)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-106a-5p组(转染anti-miR-106a-5p)、miR-106a-5p+pcDNA组(共转染miR-106a-5p和pcDNA)以及miR-106a-5p+TLR4组(共转染miR-106a-5p和TLR4)。采用qRT-PCR检测RA患者滑膜中miR-106a-5p和TLR4 m RNA的表达;MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blotting检测TLR4、PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达;双荧光素酶实验验证miR-106a-5p和TLR4关系。结果:与对照组相比,RA滑膜组织中miR-106a-5p表达明显降低(P<0.05),TLR4 mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-106a-5p组的miR-106a-5p表达、细胞凋亡率和Bax蛋白表达明显增加(P<0.05);48 h及72 h的细胞OD值、PCNA和Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05)。与si-NC组相比,si-TLR4组的TLR4 mRNA及蛋白表达、48 h及72 h的细胞OD值、PCNA和Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05);细胞凋亡率和Bax蛋白表达明显增加(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-106a-5p组的TLR4-WT荧光素酶活性明显降低(P<0.05),而TLR4-MUT荧光素酶素酶活性无明显变化。与anti-miR-NC组相比,anti-miR-106a-5p组中miR-106a-5p表达明显降低(P<0.05),TLR4蛋白表达明显增加(P<0.05)。与miR-106a-5p+pcDNA组相比,miR-106a-5p+TLR4组的TLR4 mRNA及蛋白表达、48 h及72 h的细胞OD值、PCNA和Bcl-2蛋白表达明显增加(P<0.05);细胞凋亡率和Bax蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:miR-106a-5p通过下调TLR4抑制滑膜成纤维细胞MH7A的增殖,并诱导其细胞凋亡。

类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统BPSS1617蛋白的重组表达及其抗体制备

目的构建重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1617,并制备其抗体。方法采用PCR扩增BPSS1617全长序列,克隆至原核表达载体p ET-22b,将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,免疫新西兰兔,制备其多克隆抗体,并通过Western blot、免疫荧光和ELISA检测抗体的特异性,并分析该蛋白在类鼻疽杆菌中的亚细胞定位。结果成功扩增类鼻疽杆菌BPC006株基因组中的BPSS1617基因;酶切和测序验证重组表达质粒p ET-22b-BPSS1617构建成功;经IPTG诱导表达、包涵体洗涤、纯化以及变性复性,成功获得纯度>95%,分子量为25×103的目的蛋白;将纯化的BPSS1617重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗BPSS1617蛋白多克隆抗体,经实验验证其特异性良好;同时BPSS1617蛋白主要定位于类鼻疽杆菌的细胞质中。结论成功构建、表达、纯化获得BPSS1617蛋白,并成功制备了其特异性多克隆抗体,并且该蛋白定位于类鼻疽杆菌的细胞质中。