胃癌细胞外泌体lncRNA LOXL1-AS1诱导M2型巨噬细胞极化功能及机制研究

目的:探究胃癌细胞外泌体lncRNA LOXL1-AS1对巨噬细胞分化的影响及机制。方法:差速离心法提取胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901、MKN-45和人胃黏膜细胞GES-1所分泌的外泌体(分别记为MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo和GES-1 exo),人单核细胞系TH-1加入PMA诱导其分化为M0型巨噬细胞,将10μg/mL的GES-1 exo、MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo以及等体积的PBS分别与M0型巨噬细胞共孵育48 h后,qRT-PCR检测各组细胞中TNF-α、CCR7、Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达,流式细胞术检测各组细胞CD206和CD14表达,Western blot检测各组细胞ERK和STAT3磷酸化水平。在MKN-45细胞中分别转染lncRNA LOXL1-AS1过表达质粒(lncRNA LOXL1-AS1)和空白质粒(Vector)后提取各组细胞分泌的外泌体(记为lncRNA LOXL1-AS1 exo和Vector exo),将10μg/mL的lncRNA LOXL1-AS1 exo和Vector exo分别与M0型巨噬细胞共孵育,检测孵育后各组细胞TNF-α、CCR7、Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达以及ERK和STAT3磷酸化水平。结果:本文所提取的外泌体符合其结构和生物学特征。相比于PBS组,MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo组细胞TNF-α、CCR7表达显著下调(P<0.01),Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达均显著上调(P<0.01),CD206+CD14+细胞所占比例显著增加(P<0.001),ERK和STAT3磷酸化水平显著增加(P<0.001)。相比于Vector exo组,lncRNA LOXL1-AS1 exo组中lncRNA LOXL1-AS1表达显著上调(P<0.001)。相比于Vector exo组细胞,lncRNA LOXL1-AS1 exo组巨噬细胞中Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达均显著上调(P<0.001),CD206^(+)CD14^(+)细胞所占比例显著增加(P<0.001),ERK和STAT3磷酸化水平显著增加(P<0.001)。结论:胃癌细胞外泌体中lncRNA LOXL1-AS1可显著促进巨噬细胞的M2型极化,其机制可能与激活ERK/STAT3信号通路相关。

黄芪建中汤对肝纤维化大鼠JAK/STAT信号通路的调节作用研究

目的:观察黄芪建中汤对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠JAK/STAT信号通路的调节作用。方法:60只大鼠随机分为对照组、模型组、黄芪建中汤组及阳性对照组,15只/组,除对照组外,其余大鼠采用腹腔注射四氯化碳的方法建立肝纤维化大鼠模型,黄芪建中汤组根据大鼠体重按照10 ml/kg的的剂量灌胃给予大鼠黄芪建中汤,阳性对照组灌胃给于大鼠秋水仙碱(0.2 mg/kg),1次/d,连续给药60 d,检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、透明质酸酶(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)水平、大鼠肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)水平、肝组织JAK2、STAT3 mRNA及各组大鼠肝组织JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达,采用苏木精-伊红染色法(HE)及Masson染色对大鼠肝组织病理学进行检查。结果:给予肝纤维化模型大鼠黄芪建中汤后,黄芪建中汤组大鼠血清ALT、AST、ALP、GGT[(43.49±0.56)、(47.36±1.05)、(78.46±1.46)、(3.33±0.17)]U/L,HA、LN、PCⅢ、ColⅣ[(146.44±2.63)、(91.60±1.86)、(102.41±1.71)、(41.60±1.38)]ng/ml水平,大鼠肝组织MDA(4.36±0.13)nmol/mg prot、TNF-α(113.44±1.40)ng/mg、IL-1β及IL-6[(156.90±1.64)、(125.07±1.41)]pg/mg水平、肝组织中JAK2(1.24±0.17)及STAT3(1.31±0.26)m RNA水平及JAK2(0.59±0.08)、STAT3(0.70±0.06)、p-JAK2/JAK2(0.51±0.04)及p-STAT3/STAT3(0.47±0.09)水平较模型组肝纤维化大鼠显著降低(P<0.05),SOD(100.94±1.26)U/mg prot活性升高(P<0.05),肝组织病理学改善。结论:黄芪建中汤组能够明显改善大鼠肝功能,降低肝纤维化大鼠肝纤维化水平及肝脏氧化应激损伤,其机制可能与调节JAK/STAT信号通路有关。