肿瘤细胞免疫原性死亡相关分子的研究进展

用多种化学药物和放射线治疗肿瘤时,肿瘤细胞可发生免疫原性细胞死亡,即肿瘤细胞在发生凋亡的同时,由非免疫原性的细胞转变为具有免疫原性的细胞,并在机体内激发抗肿瘤免疫效应。肿瘤细胞的免疫原性死亡是一种有多种信号分子和细胞因子参与的复杂过程,这些分子的细胞定位和表达水平的改变直接影响死亡肿瘤细胞与免疫细胞之间的相互作用。对肿瘤细胞免疫原性死亡机制的深入研究可为肿瘤的免疫治疗提供新的依据和手段。本文简要综述了与肿瘤细胞免疫原性死亡相关分子的研究进展。

Toll样受体调控适应性免疫应答的研究进展

Toll样受体(TLR)属于天然免疫受体,可通过模式识别受体识别病原相关分子模式的识别分子激活固有免疫应答。TLR在适应性免疫应答调控过程中也发挥重要作用,是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁。TLR信号通路不仅可通过调控树突状细胞的发育和成熟影响抗原提呈,还可调控抗原提呈细胞表面共刺激分子的表达来调控适应性免疫应答;而且,TLR信号通路可调控多种细胞因子的分泌,从而影响T细胞发育和成熟,调控适应性免疫应答。本文将就TLR信号通路调控适应性免疫应答的研究进展进行综述。

重组天花粉蛋白研究进展

目的天然天花粉蛋白(TCS)是一种拥有抗肿瘤、抗病毒的核糖体失活蛋白,但在临床应用时有细胞毒性强和诱导严重过敏反应等不良反应。利用基因工程技术和化学修饰的方法对天然TCS进行改造和修饰,以期获得高效、低毒和低免疫原性的TCS供临床和研究使用,是当前研究的热点课题,文章综述了该领域的新近研究进展。

EZH2作为抗肿瘤免疫治疗靶点研究进展

多梳蛋白复合体(PcG)的核心亚基zeste基因增强子同源物2(Enhancer of zeste homolog2,EZH2)是一种组蛋白甲基转移酶,参与维持细胞密度、干细胞多能性、细胞周期调节等重要的生理作用。研究发现,EZH2在多种肿瘤组织中高表达,是促进肿瘤发生和发展的致癌因子。由于EZH2在正常组织中低表达或者不表达,使其新近被鉴定为一种肿瘤相关抗原。已经在EZH2蛋白分子中鉴定出多条特异性抗原肽,这些抗原肽能激发机体免疫细胞对EZH2表达异常增高肿瘤细胞的杀伤活性。上述研究提示,EZH2可能是一种新的抗肿瘤治疗分子靶点,并在肿瘤免疫治疗中具有潜在的应用价值。就该领域的最新研究进展作一简要综述。

小鼠精胺氧化酶基因启动子结构和功能研究

目的:克隆和鉴定小鼠精胺氧化酶(mSMO)启动子DNA序列。方法:用Trizol试剂法从小鼠成纤维细胞中提取总RNA,应用5’-RACE法获得mSMO的转录起始位点;巢式PCR方法克隆含有mSMO启动子的DNA序列,并由此构建5’端系列截短的mSMO启动子荧光素酶报告质粒;将报告质粒瞬时转染Cos7细胞后,用荧光素酶分析法测定启动子活性。结果:确定mSMO基因至少有6个转录起始位点(+1,+4,+27,+31,+51,和+63),且均定位于外显子1中。克隆获得mSMO基因转录起始位点上游大约2.1kb的DNA片断,以此片段为基础构建了11个5’端系列截短的启动子报告质粒。报告基因分析证实,该上游DNA片段具有启动子活性,截短至-615和-176bp时,获得2个启动子活性峰值,截短至-373bp时启动子活性最低。结论:mSMO基因含有多个转录起始位点,其上游-176～+124bp为mSMO核心启动子区,-615～-176bp区为重要的转录调控区。

Betatrophin与糖尿病的研究进展

补充胰岛再生β细胞的数量被认为是一个潜在治疗糖尿病的一个靶点。最近研究证实胰岛再生激素(Betatrophin)具有高效、显著提高β细胞增殖的能力,并且可显著提高糖耐受的能力。Betatrophin的发现为糖尿病的治疗提供了新型的治疗机会。以往的研究主要集中于它的特征和功能以及胰腺β细胞的增殖情况,本文则对Betatrophin与糖尿病的最新进展进行总结。

鸟氨酸脱羧酶抗酶1抗肿瘤机制研究的新进展

鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)是多胺诱导的一种能反馈性负控多胺合成和多胺运输的蛋白,作为多胺"传感器"灵敏地监控和调节胞内多胺水平。近年来的研究发现,OAZ1能与多种重要的蛋白因子相互作用,抑制它们的活性,并介导它们以非泛素化形式被26S蛋白酶体降解,由此调控细胞周期、中心体复制、DNA损伤修复等重要的生理过程。

microRNA及其作用靶点在肿瘤研究和治疗中的作用

MicroRNAs通过阻抑翻译或降解RNA来调节靶基因，包括肿瘤相关基因的表达，在肿瘤发生过程中起到重要的作用。探索基于mieroRNA的肿瘤治疗方法是当前世界领域的研究热点。本文就miRNA对肿瘤相关基因表达的影响厦其机制的研究进展作简要综述。

微RNA和心血管疾病的研究进展

微RNA（microRNA，miRNA）是一类长度很短的非编码蛋白质的单链小分子RNA，广泛存在于多细胞生物和病毒体内，是一种起负调控作用的分子，主要通过核酸序列互补匹配结合到特定的靶mRNA上，抑制靶mRNA翻译过程或降解靶mRNA。目前越来越多的研究结果显示，miRNA的表达及功能失调可能导致心血管疾病的发生。现将对这方面的最新研究进展综述如下。

微RNA在骨肉瘤中的研究进展

微RNA（miRNA）是一类长度为21 ～23个核苷酸的调控性小RNA分子,通过mRNA剪切和抑制蛋白质翻译两种方式,负性调控其靶基因.miRNA可以调控约50％的蛋白编码基因,并且参与了包括细胞分化、细胞凋亡等在内的多种生理过程.近年来发现,miRNA在肿瘤相关方面发挥重要作用.该文从miRNA在骨肉瘤中的发生发展、侵袭转移、与药物的协同作用及在血液循环当中的应用4个方面予以综述,并对miRNA在骨肉瘤方面的前景进行展望.

四丁基丙二胺对人MG63骨髓瘤细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响

目的分析新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutylpropanediamine,TBP)对人骨髓瘤MG63细胞生长的影响及其机制。方法 MTT法用于分析细胞增殖,流式细胞分析用于细胞周期和凋亡细胞鉴定,琼脂糖凝胶电泳用于分析DNA片段化,Western blot用于分析细胞凋亡相关蛋白的表达水平,Transwell技术用于分析细胞的迁移能力。结果TBP明显抑制MG63细胞的增殖和迁移能力,抑制效应呈时间和剂量依赖性。流式细胞分析发现,TBP干扰细胞周期,导致G1和G2期细胞比例升高,但S期细胞比例明显下降,同时凋亡细胞数量大幅增加。TBP处理后,细胞染色体DNA出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象,细胞质中促凋亡蛋白Bax和细胞色素C含量明显升高。结论 TBP具有抑制人骨髓瘤MG63细胞增殖的药理活性,其机制与抑制细胞周期和诱导细胞凋亡有关,提示TBP具有用于临床骨髓瘤治疗的潜在价值。

siRNA抑制精胺氧化酶的表达可降低人A549肺癌细胞对多胺类似物CPENSpm的敏感性

目的研究精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)基因表达抑制对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响。方法用siRNA技术获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法和酶活性分析法用于鉴定SMO基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA降解分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况。结果成功获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株。用SMO-siRNA质粒转染的细胞中,SMO mRNA和酶活性的基础水平分别降低53%和14%。用10μmol·L-1 CPENSpm处理对照细胞24h可使SMO mRNA和酶活性分别升高10倍和20倍,但在SMO-siRNA质粒转染的细胞中,这种药物对SMO的表达诱导被抑制。细胞增殖实验发现,SMO表达抑制的细胞对CPENSpm(0～20μmol·L-1)的药物敏感性低于对照细胞。细胞凋亡分析发现,与对照细胞相比,CPENSpm诱导SMO表达,抑制细胞发生细胞凋亡的能力明显减弱。结论CPENSpm诱导肿瘤细胞内SMO高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一。

钙网蛋白与凋亡细胞清除

钙网蛋白(calreticulin,CRT)是细胞内质网/肌浆网中主要的Ca2+结合蛋白,具有细胞内钙稳态调节、分子伴侣、抗原提呈等多种生物学功能。近来的研究发现,CRT在机体对凋亡细胞的有效识别、清除过程中起关键作用。

鼠OAZ1基因的真核表达质粒的构建及其在COS7细胞中的表达

构建鼠OAZ1基因真核表达质粒,观察OAZ1-GFP融合蛋白在绿猴肾细胞COS7中的表达。利用RT-PCR的方法获得鼠OAZ1基因,再利用重叠延伸PCR缺失掉OAZ1序列中的205位碱基T,由此获得无需阅读框移码即可编码全长OAZ1的突变基因。将此突变基因克隆入真核表达载体pEGFP-N1获得重组质粒pEGFP-N1-OAZ1-T。将此质粒瞬时转染COS7后,采用RT-PCR,Western blotting,免疫荧光技术观察检测目的基因的表达情况。结果显示,酶切和测序证明质粒pEG-FP-N1-OAZ1-T构建正确,转染COS7细胞后,OAZ1-GFP融合蛋白能在细胞中高效表达。成功构建了pEGFP-N1-OAZ1-T真核表达质粒,在COS7细胞内,该质粒能成功指导OAZ1-GFP融合蛋白合成。

多胺类似物四丁基丙二胺对人A549肺癌细胞的影响

目的:研究新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutyl propanediamine,TBP)对人A549肺癌细胞增殖、细胞迁移能力和多胺代谢的影响及其机制。方法:MTT法用于分析细胞增殖;流式细胞术用于分析细胞周期;QT-RT-PCR技术用于分析多胺代谢酶的表达水平;高效液相色谱用于检测细胞内多胺含量。结果:TBP处理A549细胞后导致:(1)显著抑制人A549细胞增殖,其抑制效应呈浓度和时间的依赖性;(2)G1期和G2期细胞显著减少,但S期细胞显著性增加;(3)显著诱导多胺降解代谢限速酶SSAT的表达,但对其他酶影响较小;(4)细胞内多胺含量显著性下降。结论:上述研究结果提示TBP具有抑制人A549肺癌细胞增殖的药理活性,有作为肺癌治疗药物的潜在临床应用前景。其机制可能与干扰DNA复制、抑制细胞周期和降低细胞内多胺水平相关。

抗人精胺氧化酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备小鼠抗人精胺氧化酶(SMO)单克隆抗体(mAb),并验证其在Western blot,免疫组织化学等方法中的应用价值。方法:用pET-15b/SMO质粒转化BL2(DE3)后,IPTG诱导表达带6×His标签的SMO重组蛋白并用Ni-NTA树脂亲和层析纯化。用SMO重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞杂交融合,获得能高效合成和分泌抗SMO mAb的杂交瘤细胞株。所得抗体的特异性和效价用ELISA和Western blot法以及免疫组织化学技术检测。结果:成功建立了稳定分泌鼠抗人SMO的mAb杂交瘤细胞株,获得的mAb效价高、特异性强,可用于ELISA,Western blot,免疫组织化学等分析技术。结论:成功制备出高特异性并能用于多种生物分析技术的SMO mAb。

肿瘤相关巨噬细胞促进肿瘤转移的机制

浸入肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞在不同因子的刺激下,可分化为具有抗肿瘤功能的M1型巨噬细胞和具有促肿瘤功能的M2型巨噬细胞。在大多数肿瘤中肿瘤相关巨噬细胞以M2型为主,它参与肿瘤新血管形成、基底膜破坏、细胞外基质重塑、肿瘤细胞上皮间质转化等与肿瘤细胞侵袭转移相关的过程,由此肿瘤相关巨噬细胞已经成为肿瘤靶向治疗的重要靶点。本文主要探讨肿瘤相关巨噬细胞与肿瘤细胞的相互作用,以及其在促进肿瘤转移的各个环节中的分子机制。

鸟氨酸脱羧酶与女性常见恶性肿瘤

鸟氨酸脱羧酶(Ornithine decarboxylase,ODC)是调控细胞内多胺生物合成的限速酶,参与胚胎发育、细胞周期、细胞增殖分化等重要的生理过程,同时也是肿瘤细胞的快速增殖所必须,是目前研究较多的抗肿瘤治疗的潜在分子靶点之一。本文简要综述ODC与女性常见恶性肿瘤关系的研究进展。

Necdin-Wnt及STRA6-JAK2-STAT5信号通路与肝星状细胞活化的关系研究

肝纤维化的发生与多种信号通路密切相关,有研究证实Wnt信号通路促进肝星状细胞(hepaticstellate cell,HSC)活化。Necdin作为经典Wnt信号通路的上游信号分子,其与Wnt10b启动子结合,激活Wnt信号通路,通过抑制PPARγ,促进HSC活化。STRA6-JAK2-STAT5信号通路可以通过正向调节PPARγ维持HSC的静止。因此,研究Necdin-Wnt和STRA6-JAK2-STAT5信号通路与HSC活化之间的关系,有助于为肝纤维化临床治疗提供一些新的思考。

天花粉蛋白对子宫颈癌Hela细胞Survivin基因的影响

目的:研究天花粉蛋白(TCS)对子宫颈癌Hela细胞Survivin基因表达的影响,以探讨TCS诱导Hela细胞凋亡的机制。方法:MTT法检测TCS对Hela细胞增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态;RT-PCR和Western blot分析TCS对Hela细胞Survivin基因表达的影响;流式细胞仪分析TCS对Hela细胞周期的影响。结果:①TCS显著性抑制Hela细胞增殖;②TCS处理后Hela细胞Survivin mRNA水平无明显改变,但蛋白表达水平显著降低;③TCS降低Hela细胞周期中G2/M期细胞比率,但增加S期细胞的数量。结论:通过下调凋亡抑制因子Survivin的表达而诱发Hela细胞凋亡,可能是TCS抑制Hela细胞增殖的分子机制。