资木瓜中莽草酸通过减少RBL-2H3细胞脱颗粒抑制大鼠软骨细胞分化

目的研究资木瓜中总提物莽草酸(SA)通过抑制RBL-2H3细胞脱颗粒从而减少软骨细胞向肥厚软骨细胞的分化作用。方法采用甲苯胺蓝染色法,类胰蛋白酶免疫组织化学染色法进行软骨细胞的鉴定;软骨细胞培养组分为正常软骨细胞对照组,化合物48/80(C48/80)活化RBL-2H3细胞培养上清液处理组,(3、10、30)μg/mL SA分别作用后的RBL-2H3细胞培养上清液处理组。噻唑蓝(MTT)法检测SA和RBL-2H3细胞上清液对软骨细胞的毒性作用;Western blot法检测软骨细胞2型胶原蛋白(Col2)和Col10的蛋白表达;免疫组织化学染色法检测软骨细胞Col10蛋白水平;ELISA检测软骨细胞培养上清液基质金属蛋白酶13(MMP13)、可溶性核因子κB受体激活蛋白配体(sRANKL)及骨保护素(OPG)含量,二甲基亚甲蓝(DMB)比色法检测糖胺多糖(GAG)的含量。结果(0~30)μg/mL SA对软骨细胞生长无显著影响,与C48/80活化RBI-2H3细胞培养上清液处理组比较,随着SA剂量的增加,软骨细胞中Col2、GAG蛋白表达增加,Col10、MMP13的表达明显降低、sRANKL/OPG的比值降低。结论SA通过抑制RBL-2H3细胞脱颗粒减少软骨细胞向肥厚软骨细胞的分化。