综合设计性实验在人体寄生虫学实验教学中的应用

为了更好地完成人体寄生虫学教学,提高学生的学习兴趣和解决实际问题的能力,作者在人体寄生虫学实验教学中采用综合设计性实验方法 ,改变传统的固化的验证性模式,灵活应用动物模型,将常用的寄生虫临床检验和操作方法设计整合到该动物模型中,通过学生自己设计并亲自操作,提高了学生综合素质。

根皮苷对日本血吸虫感染小鼠肝纤维化的抑制作用

探讨根皮苷对日本血吸虫感染所致小鼠肝纤维化的保护作用。随机将未感染和感染日本血吸虫尾蚴昆明小鼠分成4组A—D，每组10只：未感染空白对照组（A）、模型组（B）、复方鳖甲软肝片阳性组（C）、根皮苷治疗（40mg/（kg·d））组（D）。感染后第42d，B、C、D组均用吡喹酮驱虫治疗500113tg／（kg·d），2日疗法，之后各组开始灌胃给药持续治疗60d，A和B组生理盐水灌胃对照。实验结束处死小鼠，留取肝脏组织和血清，测定血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、透明质酸（HA）含量，计算肝体指数，测定肝组织中羟脯氨酸（HYP）含量。苏木素-伊红和Masson胶原纤维染色观察小鼠肝组织变性、虫卵肉芽肿与胶原沉积等病理改变。结果显示，与A组相比，B、C、D组小鼠肝脏有明显虫卵肉芽肿形成、胶原沉积与肝纤维化，伴有不同程度肝细胞炎性损伤坏死。血清中ALT、AST、HA和肝组织中HYP含量均明显升高（P〈0．05或P〈0．01）。与B组相比，根皮苷组ALT、AST、HA和HYP含量和肝体指数均明显降低（P〈0．05或P〈0．01），肝组织坏死与胶原沉积明显减轻，虫卵肉芽肿面积减小。结果表明根皮苷具有抗血吸虫性肝纤维化的作用。

三峡库区首例肝片形吸虫病

本文回顾分析了三峡库区首例肝片形吸虫病病例的诊断过程。对患者进行了感染来源的追溯调查,认为该例患者可能因饮用含有囊蚴的水而感染。

湖北海棠叶总黄酮对日本血吸虫感染小鼠肝纤维化的抑制作用

目的探讨湖北海棠叶总黄酮对日本血吸虫感染所致小鼠肝纤维化的保护作用。方法随机将未感染和感染日本血吸虫尾蚴昆明小鼠分成A～F6组。即未感染空白对照组(A)、模型组(B)、复方鳖甲软肝片阳性组(C)、湖北海棠叶总黄酮治疗高剂量[114mg(/kgd)]组(D)、中剂量[57mg(/kgd)]组(E)、低剂量[28.5mg(/kgd)]组(F),每组10只。感染后第42天,C、D、E、F组均用吡喹酮驱虫治疗,500mg/(kgd)2日疗法,之后各组开始灌胃给药持续治疗60d,A组和B组生理盐水灌胃对照。实验结束处死小鼠,留取肝脏组织和血清,测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)含量,计算肝体指数,测定肝组织中羟脯氨酸(HYP)。苏木素伊红和Masson胶原纤维染色观察小鼠肝组织变性、虫卵肉芽肿与胶原沉积等病理改变。结果与A组相比,B、C、D、E、F组小鼠肝脏有明显虫卵肉芽肿形成、胶原沉积与肝纤维化,伴有不同程度肝细胞炎性损伤坏死。血清中ALT、AST、HA和肝组织中HYP含量均明显升高(P<0.05或P<0.01)。与B组相比,湖北海棠叶总黄酮高、中、低剂量组ALT、AST、HA和HYP含量及肝体指数均明显降低(P<0.05或P<0.01),肝组织坏死与胶原沉积明显减轻,虫卵肉芽肿面积减小。结论湖北海棠叶总黄酮具有抗血吸虫性肝纤维化作用。

大蒜油杀灭日本血吸虫尾蚴作用研究

目的探讨不同浓度的大蒜油对日本血吸虫尾蚴活性的影响。方法采用蒸馏法提取大蒜油,并配制成不同浓度,观察杀灭日本血吸虫尾蚴的时间;用经大蒜油处理3min的日本血吸虫尾蚴感染小鼠,45d后处死,计数检获成虫数,计算感染率和减虫率,试验设去氯离子自来水为对照。结果大蒜油原液1s内可迅速杀死日本血吸虫尾蚴,稀释度为10-2、10-3、10-4、10-5、10-6的大蒜油杀死日本血吸虫尾蚴的平均时间分别为(2.4±0.54)s、(28.4±4.24)s、(60.6±3.43)s、(387.0±19.05)s和(820.4±22.34)s;用以上稀释度大蒜油处理后的血吸虫尾蚴感染小鼠,感染率分别为0、0、0、0、60.00%、80.00%,对照组感染率为100%。结论大蒜油有较强的杀灭日本血吸虫尾蚴作用。

日本血吸虫感染小鼠CD4^+CD25^+Foxp3^+ T细胞的动态变化及其意义

目的分析小鼠脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞在日本血吸虫感染后的动态变化,探讨CD4+CD25+Foxp3+T细胞与血吸虫感染的关系。方法常规逸出尾蚴,感染小鼠24只,随机分为4组,同时设立阴性对照。感染后第3、6、9、12周分批处死小鼠,取脾脏制备单细胞悬液,用FITC-CD4和PE-CD25单抗进行细胞表面染色,洗涤后,经打孔液和固定液处理,再用PE-cy5-Foxp3抗体进行核内染色,流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的变化。结果小鼠感染血吸虫后第3、6、9、12周脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率分别为(2.57±0.13)%、(1.77±0.21)%、(1.10±0.05)%和(0.83±0.04)%,呈逐步下降趋势(P<0.05);CD4+CD25-Foxp3+T细胞百分率分别为(0.25±0.007)%、(0.27±0.13)%、(0.38±0.15)%和(0.35±0.07)%,差异无统计学意义(P>0.05)。未感染小鼠脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率分别为(2.63±0.09)%、(3.13±0.47)%、(2.78±0.19)%和(2.82±0.12)%,差异无统计学意义(P>0.05);CD4+CD25-Foxp3+T细胞百分率分别为(0.35±0.10)%、(0.43±0.13)%、(0.30±0.08)%和(0.31±0.09)%,差异无统计学意义(P>0.05)。感染组与未感染组相比从第6周开始脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率显著下降(P<0.05),CD4+CD25-Foxp3+T细胞百分率差异无统计学意义(P>0.05)。结论CD4+CD25+Foxp3+T细胞在日本血吸虫感染中具有免疫抑制作用,与血吸虫虫卵肉芽肿慢性病变具有相关性。

吡喹酮治疗前后小鼠脾细胞中CD4^+CD25^+Foxp3^+T细胞变化及其意义

目的分析吡喹酮治疗前后小鼠脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的变化,探讨其与血吸虫感染后肝脏免疫病理反应的关系。方法54只BALB/C小鼠随机分为3组,阳性感染组、吡喹酮治疗组(感染后第6周顿服吡喹酮治疗)及阴性对照组。于感染后第3、6、9周分批处死小鼠,取脾单细胞悬液,经过常规表面染色、打孔、固定、胞内染色后,用流式细胞仪检测分析CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的变化。结果感染组第3、6、9周脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的数量分别为(2.57±0.13)%、(1.77±0.21)%、(1.10±0.05)%,其含量逐步下降(P<0.05),治疗组分别为(2.61±0.12)%、(1.82±0.14)%、(1.76±0.11)%,经治疗后其含量变化差异无统计学意义(P>0.05),阴性组差异无统计学意义(P>0.05);CD4+CD25+Foxp3-T细胞和CD4+CD25-Foxp3+T细胞在各组中的含量差异均无统计学意义(P均>0.05)结论CD4+CD25+Foxp3+T细胞在日本血吸虫感染中具有免疫抑制作用,与血吸虫虫卵肉芽肿慢性病变具有相关性,吡喹酮可以通过抑制CD4+CD25+Foxp3+T降低以减缓血吸虫肉芽肿炎性病变的程度。

大蒜油对日本血吸虫尾蚴活性影响的时效性观察

探讨大蒜油放置不同时间后对日本血吸虫尾蚴活性的影响。方法:分别取放置1月、12月、24月浓度为1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6的大蒜油处理日本血吸虫尾蚴,观察尾蚴死亡的时间;另取经存放不同时间上述各浓度大蒜油处理三分钟的尾蚴感染昆明鼠,观察小鼠的感染率及减虫率;同时设去氯离子自来水为对照组。结果:存放1月、12月、24月浓度为1、10^-2、10^-3,的大蒜油处理尾蚴后感染小鼠减虫率均为100%;浓度为10^-4减虫率分别为100%、100%、94.83%;浓度为10^-4减虫率分别为65.56%、60.26%、53.57%;浓度为10^-5减虫率分别37.63%、27.03%、19.05%;对照组感染率为100%。结论:高浓度大蒜油放置后仍具有良好的抗尾蚴活性,但低浓度的大蒜油放置后杀尾蚴活性降低。