免疫学双语教学的几点思考

为了适应经济全球化的需要,培养高素质复合型人才,国内高校纷纷开展双语教学。目前,高校双语教学存在五大主要问题,即目标不清、师资不足、教材选择、学生水平参差不齐和教学方法缺乏研究。为此,应当明确目标,培养师资,因材施教,精选教材和加强教学方法的研究。

P120链蛋白与肿瘤

研究参与肿瘤发生的重要信号分子,对揭示肿瘤发生发展有重要意义。链蛋白(catenin)家族成员与肿瘤的发生密切相关,在保持细胞黏附中起着重要作用,其表达缺失或下降将导致细胞分化丧失和具有侵袭性,容易发生浸润和转移。链蛋白家族最早被分为α、β、γ三类,它们都能与E-钙黏着蛋白(E-cadherin)形成复合体。P120cat作为新发现的链蛋白家族成员之一,位于细胞连接处和细胞核内,与肿瘤的发生有着更密切和特殊的关系,在不同的条件下,它既可以作为肿瘤的促进物,又可成为肿瘤的抑制物。

次级淋巴组织趋化因子真核表达载体的构建及蛋白质表达的鉴定

目的 构建次级淋巴组织趋化因子 (SLC)真核表达载体 ,并实现其真核表达。方法 通过使用限制性内切酶酶切载体中的SLC片段 ,再与经过相同酶切的真核表达载体pcDNA 3.1进行连接 ,电穿孔法转染Hela细胞后 ,培养上清经阴离子交换层析纯化后 ,进行SDS PAGE及免疫印迹法 (Western blot)鉴定。结果 表达出的蛋白质经Western blot法鉴定为特异性蛋白质。

HPV外壳蛋白L1 B细胞共同表位短肽免疫学特性研究

目的：明确一种人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)外壳蛋白L1 B细胞共同表位短肽作为HPV疫苗发展的可能性。方法：通过对几种主要致病型别HPV外壳蛋白L1的三维结构及其氨基酸序列的分析，构建HPV外壳蛋白L1 B细胞共同表位短肽疫苗，以该短肽对动物进行免疫接种诱导抗短肽抗血清，再用ELISA、SDS-PAGE电泳、Western blot及免疫组化等方法对短肽和抗短肽血清的免疫学特性进行检测。结果：短肽自身免疫原性较差，而短肽与Furends完全佐剂合用免疫动物则能诱导较高滴度的抗短肽血清并且该抗血清能与多种型别HPV蛋白发生反应。结论：HPV外壳蛋白L1 B细胞共同表位短肽有望作为HPV疫苗候选物。

plRES-CRT／E2-SLC真核表达质粒的构建、表达的实验研究

目的：为研究针对18型人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）的高效治疗性基因疫苗，我们将钙网蛋白（Calreticulin，CRT）基因HPVl8 E2融合，并联合次级淋巴组织趋化因子（Secondary Lymphoid-tissue Chemokine，SLC），构建了作为HPV DNA基因疫苗的重组基因pIRES-CRT／E2-SLC，检测分析其在真核细胞中的表达。方法：以pDsRed2-N1-SLC为模板，利用PCR技术获得SLC基因片断，插入到pIRES载体的多克隆位点B中；以pCDNA3-CRT和HPVl8 genome DNA为模板，利用PCR技术分别获得CRT和HPVl8 E2基因片断，将CRT和E2插入到pIRES-SLC载体的多克隆位点A中。获得CRT／E2融合基因联合SLC的真核双表达质粒pIRES-CRT／E2-SLC。同时构建真核表达质粒pIRES-E2、pIRES-CRT／E2等作为实验对照。使用lipo-fectamine2000转染试剂将上述重组质粒转染人脐静脉内皮细胞株ECV，RT-PCR及Western Blot方法鉴定目的基因的表达。结果：获得阳性重组表达质粒pIRES-CRT／E2-SLC，经酶切鉴定及核酸序列测定证实真核表达质粒的构建成功。RT-PCR及Western Blot证实其目的基因在真核细胞中的正确表达。结论：正确构建真核表达质粒pIRES-CRT／E2-SLC。

合欢皮多糖对S180荷瘤小鼠的抑瘤及免疫调节作用的研究

目的：合欢皮为豆科植物合欢（Ａｌｂｉｚｉａ Ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ Ｄｕｒａｚｚ）的干燥茎皮，传统医学多用于解郁安神、活血消肿，本次实验主要研究其多糖成分抗肿瘤、免疫调节的现代药理学机制。方法：以Ｓ１８０荷瘤小鼠为模型，研究合欢皮多糖抑瘤及免疫调节作用。结果：５ｍｇ／ｋｇ的合欢皮我糖抑瘤率为３３．５％，与环磷酰胺合并用药的抑瘤率为７８．２％，明显高于对照组，Ｔ细胞转化试验高于对照组，Ｐ１〈０．

P120ctn及E-cad在宫颈鳞癌组织和细胞系中的表达及生物学意义

目的：探讨P120连环蛋白（P120catenin，P120ctn）及E-钙粘蛋白（E-cad-herin。E-cad）在宫颈鳞癌组织和宫颈鳞癌细胞系（Caski、Siha）中的表达、分布及其生物学意义。方法：免疫组织化学、免疫细胞化学及RT—PCR检测正常宫颈组织、宫颈鳞癌组织、人脐静脉内皮细胞（HECV）、Caski、Siha细胞系中P120ctn及E—cad的表达与分布。结果：①正常宫颈组织中P120cm及E—cad表达在胞膜，胞浆少见；宫颈鳞癌中P120ctn及E—cad胞膜表达降低，出现胞浆表达；②HECV细胞系中P120ctn大部分表达在胞膜，E—cad胞膜表达量较少；Caski、Siha细胞系中P120ctn胞膜表达量减少、胞浆表达量增加，E—cad胞膜胞浆表达都较少；③HECV及Caski、Siha细胞系中都有P120ctn与E—cadmRNA表达，P120ctnmRNA在HECV、Caski、Siha细胞系中无表达量差异，E—cadmRNA在Caski、Siha细胞系中表达量低于HECV。结论：P120ctn及E—cad的异常表达与宫颈鳞癌发生发展密切相关，异常表达与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移有关，与年龄、临床分期无关。

造血干细胞移植治疗自身免疫性疾病研究进展

机体免疫系统的生理功能是识别“自己”和”非己”，排除”非己”，对自己正常成分形成耐受。若免疫系统未能识别自身细胞或成分并错误地对其攻击，则发生自身免疫病(autoimmune disease，AID)。已确定的AID有40余种，常见的有类风湿关节炎((RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、Ⅰ型糖尿病(DM)、重症肌无力、

莪术油联合干扰素对鼠宫颈癌端粒酶活性和细胞凋亡影响的研究

目的：构建小鼠U14宫颈癌模型，探讨莪术油、莪术油联合2b干扰素抑制宫颈癌细胞的分子机制及其协同作用。方法：用MTT法筛选药物浓度，构建小鼠U14宫颈癌模型，通过莪术油、莪术油联合干扰素作用小鼠宫颈癌细胞，并设立阴、阳性对照组，比较各组间端粒酶活性和细胞凋亡率有无差异。结果：莪术油的最佳作用浓度是4mg／ml，抑瘤率为54．07％。IFN的最佳作用浓度是0．5万IU／ml，抑瘤率为26．42％。莪术油可明显抑制宫颈癌细胞的端粒酶活性和诱导肿瘤细胞凋亡，并有一定的剂量依赖性；莪术油联合2b干扰素比单独莪术油效果好，统计学差异有显著性。结论：抑制细胞的端粒酶活性和诱导细胞发生凋亡可能是莪术油抗鼠宫颈癌的重要分子机制；2b干扰素与莪术油联合使用对抑制宫颈癌细胞增殖有协同效应。

次级淋巴组织趋化因子抗宫颈癌作用的初步研究

目的：次级淋巴组织趋化因子裸基因治疗宫颈癌。方法：将本室构建的pcDNA3．1-SLC真核表达载体裸基因注入宫颈癌瘤体中，比较治疗组与生理盐水组肿瘤质量，生长速度及抑瘤率。结果：治疗组的瘤体质量，肿瘤生长速度、抑瘤率等数据均明显低于生理盐水组。结论：次级淋巴组织趋化因子能明显促进机体抗肿瘤能力。

宫颈鳞癌中P120ctn及相关蛋白的表达及临床意义

目的：研究P120连环蛋白（P120ctn）、β连环蛋白（β—cat）、E钙粘蛋白（E—cad）及Ki67蛋白在宫颈鳞癌中的表达及临床意义，分析P120ctn异常表达与B—cat、E—cad及Ki67蛋白异常表达的相互联系。方法：应用免疫组化SP法检测P120ctn、β—cat、E—cad及Ki67蛋白在26例正常宫颈组织和52例宫颈鳞癌组织中的表达。结果：①正常宫颈组织中P120ctn、β—cat及E—cad表达在胞膜，胞浆少见；宫颈鳞癌中P120ctn及E—cad胞膜表达降低，出现胞浆表达，异常表达率分别为41／52（78．8％），38／52（73．0％）；β—cat除了胞浆表达以外，还伴随胞核表达，异常表达率为39／52（75％）；P120ctn、β—cat及E—cad异常表达与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移有关（P〈0．05），与年龄、临床分期无关（P〉0．05）；②同一组织标本中P120ctn表达异常，同时伴β-cat及E—cad异常表达；③正常宫颈组织中Ki67表达率为4／26（16％），宫颈鳞癌组织中表达率为40／52（80％）；Ki67异常表达与临床分期有关（P〈0．05），与年龄、肿瘤细胞分化程度及淋巴结转移无关（P〉0．05）；P120ctn异常表达与Ki67蛋白异常表达有相关性。结论：P120cm、β-eat及E—cad在宫颈鳞癌中异常表达，三者异常表达有很好一致性，P120ctn异常表达与Ki67蛋白异常表达有相关性。P120ctn及相关蛋白异常表达可作为宫颈鳞癌诊断的辅助指标，并为判断疾病发展及转移提供客观依据。

肼苯哒嗪对宫颈癌细胞系APC基因去甲基化的转录调节作用

目的：观察宫颈癌细胞系HeLa、CaSki和SiHa中APC基因的表达与甲基化修饰之间的相关性,探讨肼苯哒嗪对APC基因去甲基化的转录调节作用及其对细胞生长和凋亡的影响。方法：应用甲基化特异性PCR（MSP）法分析细胞中APC的甲基化状态;采用RT-PCR及FQ-PCR检测肼苯哒嗪对APC mRNA表达的影响;MTT法及流式细胞术观察肼苯哒嗪对细胞增殖及凋亡的影响;采用免疫组化SP法检测肼苯哒嗪对APC相关蛋白β-连环蛋白表达的影响。结果：APC基因在HeLa、CaSki细胞中有甲基化修饰;肼苯哒嗪能使其甲基化的APC基因重新表达;β-连环蛋白也可重新表达于细胞膜;肼苯哒嗪能抑制细胞生长,使细胞凋亡增多。结论：APC甲基化修饰是宫颈癌发生重要机制之一,肼苯哒嗪能使甲基化的APC去除甲基化修饰重新表达,且能抑制宫颈癌细胞生长。