香椿子化学成分和药理活性的研究进展

香椿子是楝科植物香椿的果实,常被用来泡茶以预防多种疾病。在过去的几年中,大量的研究证实了香椿子在治疗中枢神经系统疾病、心血管系统疾病、糖尿病等疾病中发挥着有益作用。为促进香椿子的开发利用,本文将从香椿子的化学成分、药理活性和作用机制方面进行综述。

D-半乳糖对小鼠睾丸TM4支持细胞连接功能损伤及淫羊藿素的改善作用研究

目的研究D-半乳糖(D-galactose,D-gal)对小鼠睾丸TM4支持细胞连接功能损伤以及淫羊藿素(icaritin,ICT)的改善作用机制。方法首先将TM4细胞分为正常对照组、不同浓度D-gal处理组,Western blot检测TM4细胞连接功能相关蛋白(ZO-1、Occludin、β-catenin和Cx43)以及ERα/FAK信号通路相关蛋白(ERα、FAK和pY397-FAK)表达水平的变化;随后MTT筛选ICT药物浓度,并将TM4细胞分为正常对照组、D-gal处理组、D-gal处理+不同浓度ICT组,Western blot检测上述蛋白表达水平变化;分子对接研究ERα与ICT之间的相互作用,并预测两者之间的亲和力;最后将TM4细胞分为正常对照组、D-gal处理组、ERα抑制剂组、D-gal+ICT组、ERα抑制剂+ICT组,Western blot检测上述蛋白表达水平的变化。结果D-gal可浓度依赖性下调连接功能相关蛋白(ZO-1、Occludin、β-catenin和Cx43)以及ERα/FAK信号通路相关蛋白(ERα、FAK和pY397-FAK)表达水平;给予ICT药物后,上述蛋白表达水平均明显上调;ERα和ICT分子对接结果显示,ERα的Asp351氨基酸残基与ICT之间形成2个距离为3.4Å和2.4Å的氢键,且两者之间的对接结合能小于-7 kcal·mol^(-1);ERα抑制剂处理TM4细胞后,上述蛋白表达水平均明显下调,给予ICT后,上述蛋白表达水平未有明显变化。结论D-gal可导致TM4细胞连接功能损伤,而ICT可改善其损伤,机制可能与上调ERα/FAK信号通路相关。

软骨细胞在类风湿关节炎中的双重角色

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节疼痛和肿胀为主要特征的慢性自身免疫性疾病,其本质是滑膜增生和软骨被破坏。多年来,相比其他巨噬细胞,淋巴细胞等,软骨细胞受到的关注较少,人们普遍把RA中的软骨细胞作为反映病症特点的工具细胞。然而越来越多的研究表明,作为关节软骨中唯一的细胞,在RA中软骨细胞不仅仅作为靶细胞,被多种细胞因子从不同信号通路致使其发生细胞损伤或细胞凋亡;同时,软骨细胞自身也会产生基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)促炎因子,以及协同其他相关细胞调控关节内环境,参与RA进展。软骨细胞在RA中的重要作用,或许可能为RA临床预防和治疗提供帮助。

TRP通道介导线粒体功能调控及其与心血管疾病关系研究进展

瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)通道是一类非选择性阳离子通道。近年来研究发现TRP通道与多种疾病有关,其中关于TRP通道通过线粒体功能调控参与相关心血管疾病机制的研究,正成为心血管疾病机制研究的热点之一。目前相关的文献主要集中在TRPV、TRPM和TRPC。本文主要就上述3种TRP通道在线粒体功能调节中的作用及其与心血管疾病的关系研究进展进行综述。

前列腺癌中自噬性细胞死亡的分子通路和调控机制综述

前列腺癌(PCa)是全球男性中第2常见的癌症,近年来发病率和致死率均呈快速上升趋势。PCa的发生发展与自噬密切相关,自噬性细胞死亡可促进或抑制PCa细胞的增殖和存活。本文对自噬性细胞死亡抑制PCa进展的分子通路及其相关调控机制进行综述,以期探寻新的PCa治疗方法。

黑茶的药理作用研究进展

黑茶作为一种经微生物、酶和湿热条件共同作用的后发酵茶,有诸多药理作用,包括促胃肠道功能、降血糖、增敏胰岛素、保肝护肝、抗动脉粥样硬化、减肥降脂和抗炎等,值得进一步发掘与研究。本文对黑茶相关的药理功效及作用机制研究进展进行了综述。

西藏奶拉及牦牛奶中优良乳酸菌的筛选

以德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)6047为对照菌株,采用分离自西藏牧民自制奶拉及牦牛奶中的2株德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)DB-3和JD-2发酵制备酸乳,通过测定酸乳的发酵时间以及发酵结束、4℃后熟24 h及冷藏7 d、14 d、21 d时的p H值、滴定酸度、脱水收缩性、黏度和游离氨基酸态氮含量筛选出具有优良发酵特性的菌株。结果表明,菌株DB-3的发酵特性较好,凝乳时间较短,仅需8.44 h,发酵终点、后熟24 h及冷藏21 d时pH值分别为4.51、4.35、4.06,滴定酸度分别为71.95°T、74.23°T、88.68°T,黏度分别为943 m Pa·s、1 054 m Pa·s、1 522 m Pa·s,脱水收缩性分别为32.43%、32.91%、35.81%,游离氨基酸态氮含量分别为5.27 mmol/L、5.46 mmol/L、6.24 mmol/L,说明菌株DB-3符合工业化生产需求,具有较好的产酸、产黏、持水性能及蛋白水解能力,作为酸乳发酵剂具有潜在的工业应用前景。

竹节参总皂苷减轻高脂饮食诱导的小鼠睾丸支持细胞连接功能损伤

目的探究竹节参总皂苷(TSPJ)对高脂饮食诱导的小鼠睾丸支持细胞功能损伤的保护作用及机制。方法将40只C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常饮食组、高脂饮食组、TSPJ低剂量(25 mg/kg)组和TSPJ高剂量(75 mg/kg)组,10只/组。正常饮食组给予普通饲料喂养,其余组均给予高脂饲料喂养,TSPJ连续灌胃给药5月,小鼠称重处死,取出睾丸和附睾组织称重并计算其指数;取附睾组织进行精液分析;HE染色观察小鼠睾丸组织形态变化,测量统计生精上皮厚度与生精小管直径;Western blot检测睾丸支持细胞紧密连接功能蛋白ZO-1、Occludin和Claudin11以及外质特化功能蛋白N-cadherin、E-cadherin和β-catenin的表达水平;免疫荧光法检测睾丸组织中ZO-1和β-catenin蛋白定位及表达;免疫荧光双标法检测睾丸支持细胞中LC3B、p-AKT和p-mTOR表达变化。结果与高脂饮食组相比,TSPJ能明显减轻高脂饮食小鼠体质量(P<0.001),增加睾丸和附睾指数(P<0.05,P<0.01),提高精子浓度与精子活率(P<0.05,P<0.01),改善睾丸组织形态异常,增加生精上皮厚度(P<0.05,P<0.001),但对生精小管直径无明显影响。Western blot结果显示,TSPJ能增加ZO-1、Occludin、N-cadherin、E-cadherin和β-catenin的蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01,P<0.001),但对Claudin11的表达无显著性影响;免疫荧光结果显示,TSPJ能增加睾丸组织中ZO-1和β-catenin蛋白的表达(P<0.001),下调睾丸支持细胞中LC3B的表达,上调p-AKT和p-mTOR蛋白表达。结论TSPJ能减轻高脂饮食诱导的睾丸支持细胞连接功能损伤,改善小鼠生精功能减退,其机制可能与激活支持细胞AKT/mTOR信号通路抑制自噬有关。

从内质网应激研究高脂饮食对小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

目的从内质网应激的角度研究高脂饮食对小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。方法将C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常组和高脂饮食组,每组6只,分别给予普通饲料和高脂饲料持续喂养5个月。小鼠称体质量,麻醉后处死,取睾丸组织,称质量并计算睾丸指数;取附睾组织进行精液分析;HE染色检测睾丸组织形态学变化;TUNEL染色检测生精细胞凋亡;Western blot检测睾丸凋亡及内质网应激相关蛋白的表达水平;免疫荧光法检测GRP78蛋白表达和定位的变化。结果与正常组相比,高脂饮食组小鼠体质量明显增加,睾丸指数明显下降;精子浓度和精子活率明显下降;睾丸生精细胞排列松散,生精上皮厚度明显变薄,生精小管直径无明显变化;生精细胞凋亡增多,凋亡指数明显增加;Bax和cleaved-caspase-12蛋白的表达明显增加,Bcl-2蛋白表达明显降低;GRP78,p-IRE1,XBP1,ATF6α蛋白的表达水平明显上调,而p-PERK,p-eIF2α,ATF4蛋白的表达无明显变化,免疫荧光结果进一步显示睾丸组织中GRP78的表达明显增加,表达位置无明显变化。结论高脂饮食可诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡,其机制可能与激活内质网应激IRE1信号通路和ATF6信号通路有关。

微囊藻毒素亮氨酸精氨酸(MC-LR)损伤睾丸支持细胞免疫反应及细胞生物学行为的机制研究进展

微囊藻毒素亮氨酸精氨酸(MC-LR)是水华爆发时微囊藻属、鱼腥藻属等蓝藻产生的一种对人类有致癌性的藻毒素。MC-LR可对雄性动物生殖系统产生毒性,导致不育,主要表现为诱导细胞凋亡、破坏细胞骨架、干扰DNA损伤修复途径或损伤血睾屏障(BTB)功能等。睾丸支持细胞(Sertoli细胞)是生精小管中与生精细胞直接接触的体细胞,可通过分泌多种细胞因子和免疫抑制因子调节免疫反应以维持睾丸免疫稳态,亦可与邻近生殖细胞形成BTB,为各级生精细胞提供营养、支持和保护作用的微环境。MC-LR可引发睾丸Sertoli细胞炎症、诱导细胞凋亡、破坏BTB完整性,进而造成睾丸生精功能障碍。

雌激素受体α下调导致小鼠睾丸TM4支持细胞连接功能损伤的作用机制

目的探究雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)下调导致的小鼠睾丸TM4支持细胞连接功能损伤是否与自噬相关。方法不同浓度ERα抑制剂ICI182780(ICI)处理TM4细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性;将细胞分为正常对照组、不同浓度ICI处理组。光镜观察细胞数量及形态变化;Western blot法检测ERα蛋白、连接功能相关蛋白、自噬标志物蛋白表达变化;免疫荧光法检测缝隙连接蛋白43(Cx43)表达与定位;氯喹(chloroquine,CQ)与ICI联合作用细胞24 h,Western blot法检测自噬及连接功能相关蛋白表达水平。结果ICI 50 nmol·L^(-1)及以上浓度时,细胞活力明显下降;光镜观察ICI组细胞空泡增多;与正常对照组相比,ICI用药组ERα、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)、紧密连接蛋白11(claudin-11)、β-联蛋白(β-catenin)及Cx43表达水平均下降,而神经钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)表达无明显变化;微管相关蛋白轻链3(LC3)上升,p62表达下降;免疫荧光结果显示,ICI用药组Cx43荧光表达量明显下降,位置无明显变化;与ICI组相比,CQ+ICI组LC3Ⅱ、p62、ZO-1、β-catenin、Cx43表达水平均上升。结论ERα下调可导致TM4细胞连接功能损伤,其机制可能与激活自噬有关。

棕榈酸诱导小鼠精原细胞株GC-1细胞凋亡的作用机制

目的从内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)角度探讨棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导小鼠精原细胞株GC-1细胞凋亡的机制。方法将GC-1细胞分为正常组(Control)、溶剂对照组(Vehicle)和不同浓度PA处理组(100、150、200、250μmol·L^(-1))。MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;Caspaes-3活性检测试剂盒检测凋亡蛋白caspase-3的活性;Western blot检测凋亡相关蛋白和ERS相关蛋白表达水平。结果PA处理GC-1细胞48 h后,细胞增殖活力显著下降,细胞凋亡率上升,凋亡蛋白caspase-3活性增高,结果均具有浓度依赖性;PA可明显增加GC-1细胞促凋亡蛋白cleaved-caspase-3的表达水平,明显降低抑凋亡蛋白BCL2的表达水平,同时上调ERS相关蛋白GRP78、CHOP、p-IRE1、XBP1的表达水平,但对p-PERK、PERK、p-eIF2α、eIF2α、ATF4以及ATF6的表达无显著影响。结论PA诱导小鼠GC-1细胞凋亡可能与激活IRE1通路有关。

华泽兰根部乙酸乙酯萃取物基于NF-κB及NLR-P3炎症小体信号通路对NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞功能的影响

目的探讨华泽兰乙酸乙酯萃取物对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)功能的影响。方法从炎症因子一氧化氮(NO)及氧化应激重要因素活性氧(ROS)介入,通过核因子κB(NF-κB)及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLR-P3)炎症小体等信号通路角度阐明其作用机制。体外培养NIH-3T3细胞,分为空白对照组(Control)、不同浓度华泽兰根部乙酸乙酯萃取物组,检测不同浓度下华泽兰根部乙酸乙酯萃取物对NIH-3T3细胞Toll增殖活性(MTT法)、细胞迁移(细胞划痕实验)、分泌NO及胞内ROS生成的影响,Western blot法检测其对Toll样受体4(TLR-4)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、NLR-P3、NF-κB、髓样分化因子(Myd88)、核因子抑制蛋白α(IκBα)、白细胞介素-18(IL-18)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达的影响。结果细胞增殖与细胞划痕实验表明,华泽兰根部乙酸乙酯萃取物对于NIH-3T3细胞的增殖与划痕愈合影响具有双向性。与对照组相比在低浓度下(<6.25μg·mL^(-1)),萃取物有促进NIH-3T3细胞增殖与迁移的作用,而高浓度(>25μg·mL^(-1))反而表现出对NIH-3T3细胞的增殖与迁移抑制作用,且不同阶段呈现出相应的剂量依赖性,与对照组相比有统计学意义(P<0.05)。在萃取物浓度为6.25μg·mL^(-1)时,NO生成量相较于低浓度组差异有显著统计学意义(P<0.01),而高浓度组(>12.5μg·mL^(-1))相较对照组差异无统计学意义(P>0.05)。细胞内ROS生成实验表明,经华泽兰根部乙酸乙酯萃取物处理后ROS生成量显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。Western blot实验表明,与对照组相比,萃取物作用浓度为6.25μg·mL^(-1)时,细胞内NF-κB、TLR-4、Myd88、NLR-P3、ASC表达显著升高(P<0.01),IκBα表达升高(P<0.05),IL-18表达显著降低(P<0.01),Caspase-3表达降低(P<0.05)。结论华泽兰乙酸乙酯萃取物对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)增殖的影响具有双向性,即低浓度促进细胞增殖而高浓度抑制细胞增殖。其作用机制可能与NF-κB及NLR-P3炎症小体信号通路和细胞凋亡有关。

全氟辛酸诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡过程中内质网应激途径的研究

全氟辛酸(perfluorootanoic acid, PFOA)是当前广受关注的环境污染物之一,通过饮食、饮水及粉尘摄入等途径进入机体,造成雄性生育能力下降。目前已有相关研究证实PFOA可诱导生精细胞凋亡,但是关于PFOA诱导生精细胞凋亡的机制研究还比较匮乏。因此本研究以雄性BALB/c小鼠为研究模型,基于内质网应激途径探讨PFOA诱导小鼠生精细胞凋亡的机制。将52只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法随机分为4组:Control组、PFOA低、中和高剂量组(1.25、5和20 mg·kg^(-1)),PFOA处理组小鼠分别灌胃给予不同剂量的PFOA,Control组给予等体积的生理盐水,连续给药28 d后处死,取睾丸组织备用。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察各组睾丸组织形态变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(terminal dexynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labeling, TUNEL染色)检测各组睾丸组织生精细胞凋亡,并计算凋亡指数;蛋白质印迹法(Western blot)检测Cleaved-Caspase-3、GRP78、CHOP、p-PERK、p-EIF2α、ATF4、p-IRE1、XBP1及ATF6表达水平变化;免疫荧光(immunofluorescence, IF)检测GRP78定位及表达水平。结果显示,PFOA可损伤小鼠睾丸生精结构,导致生精细胞脱落,此外PFOA还可诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡,上调生精细胞凋亡指数,同时上调凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-3表达水平。随后Western blot结果显示PFOA可上调内质网应激标志蛋白GRP78及内质网应激介导的凋亡相关蛋白CHOP的表达水平,提示PFOA激活了内质网应激介导的凋亡信号通路。进一步研究发现,相比Control组,PFOA处理后睾丸组织内质网应激PERK信号通路相关蛋白p-PERK、p-EIF2α、ATF4上调,而内质网应激IRE1信号通路相关蛋白p-IRE1、XBP1和ATF6信号通路相关蛋白ATF6表达水平则无明显变化,提示PFOA暴露可特异性激活小鼠睾丸组织内质网应激PERK/EIF2α/ATF4信号通路。综上,PFOA可能通过激活内质网应激PERK/EIF2α/ATF4信号通路诱导生精细胞凋亡。

缺血性卒中侧支血管生成及其治疗性干预的研究进展

脑侧支血管生成发生在缺血性卒中的各个时期,是指脑缺血区血管内皮细胞经过基膜降解、活化、增殖及迁移等活动,在现存血管的基础上形成微血管网的病理过程。缺血性卒中后,血管网的形成能够有效恢复组织血流灌注,缓解神经功能缺损症状及改善预后。作者从细胞信号传导的角度出发,对缺血性卒中侧支血管生成的机制及其新兴的治疗性干预途径进行了综述。

TDP-43在缺血性脑卒中的作用

TDP-43(Transactive response DNA binding protein 43, TDP-43)最初被认为是神经退行性疾病的病理学标记蛋白,研究发现其参与脑缺血损伤的发生发展。在现有研究的基础上,简要介绍TDP-43的结构与功能以及TDP-43在脑缺血后的表达变化及其在脑缺血后调节炎症反应、线粒体功能障碍、自噬等方面的作用。

两种C57BL/6J小鼠酒精性脂肪肝模型建立方法及比较

目的短期内建立以酒精液体饲料和酒精加高脂饲料所诱导的两种C57BL/6J小鼠酒精性脂肪肝模型,并基于生物化学及组织病理学等方法进行比较,以筛选出较为高效的小鼠酒精性脂肪肝模型。方法24只健康C57BL/6J雄性小鼠,适应性饲养2周后,随机分为维持饲料组、液体饲料对照组、酒精液体饲料组、高脂饲料组共4个组(n=6)。各组记录每日饲料消耗量及体重变化情况。第16天处死后测定血清转氨酶活性及血清血脂、血糖含量。制备肝石蜡切片及冰冻切片,分别进行HE染色和油红O染色。结果根据统计学分析,相比其他三组酒精液体饲料组小鼠体重呈明显的下降趋势且体重增长率为负增长。高脂饲料组饮食热量摄入明显低于其他三组。液体饲料对照组、酒精液体饲料组、高脂饲料组三组肝质量与肝质量系数明显低于维持饲料组。生化结果显示,酒精液体饲料组ALT、AST、TC水平显著高于维持饲料组,血糖水平高于维持饲料组;酒精液体饲料组ALT、AST、TC、血糖也高于液体饲料对照组。高脂饲料组血清TC显著高于维持饲料组,AST、血糖高于维持饲料组;高脂饲料组血糖显著高于液体饲料对照组。病理染色结果显示,酒精液体饲料组小鼠肝中有大量脂质沉积,高脂饲料组次之。结论短期Gao-Binge模型与酒精加高脂饲料模型都能成功诱导C57BL/6J小鼠出现AFL的相应生化与病理特征,且Gao-Binge模型组的相应病理指标比后者更加显著,适合于急性AFL模型的建立。

内源性大麻素2-AG对海人藻酸诱导损伤的大鼠尾状核神经元A型钾通道电流的调制作用

目的:研究内源性大麻素2-花生四烯酰甘油(2-AG)对海人藻酸(KA)损伤的A型钾通道的调制作用及其分子机制。方法:用KA处理原代培养的大鼠尾状核(CN)神经元,建立神经兴奋性毒性细胞模型;通过全细胞膜片钳记录,观察KA介导的兴奋性毒性及2-AG的神经保护作用过程中CN神经元上A型钾通道电学功能的改变。结果:在培养的大鼠尾状核神经元上,膜片钳实验显示KA明显降低CN神经元A型钾通道电流(I_(A))密度并改变通道电学功能:失活曲线斜率(k)和失活后恢复时间常数(τ)均显著增大。细胞孵育液中直接加入内源性大麻素2-AG或单酰甘油脂肪酶抑制剂URB602使2-AG水解减少而间接升高细胞内2-AG水平,均可通过大麻素受体1(CB1R)抑制KA诱导的I_(A)密度降低,有效拮抗KA所致A型钾通道τ值和k值的增大,加快A型钾通道失活后恢复过程。结论:A型钾通道电学特性的改变可能是KA造成CN神经元兴奋性毒性损伤的机制之一。2-AG可通过CB1R途径调节A型钾通道功能,从而起到神经保护作用。

大麻二酚在神经病理性疼痛中的作用研究进展

神经病理性疼痛(Neuropathic Pain, NP)因为发病率高,目前缺乏有效的治疗药物,严重影响患者的生活质量,也给个人和社会带来沉重负担。研究和探讨新的治疗药物和治疗方案是亟待解决的重要课题。大麻二酚(Cannabidiol, CBD)是一种非精神活性的植物大麻素,具有良好的耐受性和安全性,在多种NP模型中都表现出镇痛作用;但由于对其药理学特性尚未完全研究清楚,临床应用仍然有限。本文主要对CBD在NP中的治疗作用和主要分子靶点予以综述,为相关研究与临床应用提供理论依据。

HCN通道在神经病理性疼痛中的作用研究进展

神经病理性疼痛(Neuropathic pain, NP)是一种常见且难治的慢性疼痛,由躯体感觉系统的损伤或疾病引起,其产生和维持可能与神经损伤后引起的外周和中枢敏化有关。NP严重影响患者的正常生活,且目前临床上缺乏治疗NP的有效方法。尽管NP发病的机制尚未完全阐明,但研究表明超极化激活的环核苷酸阳离子(Hyperpolarization activates cyclic nucleotide-gated, HCN)通道参与NP的病理生理过程;HCN通道可通过多巴胺D1受体、cAMP-PKA、α2受体、5-HT7受体、CaMKII/CREB、mTORC1等信号通路调节NP的敏感化。因此HCN通道有望成为靶向干预治疗NP的药物靶点。本文将重点阐述HCN通道在NP中的作用及其细胞分子机制,旨在为NP治疗药物的研发提供理论依据和新的策略。