珠子参皂苷对人胃癌细胞HGC-27的抑制作用及机制研究

目的:探讨珠子参皂苷对胃癌细胞HGC-27抑制作用及可能的机制。方法:采用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测珠子参皂苷10、20、40、60、80、100、120μg/mL对肿瘤细胞(HGC-27、A549、MCF-7)和正常细胞(MCF10a、HL-7702)增殖的影响;划痕试验和Transwell试验检测细胞迁移、侵袭能力,平板克隆和Hoechst 33258染色试验检测细胞增殖和凋亡,流式细胞术检测线粒体活性,双荧光素酶报告试验证实miR-10a靶向抑制磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α(Pik3ca)的表达;Real-time PCR法检测miR-10a、Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad mRNA表达,Western blot法检测p-PIK3CA、PIK3CA、p-AKT、AKT、非甾体类抗炎药相关基因-1(NAG-1)、BCL-2、BCL-XL、BAX、BAD、细胞色素c(Cytochrome c)、pro-Caspase-3、pro-Caspase-9、Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达。结果:珠子参皂苷对HGC-27细胞的增殖具有较强抑制作用(IC_(50)=29.77μg/mL),呈浓度依赖性显著抑制HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭,明显降低线粒体活性、增加LDH释放率、诱导细胞凋亡(P<0.05或P<0.01),证实miR-10a可靶向抑制Pik3ca表达,珠子参12.5、25、50μg/mL可上调miR-10a、Bax、Bad mRNA表达,下调Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达,上调Cytochrome c、Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、Apaf-1、AIF蛋白表达和增加BAX/BCL-2、BAD/BCL-XL蛋白及基因比率,下调NAG-1、pro-Caspase-3、pro-Caspase-9、XIAP蛋白表达和降低p-PIK3CA/PIK3CA、p-AKT/AKT比率。结论:珠子参皂苷能够抑制HGC-27胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡,其机制可能与上调miR-10a表达、抑制PI3K/AKT/NAG-1信号通路激活,进而参与调控BCL-2及Caspase家族途径有关。

华泽兰根茎石油醚部位化学成分的抗炎活性研究

目的:研究华泽兰根茎石油醚部位的五种单体化合物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞体外抗炎活性。方法:MTT法检测各化合物对RAW264.7细胞增殖的影响,ELISA、Western Blot分别检测RAW264.7细胞上清液中NO、TNF-α含量和细胞中NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白表达。结果:MTT分析显示泽兰素、化合物A、B、C和D五种单体分别在14.4μmol/L~115.6μmol/L、3.125μmol/L~25μmol/L、3.125μmol/L~25μmol/L、3.125μmol/L~25μmol/L、3.125μmol/L~5μmol/L时对RAW264.7细胞增殖没有明显抑制作用;RAW264.7细胞在用LPS刺激后,细胞上清液中NO、TNF-α含量和细胞中NLRP3、IL-18、IL-1β蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01);用泽兰素、化合物A、B、C和D干预后细胞上清液中NO、TNF-α含量和细胞中NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:华泽兰根茎中石油醚部位化学成分泽兰素、化合物A、B、C和D具有较好的抗炎作用,其作用机制与抑制NLRP3激活及炎症因子生成有关。其中以泽兰素的作用效果最为显著,依次是化合物A、C、D和B。

青钱柳不同溶剂提取物对高糖诱导大鼠胰岛细胞损伤的保护作用

目的:观察青钱柳不同溶剂提取物对高糖诱导大鼠胰岛细胞瘤细胞(INS-1)损伤的保护作用。方法:用高糖诱导INS-1细胞损伤模型。MTT法检测青钱柳水提物、30%、60%和90%醇提物对INS-1细胞增殖的影响,荧光酶标仪检测青钱柳不同溶剂提取物对胞内活性氧(ROS)含量的影响,用ELISA法测定其胰岛素分泌能力,比色法测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)和一氧化氮(NO)及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;比色法测定INS-1中Caspase-3、Caspase-9活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2/Bax比率。结果:33 mmol/L葡萄糖处理INS-148 h后可见INS-1细胞数目明显减少、细胞边缘模糊、触角收缩聚集、形态变圆,LDH释放量增加,与正常对照组比较,培养液中的NO和细胞内的ROS、MDA含量、Caspase-3、Caspase-9活性和Bax mRNA表达明显升高,胰岛素分泌量和细胞内SOD、GSH-Px、CAT活性和Bcl-2 mRNA表达及Bcl-2/Bax比率明显降低(P<0.01)。与模型对照组比较,用青钱柳不同溶剂提取物干预后INS-1细胞凋亡被显著抑制,培养液或细胞中NO、ROS、MDA含量,Caspase-3、Caspase-9活性,LDH释放量及Bax mRNA表达明显降低,胰岛素分泌和细胞内SOD、GSH-Px、CAT活性、Bcl-2 mRNA表达及Bcl-2/Bax比率明显增加(P<0.05或者P<0.01)。结论:青钱柳不同溶剂提取物对高糖诱导INS-1细胞损伤有保护作用,其作用机制与增强内源性抗氧化系统功能、抑制线粒体依赖性凋亡密切相关;其作用效果由强到弱依次为青钱柳水提物、30%、60%和90%醇提物。