背景与目的:哺乳动物细胞中雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号途径调节细胞生长、增殖、存活和凋亡。本实验是研究雷帕霉素对前列腺癌PC-3细胞的作用及其机制。方法:培养前列腺癌PC-3细胞,采用MTT法检测雷帕霉素1...背景与目的:哺乳动物细胞中雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号途径调节细胞生长、增殖、存活和凋亡。本实验是研究雷帕霉素对前列腺癌PC-3细胞的作用及其机制。方法:培养前列腺癌PC-3细胞,采用MTT法检测雷帕霉素1nmol/L作用24h、36h、48h、72h后PC-3细胞增殖的改变,流式细胞术检测作用不同时间细胞周期的改变,Westernblot检测雷帕霉素作用PC-3细胞24h、36h、48h、72h后raptor、rictor、Akt、pS6k1-T389、pAkt-s473的表达情况。结果:MTT结果显示雷帕霉素在作用24h时,促进了PC-3细胞增殖,但在36h显著抑制PC-3细胞增殖(P<0.01),72h时抑制作用更明显。FCM结果显示雷帕霉素作用24h时S期细胞有所增加,但作用36、48、72h后PC-3细胞的G1期细胞逐渐增加,使PC-3细胞周期主要阻滞在G1期。Westernblot检测结果显示雷帕霉素作用24h时显著抑制raptor和pS6k1-T389的表达(P<0.01);rictor、Akt表达并没有显著变化;pAkt-s473表达在雷帕霉素作用24h时反而显著增加(P<0.01),但在36h后即被显著抑制,72h几乎完全被抑制(P<0.01)。结论:延长雷帕霉素作用时间可抑制PC-3细胞增殖,其机制可能与雷帕霉素阻滞细胞周期、抑制Akt磷酸化有关。展开更多
文摘背景与目的:哺乳动物细胞中雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号途径调节细胞生长、增殖、存活和凋亡。本实验是研究雷帕霉素对前列腺癌PC-3细胞的作用及其机制。方法:培养前列腺癌PC-3细胞,采用MTT法检测雷帕霉素1nmol/L作用24h、36h、48h、72h后PC-3细胞增殖的改变,流式细胞术检测作用不同时间细胞周期的改变,Westernblot检测雷帕霉素作用PC-3细胞24h、36h、48h、72h后raptor、rictor、Akt、pS6k1-T389、pAkt-s473的表达情况。结果:MTT结果显示雷帕霉素在作用24h时,促进了PC-3细胞增殖,但在36h显著抑制PC-3细胞增殖(P<0.01),72h时抑制作用更明显。FCM结果显示雷帕霉素作用24h时S期细胞有所增加,但作用36、48、72h后PC-3细胞的G1期细胞逐渐增加,使PC-3细胞周期主要阻滞在G1期。Westernblot检测结果显示雷帕霉素作用24h时显著抑制raptor和pS6k1-T389的表达(P<0.01);rictor、Akt表达并没有显著变化;pAkt-s473表达在雷帕霉素作用24h时反而显著增加(P<0.01),但在36h后即被显著抑制,72h几乎完全被抑制(P<0.01)。结论:延长雷帕霉素作用时间可抑制PC-3细胞增殖,其机制可能与雷帕霉素阻滞细胞周期、抑制Akt磷酸化有关。
