层析填料中顽固色素去除的新方法研究

对纯化工艺中因铁离子污染形成黄褐色的阴离子填料进行了研究。该色素在碱性条件下产生并加重,利用常规方法高盐、表面活性剂均无法清除。作者使用磷酸、醋酸、柠檬酸、盐酸进行测试,发现浓磷酸去除填料色素的能力高于柠檬酸,而浓醋酸和浓盐酸不能明显去除填料色素。基于上述结论,进一步研究磷酸在不同浓度和不同处理时间下对填料中色素的影响。结果发现,随着磷酸浓度的增加,铁离子质量浓度和载量相应增加;然而,随着孵育时间的延长,填料载量虽然相应增加,但是铁离子质量浓度却逐渐降低。由此推断,在磷酸处理填料色素的过程中,随着孵育时间的增加,铁离子可能与填料内腔的多孔结构发生二次吸附,使得溶液中的铁离子逐渐减少。通过数据分析结合颜色比较确定,0.5 mol/L磷酸孵育阴离子填料8.75~11.35 min可以显著去除铁离子带来的顽固色素问题,使得填料载量恢复如初,同时也避免相关杂质污染最终蛋白质产品。本研究的去除层析填料杂质的新方法可为相关生物制品在下游工业化领域中降本增效提供参考。

基于网络药理学探究EGCG干预MDA-MB-231细胞的潜在分子机制

基于网络药理学分析绿茶中的主要多酚物质表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin Gallate,EGCG)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的潜在作用靶点及其分子机理。使用数据库检索EGCG和MDA-MB-231的潜在靶点,两者的靶点基因相互映射取交集,获得共同作用靶点;借助软件Cytoscape 3.8.0绘制“靶点-通路”网络互作图、String数据库构建靶点蛋白的互作网络关系(Protein-Protein Interaction,PPI),基于Metascape平台对靶点进行基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析;通过分子对接和体外实验验证预测结果。结果表明:通过挖掘,共获得EGCG靶点537个,MDA-MB-231靶点181个,取交集获得88个共同潜在靶点,进一步筛选保留30个核心作用靶点;获得20条核心GO生物进程和17条KEGG信号通路,涉及到癌症信号通路,毒性耐受通路,胰腺癌通路、直肠癌通路,小细胞肺癌通路等;分子对接结果显示,EGCG可以通过非共价键与β-连环蛋白(β-catenin)结合;体外实验表明,肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor,HGF)能够诱导β-catenin的表达,而EGCG能够抑制HGF诱导的β-catenin的表达上调。EGCG可以通过多靶点、多途径干预MDA-MB-231,已经初步证实EGCG可以影响HGF/β-catenin途径。

CAR-T免疫疗法:肿瘤靶向治疗的新策略

嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)细胞是一种全新的治疗恶性肿瘤的策略,它有别于传统的手术、放疗、化疗、抗体药物治疗。CAR-T细胞疗法在血液肿瘤的治疗中有显著疗效。本文将综述CAR-T的结构和抗肿瘤的原理、CAR-T细胞在临床上的应用以及CAR-T细胞治疗所面临的挑战及广阔前景。

重组抗CD25人源化单克隆抗体结合活性测定法的建立及方法验证

目的:建立重组抗CD25人源化单克隆抗体结合活性测定法并对其进行方法验证。方法:采用间接ELISA法建立抗原-抗体-二抗结合反应体系,用四参数计算法拟合其结合曲线,计算供试品的结合活性。结果:方法具有良好的专属性、精密度、相对准确度、线性和耐用性。在64%~156%水平范围内,精密度验证各水平的GCV值均在15%以内;相对准确度验证各水平的相对偏倚置信区间均在±12%范围内,平均回收率均在80%~120%范围内;以五个水平实测值对数值对每个理论值对数值进行线性回归,线性关系良好。结论:该方法专属性好,精密度好,准确度高,可用于重组抗CD25人源化单克隆抗体结合活性的测定。

计算机化系统验证的实施基础

从用户需求说明,供应商审计与质量计划的审核,计算机化系统硬件和软件分类,风险评估,验证计划,设计说明与设计确认,安装、运行、性能确认等七个方面,阐述了计算机化系统验证的实施基础,以期能够根据不同的计算机化系统特点和要求,建立起各类计算机化系统科学、合理的验证模式或标准。

首批重组人血白蛋白蛋白质含量RS2国家标准品的研制

目的研制一种重组人血白蛋白蛋白质含量RS2国家标准品,用于重组人血白蛋白等产品的蛋白质含量测定。方法选取重组人血白蛋白产品作为原料,经质量浓度9 g·LNaCl溶液稀释后除菌过滤分装。在8家实验室按经确认和验证的方法进行协作标定并开展稳定性监测。结果8家实验室采用包括高效液相色谱法(HPLC)、福林酚法(Lowry)、紫外测定法(UV)、2,2′-联喹啉-4,4′-二羧酸法(BCA)等测定本批标准品,蛋白质含量实验室间均值为1961(Min 1904,Max 2063)μg·mL^(-1),95%置信区间(1917,2016)μg·mL^(-1);实验室间标定结果均值标准差52.89,标准误18.70,相对标准偏差(RSD)为2.70%。2~8℃持续对该标准品进行稳定性监测19个月,蛋白质含量未发生趋势性变化,建议本品按2~8℃保存和运输。结论重组人血白蛋白蛋白质含量RS2国家标准品符合相关规定,可以发放用于重组人血白蛋白相关的质量控制。

重组抗HER2人源化单克隆抗体联合长春瑞滨治疗HER2阳性转移性乳腺癌随机对照Ⅲ期临床研究

目的评价注射用重组抗人表皮生长因子受体2(HER2)人源化单克隆抗体(赛普汀)联合长春瑞滨用于HER2阳性转移性乳腺癌的临床疗效和安全性。方法受试者按2∶1比例随机至试验组和对照组,试验组接受赛普汀(首剂4 mg/kg,维持剂量每周2 mg/kg,静脉滴注)联合长春瑞滨(25 mg/m^2,第1,8,15天/28天,静脉滴注)治疗;对照组接受长春瑞滨(25 mg/m^2,第1,8,15天/28天,静脉滴注)化疗。主要研究终点为无进展生存期(PFS)。结果 2009年1月至2013年1月期间共纳入受试者315例(试验组212例,对照组103例)。试验组较对照组中位PFS显著延长,为39.1周比14.0周(HR=0.24;95%CI,0.16-0.36;P<0.000 1)。试验组客观缓解率(ORR)和疾病控制率(DCR)较对照组均显著提高,ORR为46.7%比18.45%(P<0.000 1),DCR为79.72%比45.63%(P<0.000 1)。中性粒细胞减少、白细胞减少和红细胞减少在两组发生率均较高,但组间差异无统计学意义。与赛普汀相关的不良反应最常见的为输注反应。共5例受试者治疗中心脏左室射血分数降低至低于50%,均可恢复,未出现严重心脏毒性。结论赛普汀联合长春瑞滨具有显著疗效和良好安全性,是用于紫杉类治疗后的HER2阳性晚期乳腺癌的优选方案,为中国HER2阳性乳腺癌患者提供了更多靶向治疗机会。

新型抗体偶联药物607-LDM的制备及抗肿瘤活性研究

抗体偶联药物(antibody-drug conjugates,ADCs)是目前肿瘤治疗药物中最重要的种类之一。人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)特异性高表达于乳腺癌和卵巢癌等多种实体肿瘤,已被证实是ADC的理想靶点。力达霉素(lidamycin,LDM)是中国医学科学院医药生物技术研究所自主研发的强效烯二炔抗肿瘤抗生素,其分子具有可拆分和重建的特点,适于用作ADC的"弹头"药物。本研究利用LDM的分子特点,采用特殊"定点偶联"技术,制备药物抗体比(drug-to-antibody ratio,DAR)为2的抗HER2抗体607与力达霉素的ADC 607-LDM,并研究其抗肿瘤活性,结果表明:607-LDM在体外对人卵巢癌SKOV3和乳腺癌BT-474细胞有强烈杀伤活性,还可诱导二者发生细胞凋亡和G2/M期阻滞。在SKOV3裸鼠移植模型中(动物实验符合中国实验动物护理和使用准则,并经中国医学科学院医药生物技术研究所实验动物伦理委员会批准),1.0 mg·kg^(-1)607-LDM尾静脉注射1次,抑瘤率为72.4%,显著强于单独抗体组(30.2%)、LDM最大耐受剂量组(50.6%)及二者联用组(50.1%)。本研究构建的新型ADC药物607-LDM有望成为治疗HER2阳性肿瘤的候选药物。

抗白细胞介素-17抗体治疗自身免疫性疾病的临床研究

IL-17作为Th17细胞的主要效应因子,在炎症反应的发生及发展过程中具有重要作用。Th17和IL-17的发现及其在炎症反应中的致病机制的研究,为自身免疫性疾病尤其是银屑病提供了新的治疗策略。本文就目前国际上针对IL-17信号通路的治疗药物的主要适应证及临床研究进展进行了综述,重点阐述了secukinumab,ixekizumab,brodalumab 3个药物在临床治疗作用上的表现。