基于特征肽段的液相色谱质谱联用技术对核桃、杏仁露进行掺假鉴别

建立液相色谱串联质谱法测定核桃、杏仁、大豆和花生中的蛋白成分,并定量检测核桃露和杏仁露中常见外源成分大豆和花生的含量。样品经蛋白质提取,胰蛋白酶酶解后,采用高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(high performance liquid chromatography coupled with quadrupole-exactive mass spectrometry,HPLC-Q-Exactive-MS)检测,数据经Proteome Discoverer软件与Uniprot蛋白数据库对比分析,筛选出各物种的特征肽段,然后利用高效液相色谱-三重四极杆质谱(high performance liquid chromatography coupled with triple quadrupole tandem mass spectrometry,HPLC-QQQ-MS)对核桃、杏仁、大豆和花生的特征多肽进行验证和多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)定量测定。经验证,鉴别方法有良好的专属性和高灵敏度,核桃露和杏仁露中核桃、杏仁、大豆和花生的最低检出限分别为16.3、7.7、1.3和6.8 mg/kg。该方法准确、灵敏,可有效分析植物蛋白饮料中各类蛋白质的来源,对食品植物源性成分的鉴定具有重要意义。

基于HPLC-Q-Exactive的PRM技术检测核桃露中核桃、杏仁、花生、大豆源性成分

应用高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱的PRM技术,检测核桃露中核桃、杏仁和主要掺杂物种大豆、花生4种源性成分。从植物组织(核桃、杏仁、大豆和花生)提取的蛋白质,经还原、烷基化、胰蛋白酶酶解后,采用HPLC-Q-Exactive的Full MS-ddMS2(TopN)模式检测,数据经Proteome Discoverer软件与Uniprot蛋白数据库对比分析,筛选出各物种的特征肽段,然后根据这些肽标志物的质荷比和出峰时间建立HPLC-Q-Exactive-PRM检测方法,并使用Skyline软件对特征肽进行定量分析。结果表明:核桃露中核桃蛋白、杏仁蛋白、大豆蛋白和花生蛋白的最低检出限分别为10、30、20 mg/L和10 mg/L。经验证,该检测技术具有良好的专属性,比MRM技术更为准确、可靠,且有效消除了其他离子的干扰,为植物蛋白饮料物种来源鉴定提供了一种稳定、灵敏、可靠的检测技术。