中期因子诱导上皮间质转化促进结直肠癌细胞增殖和侵袭的分子机制

目的:探讨中期因子(midkine,MK)诱导肠癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)促进结直肠癌增殖和侵袭的分子机制。方法:MTT法检测MK对肠癌细胞增殖及侵袭的影响,倒置显微镜下观察其形态学变化,Western blot检测其EMT标志物、NF-κB(p65)、Zbe1和MMP-9蛋白表达变化。结果:在10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml和200ng/ml的MK作用下,SW480细胞的增殖率分别为:(106.33±4.57)%、(119.83±6.01)%、(148.52±8.3 1)%和(1 6 2.5 1±8.9 8)%,(F=70.954,P<0.01);HCT116细胞的增殖率分别为:(116.49±9.77)%、(129.79±2.31)%、(155.38±8.98)%和(158.11±6.75)%,(F=55.027,P<0.01)。100ng/ml MK作用下,SW480细胞的侵袭数为每视野(40.34±2.52)个,而NF-κB信号通路抑制剂5μmol/L Bay11-7082预处理后的侵袭数为每视野(14.13±2.06)个,(F=41.391,P<0.01);HCT116细胞的侵袭数为每个视野(42.21±3.25)个,而Bay1 1-7 0 8 2预处理后的细胞侵袭数为每视野(14.32±2.52)个,(F=69.206,P<0.01)。MK诱导SW480和HCT116呈现梭形或长条形改变,E-cad蛋白表达下调,Vimentin、β-catenin、NF-κB(p65)和MMP-9蛋白表达上调,而Zbe1蛋白表达无明显变化。结论:MK通过上调NF-κB(p65)信号蛋白诱导肠癌细胞上皮间质转化,促进下游靶蛋白MMP-9表达上调,从而促进肠癌细胞增殖和侵袭。

CCL20通过AKT/MMP3轴而非EMT途径诱导结肠癌SW480细胞的侵袭和转移

目的:探讨趋化因子CCL20/CCR6促进结肠癌SW480细胞侵袭和迁移的分子机制。方法:筛选高表达CCR6的结肠癌SW480细胞,加入外源性重组人CCL20后,采用Transwell、划痕愈合实验检测其侵袭和迁移能力,以免疫荧光、WB实验检测SW480细胞EMT标志蛋白、AKT信号蛋白以及靶标蛋白MMP3的表达;通过MK2206阻断实验验证AKT信号是其作用机制,通过TCGA数据库资源(https://portal.gdc.cancer.gov/)分析CCL20和MMP3在结直肠癌组织中的表达水平及其相关性。结果:趋化因子CCL20能够明显促进结肠癌SW480细胞侵袭和迁移(均P<0.01),其间并不伴随细胞的EMT变化,而是通过AKT信号的激活及下游靶标蛋白MMP3表达上调是其诱因之一;阻断AKT信号能够明显抑制SW480细胞侵袭和迁移能力,且下调MMP3的表达水平(P<0.05或P<0.01)。TCGA平台数据提示,结肠癌组织中CCL20和MMP3的表达明显高于正常肠黏膜组织,且两者呈明显正相关(r=0.051,P<0.01)。结论:趋化因子CCL20通过AKT/MMP3信号轴而非EMT机制促进结肠癌SW480细胞的侵袭和迁移。