茵陈蒿汤干预二甲基亚硝胺大鼠肝硬化效应的方证病理学基础研究

目的基于清热利湿与滋养肝肾不同功效古典方剂的干预效应,探讨二甲基亚硝胺(dimethylni-trosamine,DMN)诱导大鼠肝硬化的方证病理学基础。方法腹腔注射DMN4周制备大鼠肝硬化模型,造模2周末取6只模型大鼠作给药前观察,其余模型大鼠随机分为模型对照组、茵陈蒿汤(yinchenhao Decoc-tion,YCHD)组及一贯煎(yiguanjian,YGJ)组;各组于继续造模同时给予不同方剂的煎剂经口灌胃2周,正常大鼠与模型对照组给予同量等渗盐水,4周末处死大鼠,获取血清与肝组织样品,观测肝功能、肝组织病理学、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)与羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,检测肝组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase,GST)活性;免疫印迹检测肝组织α-SMA、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、血小板衍生生长因子(platelete-derived growth factor,PDGF)以及肝脂肪酸结合蛋白(liver fatty acid bindingprotein,L-FABP)、转铁蛋白(transferrin,Tf)表达的变化。结果与模型对照组比较,YCHD组肝功能显著改善;肝组织Hyp含量与α-SMA蛋白表达显著降低(P<0.05),显著抑制DMN大鼠肝硬化的形成,而YGJ无明显作用。肝组织TNF-α与PDGF表达在YCHD组显著减少,而YGJ组TNF-α进一步增加,PDGF无明显变化;YCHD组肝组织MDA含量与GST活性显著降低(P<0.01或P<0.05),GSH含量、L-FABP及Tf蛋白表达显著增加(P<0.05),而YGJ组仅见GSH显著增加(P<0.05)。结论茵陈蒿汤显著抑制DMN大鼠肝硬化的形成;DMN大鼠肝硬化形成期的肝组织炎性病变及其过氧化损伤是茵陈蒿汤清热利湿效应的方证病理学基础。

基于均匀设计分析黄芪汤活性组分抗二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化的配伍作用

目的筛选古典方剂黄芪汤抗肝纤维化的有效组分及配伍作用。方法 (1)4周内给大鼠腹腔注射二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)12次制备肝纤维化模型,于造模第3周首日开始给药干预至4周末。采用均匀设计对黄芪汤中4种组分(分别为黄芪总皂苷、黄芪总黄酮、甘草酸、甘草总黄酮)以4因素8水平安排给药;以肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性为观测指标,采用逐步回归法分析其抗肝纤维化效应的最优组方。(2)组分复方的再验证:模型制备及给药方法同上,采用上述实验获得的组分复方,与原方对照,观测大鼠肝组织胶原染色、Hyp含量及血清肝功能等变化。结果通过均匀设计研究,确定最优组方为组分复方(黄芪总皂苷、甘草酸的配伍比例为164:48),并得到有效验证。与模型组比较,组分复方及黄芪汤均可显著改善肝纤维化病理组织学变化,显著降低肝组织Hyp含量、血清ALT、天冬氨酸氨基转移酶(AST)以及碱性磷酸酶(ALP)活性(P<0.05);组分复方在降低肝组织Hyp含量及降低血清ALT活性方面均优于其分别单用组(P<0.05),降低血清ALT活性的作用优于黄芪汤原方(P<0.05)。结论黄芪总皂苷和甘草酸是黄芪汤发挥抗DMN大鼠肝纤维化作用的有效组分;两个组分配伍在降低肝组织胶原沉积及降低血清ALT活性方面具有明显的协同效应。

扶正化瘀方调节差异微小RNAs表达的抗肝纤维化的作用机制

目的筛选出扶正化瘀方(FZHY)调控的差异微小RNAs(miRNAs),并对这些差异miRNAs进行生物功能分析,部分揭示FZHY抗肝纤维化的作用机制。方法 CCl4皮下注射制备小鼠肝纤维化模型,分为正常组、模型组及FZHY组;自造模前3 d开始给药,1次/d,共8周。天狼星红染色及羟脯氨酸(Hyp)含量测定观察肝组织胶原沉积。应用miRNAs芯片检测各组小鼠肝脏miRNAs表达谱。基于miRNAs表达谱筛选出正常组、FZHY组与模型组具有相同变化趋势的差异miRNAs,即FZHY调控的miRNAs,并以qRT-PCR进行验证。采用Target Scan及PITA数据库对miRNAs靶基因进行预测,并采用DAVID数据库对这些预测的靶基因进行功能分析及信号通路分析,发现其调控的显著性功能及信号通路。多组间比较采用方差分析,miRNA差异基因筛选采用随机方差模型的t检验。结果 FZHY可明显降低纤维化肝组织Hyp含量,减轻胶原沉积。miRNAs芯片分析共发现3个FZHY调控的miRNAs,分别为:mmu-miR-322、mmu-miR-342-3p和mmu-miR-296-5p。信号通路分析共得到32条这些miRNAs可能调控的信号通路,其中趋化因子信号通路、黏着斑、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、肌动蛋白细胞骨架调节、间隙连接、细胞外基质蛋白相互作用、Wnt信号通路、Jak-STAT信号通路等与肝纤维化密切相关;功能富集分析共得到32项显著性功能,其中三磷酸尿苷(GTP)酶活性调节、细胞连接、凋亡调节、Ras蛋白信号转导调节及小GTP酶活性调节等与肝纤维化密切相关。结论下调miR-322,miR-342-3p及miR-296-5p表达,从而调节这些miRNAs对应的相关功能,如MAPK信号通路、Wnt信号通路、凋亡调节及Ras蛋白信号转导调节等可能是扶正化瘀方抗肝纤维化的作用机制,值得进一步研究。

中药联合核苷和核苷酸类药物治疗慢性乙型肝炎的系统评价

目的系统评价中药联合核苷和核苷酸类药物治疗慢性乙型肝炎的疗效。方法检索中国期刊全文数据库、万方中国学位论文全文数据库、维普期刊全文数据库、中国生物医学文献数据库、MEDLINE、Embase、BIOSIS等数据库,纳入国内外公开发表的以中药联合核苷和核苷酸类药物为试验组,核苷和核苷酸类药物为对照组的治疗慢性乙型肝炎的随机对照试验(RCT);采用Jadad评分来评估各个研究的质量;研究数据的统计学分析使用Cochrane协作网提供的Revman5.0软件完成,采用固定或随机效应模型汇总研究结果。结果最终纳入14个随机对照试验,1篇研究方法学Jadad评分为3分,1篇为2分,其余为1分,共1386例慢性乙型肝炎患者,其中试验组703例,对照组683例。对于14篇的Meta分析显示:在治疗6个月和12个月时肝功能复常率(ALT、AST)和病毒学指标(HBeAg阴转率、HBeAg血清转换率、HBV DNA阴转率),联合干预组均优于对照组,两组比较差异有统计学意义;对于YMDD变异发生率,在6个月时两组差异无统计学意义,而继续治疗至12个月,联合干预组优于对照组。结论本系统评价结果表明,6个月以上的中药联合核苷和核苷酸类药物干预能明显改善慢性乙型肝炎患者肝功能(ALT、AST)以及HBeAg阴转率、HBeAg血清转换率、HBV DNA阴转率、YMDD变异发生率,优于核苷和核苷酸类药物单用。由于系统评价纳入的RCT和患者数量有限,且存在选择性偏倚和发表偏倚,期待有高质量的随机双盲对照实验提供有效证据。

慢性肝病量表在乙型肝炎肝硬化中的应用评价

目的评价慢性肝病量表（CLDQ）在乙型肝炎肝硬化中应用的信度和效度。方法将CLDQ用于297例乙型肝炎肝硬化患者的自评，同时评定患者肝功能Child分级，并以117例健康者为对照。通过条目分析、精密度分析、信度分析、探索性因子分析，以及反应度、区分度分析对量表进行总体评价。计数资料用疋。检验，计量资料两组间比较用两独立样本t检验，多组间比较用单因素方差分析，两两比较用Scheffe法。内部一致性以Cronbach＇s α系数、Gunman分半系数考察，相关性分析用Pearson相关系数，或Spearman相关系数以，方差分析考察区分度，结构效度检验用探索性因子分析的主成分法，并进行最大方差正交旋转。结果量表条目、量表整体及各维度无明显地板效应；条目的天花板效应大部分为30％～60％，腹部症状、活动和焦虑3个维度的天花板效应〈30％。总量表的内部一致性较好（Cronbach’s α=0．905），不同维度的内部一致性（Cronbach＇s α）为0．442～0．848；总量表与各维度相关系数均〉0．6（P值均〈0．01）。健康组量表总得分、各维度得分显著高于患者组垆值均〈0．01），患者组量表总得分和其中的4个维度得分在与不同肝功能分级之间呈现梯度变化，Child分级越重得分越低。探索性因子分析提取的7个公因子与原维度有中等的吻合度。结论CLDQ在乙型肝炎肝硬化中的应用具有较好的信度、内容效度、反应度和区分度，精密度和结构效度中等，可有效用于对乙型肝炎肝硬化患者的生活质量以及疗效的评价。

基于肝组织差异蛋白质组解析黄芪汤治疗二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化的效应机制

目的:基于肝组织差异蛋白质组表达解析黄芪汤治疗二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)大鼠肝纤维化的效应机制。方法:4周内给大鼠ip DMN 12次制备肝纤维化模型,成模后停止染毒,随机分为模型对照组与治疗组,治疗组以黄芪汤ig 2周;双向凝胶电泳(2-DE)分离肝组织总蛋白,用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱和肽质量指纹图谱分析鉴定部分差异表达蛋白质;蛋白质免疫印迹法及生化学方法对过氧化还原蛋白6(Prdx6)、热休克蛋白70(HSP70)及过氧化氢酶(CAT)活性进行验证。结果:鉴定的18个蛋白中7个与脂质代谢紊乱及过氧化损伤相关,3个与蛋白合成、加工和降解相关,2个与生物转化相关,3个与能量代谢相关。验证的3个蛋白点(Prdx6,Hsp70,CAT)与双向电泳分析结果基本一致。结论:过氧化损伤是DMN诱导大鼠肝硬化形成的重要病理环节,提高机体内在的抗氧化能力、抗氧化应激效应是黄芪汤逆转大鼠肝硬化的主要机制之一。

乙肝后肝硬化患者报告结局评价量表条目的建立及筛选

目的:在中医理论指导下,对先期所构建的乙型病毒性肝炎(以下简称"乙肝")后肝硬化患者报告结局评价量表(PHBC-PRO)预试表进行条目筛选及考核,为乙肝后肝硬化的中医临床疗效评价提供科学、客观、可量化的工具。方法:基于病证结合研究思路及前期临床流行病学调查结果,建立由64条条目组成的PHBC-PRO量表条目池及预调查表。通过对临床预调查的147例患者量表资料采用条目分布考察法、t检验法、离散趋势法、分辨力系数法、相关分析法、克朗巴赫系数法等方法的分析,对条目进行筛选与优化。结果:设定条目被所选方法中至少4种同时删除为筛选标准,最终形成由57个条目组成、涵盖3个领域(生理、心理及社会)的PHBC-PRO量表,经克朗巴赫系数法检验,提示信度较好(α=0.955)。结论:遵循国际PRO量表研制的原则和方法构建的中医PHBC-PRO量表,符合中医理论及量表规范、具较强的可操作性及适用性,可用于中医对乙肝后肝硬化患者临床证候及疗效的客观评价。

恩替卡韦致肝功能恶化1例

抗病毒治疗是治疗慢性乙型肝炎（chronic hepatitisB，CHB）的关键，只要有适应证，且条件允许，就应该进行规范的抗病毒治疗。新一代核苷（酸）类似物恩替卡韦（entecavir），自2005年11月被国家食品药品监督管理局批准上市以来，为我国CHB患者的治疗提供了一个新的选择，