癌毒传舍的中医病机探讨

在“癌毒传舍的中医病机初探”一文的基础上,本文进一步探讨癌毒传舍的中医病机内涵。基于中医理论深入阐释癌毒传舍的病因病机,对于中医药防治恶性肿瘤复发转移具有重要的理论和实践意义。本文从癌毒传舍的定义、病因病机、传舍途径以及防治原则等方面进行深入探讨,提出“虚、痰、瘀、郁、火(热)、毒”是癌毒传舍主要病机的学术观点;强调中医药在防治癌毒传舍的过程中要遵循扶正解毒、去宛陈莝、分期论治、防治未病、调畅情志、杂合以治、以平为期、谨守病机的防治原则。

代谢组学在肝病中医证候研究中的应用述要

证候是中医临床诊断和治疗的核心内容,是机体在疾病发展过程中某一阶段的病理概括。代谢组学可以反映机体在不同生理病理状态下代谢物水平的变化情况,其整体性、综合性、动态性等特点与中医证候的特性高度契合。通过综述代谢组学在肝癌、肝硬化、肝炎等肝病中医证候研究中的应用情况,探讨肝病中医证候的内在机制及物质基础,助力中医客观化研究,进而指导中医临床决策。

以科研素养为导向的中医药院校生物化学综合实验体系改革初探

生物化学实验课程是连接基础与临床的桥梁,是中医药院校的基础课程,但普遍存在内容较为陈旧、综合性和创新性不够等问题,不利于学生综合科研素养和创新能力的提升。本研究建立以科研素养为导向的生物化学综合实验体系,注重中医药与思政元素在课程中的渗透,并融合全英文教学,以提高学生的创新思维和实践能力,提高生物化学教学质量,为培养中医药拔尖创新型人才奠定基础。

基于网络药理学和分子对接探讨六味地黄丸异病同治老年性聋和阿尔茨海默病的作用机制

目的借助网络药理学和分子对接的方法探讨六味地黄丸异病同治老年性聋和阿尔茨海默病(AD)的共同分子机制,并采用细胞实验进行验证。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、成分靶点数据库(SwissADME)获取六味地黄丸有效成分,并结合基因和化学物质相互作用预测数据库(STITCH)获取作用靶点。利用人类基因综合数据库(Genecard)、人类疾病相关基因与突变位点信息数据库(DisGeNET)获取老年性聋和AD靶点。使用Cytoscape 3.7.1软件构建“中药-成分-靶点-疾病”网络,借助蛋白互作网络分析数据库(STRING)构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,获取核心靶点。利用富集分析数据平台(Metascape)对共有靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。采用AutoDock Vina 1.1.2软件对核心靶点与相关成分进行分子对接。采用过氧化氢(H2O2)致PC12细胞氧化损伤模型,观察六味地黄丸的作用。采用细胞计数(CCK-8)法观察细胞存活率,活性氧(ROS)检测试剂盒检测ROS水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平,Western blot法检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化-蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达。结果共获得六味地黄丸有效成分86种,主要来自薯蓣皂素、视黄醇、丹皮酚、软脂酸等化合物,六味地黄丸防治老年性聋和AD共有靶点49个,核心靶点为AKT1、TNF、IL-6、MMP-9等。GO分析表明这些共有靶点主要参与对氧化应激的反应、对脂多糖的反应等生物进程。KEGG通路分析显示,共有靶点主要涉及缺氧诱导因子-1(HIF-1)、核因子-κB(NF-κB)等信号通路。分子对接结果显示,TNF-α、IL-6、AKT1、MMP-9与相关成分均存在结合可能。细胞实验结果发现,六味地黄丸含药血清可以增强细胞存活率,降低细胞ROS、TNF-α、IL-6水平,增加MMP-9蛋白表达水平,降低p-AKT蛋白表达水平。结论六味地黄丸异病同治老年性聋和AD具有物质基础,其共同的分子机制,可能是通过薯蓣皂素、视黄醇、丹皮酚等多种成分,作用于AKT、TNF-α、IL-6、MMP-9等核心靶点,抑制炎症反应和氧化应激,减少神经元死亡。

雪旺细胞来源的外泌体miR-21通过靶向SPRY2促进大鼠坐骨神经损伤后修复的研究

目的:研究高表达miR-21的雪旺细胞(Schwann cells,SC)来源外泌体对坐骨神经损伤(sciatic nerve injury,SNI)的修复作用及机制。方法:分别采用空载慢病毒和高表达miR-21的慢病毒感染SC株,收集SC上清外泌体并进行鉴定。采用神经断端吻合术建立SNI大鼠模型,术后随机分为模型组、SC来源外泌体组和高表达miR-21的SC来源外泌体组(n=10)。其中,SC来源外泌体组和高表达miR-21的SC来源外泌体组分别采用体外收集的外泌体局部注射进行治疗,3周后行为学实验检测神经功能恢复,免疫荧光染色评价SNI后轴突髓鞘再生,RT-q PCR检测血清外泌体miR-21及神经组织中miR-21和SPRY2的表达水平,双荧光素酶报告基因实验体外验证miR-21和SPRY2之间的靶向互作。结果:与模型组相比,其余各组大鼠坐骨神经功能和神经再生情况均出现明显改善,RT-q PCR结果显示血清外泌体及神经组织中miR-21的表达水平显著升高,神经组织中SPRY2的表达水平显著降低,其中高表达miR-21的SC细胞来源外泌体组较SC来源外泌体组变化更显著;双荧光素酶报告基因实验表明miR-21靶向调节SPRY2的表达。结论:高表达miR-21的SC来源外泌体通过靶向SPRY2显著促进SNI后修复。

金松双黄酮抑制JAK2/STAT3通路对脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应的影响

目的探究金松双黄酮(SCI)调控酪氨酸激酶2/信号转导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路,对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞炎症反应的影响。方法①采用格里斯(Griess)试验试剂检测不同浓度SCI(1.25~40μmol·L^(-1))干预对经LPS刺激后BV2小胶质细胞培养液中亚硝酸盐含量的影响。②采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测不同浓度SCI(1.25~40μmol·L^(-1))干预的BV2小胶质细胞活性以此判断SCI对BV2小胶质细胞毒性作用。③将BV2小胶质细胞以2×10^(6)个/孔接种于6孔板中,并将其随机分为对照组(Ctrl组)、对照+SCI组(Ctrl+SCI组)、模型组(LPS组,100μg·L^(-1))、模型+SCI组(LPS+SCI组),各组进行相应干预。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测SCI对LPS刺激BV2细胞的促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和诱导一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的影响;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测白介素-6(IL-6)、TNF-α的蛋白水平;Western blot法检测JAK2/STAT3信号通路磷酸化酪氨酸激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)以及iNOS蛋白表达。结果①Greiss法结果显示,1.25~40μmol·L^(-1) SCI均显著降低LPS刺激的BV2小胶质细胞产生的亚硝酸盐(P<0.05)。②MTT法结果显示,1.25~20μmol·L^(-1)浓度的SCI对BV2小胶质细胞的活性没有影响。③RT-qPCR结果显示,与LPS组比较,LPS+SCI组中iNOS、TNF-αmRNA的表达量下降(P<0.05);ELISA法结果显示,与LPS组比较,LPS+SCI组中IL-6、TNF-α的蛋白表达量下降(P<0.05);Western blot结果显示,与LPS组比较,LPS+SCI组中p-JAK2、p-STAT3、iNOS蛋白表达降低(P<0.05)。结论SCI能够通过抑制JAK2/STAT3信号通路发挥对LPS刺激的BV2小胶质细胞的抗炎作用。

银杏酮酯对小胶质细胞炎症诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨银杏酮酯(GBE50)通过抑制小胶质细胞的炎症反应对神经元突触损伤的影响。方法①采用格里斯(Griess)试剂检测不同浓度GBE50(25~400 mg·L^(-1))干预对经脂多糖(LPS)刺激后BV2小胶质细胞培养液中亚硝酸盐含量的影响。②不同浓度GBE50(25~400 mg·L^(-1))干预经LPS刺激的BV2小胶质细胞,收集上清液作为条件培养基(CM)处理PC12细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测BV2小胶质细胞和PC12细胞活力。③将对数生长的BV2和PC12细胞以2×106个/孔铺板于6孔板中,分为空白对照组(Ctrl组,仅培养液培养),对照加药组(Ctrl+GBE50组,GBE50干预浓度为200 mg·L^(-1)),模型组(LPS组,LPS刺激浓度为100μg·L^(-1)),模型加药组(LPS+GBE50组,GBE50预处理1 h后,加入LPS),各组进行相应干预。采用Western blot、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测CM处理的PC12细胞N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)亚基蛋白及基因表达量。结果①Greiss法结果显示,GBE50干预可降低LPS刺激BV2细胞产生的一氧化氮(NO)水平(P<0.05)。②MTT法结果显示,GBE50对BV2细胞活力无影响;LPS刺激后的CM处理PC12细胞活力显著下降,该现象在GBE50干预的CM中有所改善,GBE50浓度在200 mg·L^(-1)时细胞活力已无明显下降(P<0.05)。③Western blot结果显示,与LPS组比较,LPS+GBE50组中NMDAR亚基NR1、NR2A和NR2B蛋白表达升高(P<0.05);RT-qPCR结果显示,与LPS组比较,LPS+GBE50组中NMDAR亚基基因表达量均增加(P<0.05)。结论GBE50可通过抑制激活小胶质细胞的炎症反应,减少NMDAR的损伤,对神经元突触起到保护作用。

人体解剖学课程教学中处理学生提问的策略与方法

在人体解剖学教学过程中会遇到很多学生提问,处理学生提问的策略和方法可以传递思政价值,但目前尚未见解剖学教师对此问题的研究报道。本研究就围绕人体解剖学教学过程中的学生提问,探讨处理问题的策略和方法,并就如何在处理学生提问的策略和方法中融入课程思政进行了归纳、分析。希望通过充分利用好这些问题,将学生掌握相对薄弱的点转变为学生掌握最牢固的点,借此激发学生学习的兴趣点,增强学生克服困难的信心和勇气。同时,在解决问题的过程中,强化学生自主分析问题和处理问题的能力,培养学生对待问题的严谨、积极、自信、科学的态度,进而增强学生的创新精神。

结直肠癌肝转移患者的血浆胆汁酸谱特征及临床价值

目的分析不同转移情况结直肠癌患者血浆胆汁酸含量及胆汁酸谱分布的差异,并评估血浆胆汁酸含量比值联合肿瘤标志物对结直肠癌肝转移的诊断价值。方法纳入2021年4月至2022年1月于上海中医药大学附属曙光医院就诊的结直肠腺癌肝转移或无转移患者163例,其中无转移组82例、肝转移组81例。收集患者的临床资料,用Karnofsky功能状态(KPS)评分评估生存质量;收集患者外周血样本,检测总胆汁酸及肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)和糖类抗原125(CA125)]水平,用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中15种胆汁酸的含量。分析两组患者胆汁酸含量及胆汁酸谱分布的差异,并绘制ROC曲线分析胆汁酸含量比值联合肿瘤标志物对结直肠癌肝转移的临床诊断效能。结果两组结直肠癌患者年龄、性别、肿瘤位置、病理分化程度、KPS评分差异无统计学意义(均P>0.05)。肝转移组患者总胆汁酸、CEA、CA125均较无转移组患者升高(均P<0.001),血浆胆汁酸谱中甘氨胆酸、脱氧胆酸、牛磺脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨熊脱氧胆酸、石胆酸和甘氨石胆酸含量均较无转移组患者升高(均P<0.05),血浆次级胆汁酸含量高于无转移组患者(P<0.001),次级胆汁酸与初级胆汁酸含量比值高于无转移组患者(P<0.001)。次级胆汁酸与初级胆汁酸含量比值联合CEA、CA125诊断结直肠癌肝转移的灵敏度为71.60%,特异度为80.49%,AUC为0.820(95%CI 0.754~0.885,P<0.001)。结论结直肠癌肝转移患者血浆胆汁酸含量升高,胆汁酸谱异于无转移患者;次级胆汁酸与初级胆汁酸含量比值联合CEA、CA125对结直肠癌肝转移有较高的诊断价值。

湿热证患者肠道菌群加重肠黏膜炎性免疫反应促大肠癌发生的作用机制

目的探讨湿热证大肠癌患者肠道菌促进肠癌发生的机制。方法健康雌性SPF级C57BL/6J小鼠随机分为3组,即健康对照粪菌移植组(HC-FMT)、湿热证大肠癌粪菌移植组(DHS-FMT)及非湿热证大肠癌粪菌移植组(Non_DHS-FMT),每组10只。各组小鼠均构建为伪无菌小鼠,再分别移植健康对照人群、湿热证大肠癌及非湿热证大肠癌患者粪便菌液;同时采用氧化偶氮甲烷(AOM)联合葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠肠癌发生。干预13周后,采用16S rRNA法检测粪菌移植后各组小鼠肠道菌群结构;观察小鼠结肠肿瘤数目及结肠病理改变;流式细胞术及实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测结肠组织免疫细胞亚群及细胞因子表达水平变化。结果粪菌移植后,各组小鼠肠道菌群结构具有明显差异。与HCFMT比较,DHS-FMT小鼠结肠肿瘤数目增多(P<0.05),结肠浸润免疫细胞(P<0.05)、树突状细胞(DC)(P<0.05)、CD4+T细胞(P<0.05)增多;Th1型转录因子T盒转录因子21(Tbx21)及细胞因子γ干扰素(IFN-γ)mRNA(P<0.05)表达水平升高;Th17型转录因子RAR相关孤儿受体C(Rorc)及细胞因子白介素-17a(IL-17a)mRNA(P<0.05)表达水平升高。结论湿热证大肠癌患者肠道菌群可促进AOM/DSS小鼠肿瘤形成、促进固有层免疫细胞浸润、诱导Th1及Th17型促炎性免疫反应、加重肠黏膜炎症,进而促进大肠癌的发生。

以高层次人才为引领的高校基础研究人才培育路径与分析

基础研究是整个科学体系的源头,是所有技术问题的总机关。其中,高层次人才是加强基础研究的主要载体,是实施人才强国战略的关键。加强以高层次人才为引领的基础研究人才培养是一条行之有效的基础研究人才培育路径。文章分析了新时代加强基础研究的重要意义以及进行高层次人才引进及培育的必要性,并以上海中医药大学中西医结合学院为例阐述了其在基础研究人才培育方面的主要做法,以期为高校在探索基础研究人才培育及高水平人才高地建设方面提供新模式及新思路。

藜芦的本草考证

结合历代医籍和近现代文献,对藜芦药材名称、基原、产地、品质评价等方面进行系统梳理与考证。历代本草记载的主流基原为百合科藜芦属植物藜芦(Veratrum nigrum L.)。藜芦别名众多,广泛分布于全国大部分地区,以根及根茎入药,以直径大、外皮土黄色、质清脆、断面粉为上乘。采收时间多为每年5~8月,净制后晒干。对于藜芦性味功效认识古今记载基本一致。本研究为藜芦药材的质量控制、临床应用及进一步开发利用提供本草文献依据。

银杏酮酯激活ATP敏感的钾通道对心肌缺血再灌注损伤大鼠的预防作用

目的观察银杏酮酯预处理对大鼠急性心肌缺血再灌注模型的预防作用。方法Langendorff离体心脏灌流建立缺血再灌注损伤模型,检测大鼠左心室心功能变化,HE染色观察心肌组织病理改变,Hoechst染色测定心肌细胞凋亡,Western blot法检测ATP敏感的钾通道(K ATP)蛋白亚基Kir6.2和SUR2表达;急性分离心室肌细胞,记录IK ATP。结果心肌缺血再灌注30 min后,mLVSP、DP、+dP/dt max降低(P<0.01),-dP/dt max、mLVDP升高(P<0.01),心肌组织损伤,心肌细胞凋亡率和SUR2亚基表达升高(P<0.01);银杏酮酯(25 mg/L)灌流使左心室DP、+dP/dt max升高(P<0.05,P<0.01),mLVDP降低(P<0.01),减少心肌组织损伤和心肌细胞凋亡率(P<0.01),这些作用可被K ATP通道的阻断剂格列本脲阻断。缺血再灌注心室肌细胞K ATP通道开放(P<0.01);而使用银杏酮酯灌流则进一步促进K ATP通道的开放(P<0.01)。结论银杏酮酯通过激活ATP敏感的钾通道,抑制缺血再灌注导致的心肌组织和心功能损伤,发挥保护心肌的作用。

针刺在周围神经损伤治疗中的研究进展

周围神经损伤(PNI)后的再生修复与功能重建是神经外科亟待解决的难题之一,其临床治疗的效果未达预期,并带来巨大的社会经济负担。针刺作为中医传统疗法,对PNI的治疗具有积极作用。现通过综述近年来针刺治疗PNI的动物模型、针刺穴位、针刺参数及治疗效应,并进一步总结针刺疗法在PNI中的作用机制,为寻求更好的治疗靶点和针刺途径提供理论依据。

小胶细胞激活和突触功能异常对阿尔茨海默病进展的影响

大量的研究支持阿尔茨海默病(AD)在病程早期脑内即出现明显的小胶质细胞激活,并诱发神经炎症反应,成为破坏突触功能的主要因素,最终导致患者出现记忆障碍和精神异常等临床症状。因此,在AD早期抑制小胶质细胞激活和突触功能下降有可能成为阻止AD病程发展的治疗时机。中医药在未病先防的作用中具有显著优势,且多种中药具有清热、解毒、安神等作用功效。本课题组近年来利用行为学、电生理、分子生物学和化学遗传学等技术,发现桂枝、甘草等中药及其有效成分对AD小鼠海马的小胶质细胞激活和突触功能下降具有显著的调节作用,从而改善AD小鼠记忆障碍,并探讨其深入的药理机制。

巨噬细胞募集和极化在电针抗炎作用中的研究进展

巨噬细胞是一种固有免疫细胞,其招募、聚集及表型变化与炎症发生发展和转归密切相关。研究表明电针通过调节巨噬细胞募集和极化发挥有效的抗炎作用,广泛用于各种炎症性疾病治疗。本文在介绍巨噬细胞募集和极化影响炎症反应的基础上,重点阐述了电针通过调控巨噬细胞在不同系统疾病中的抗炎作用,并总结了电针调节巨噬细胞极化的潜在细胞和分子机制,为电针治疗炎症性疾病提供科学的理论依据。

黄芩苷调节肠道菌群抑制高脂饮食诱导的结直肠癌肝转移研究

目的评估黄芩苷抑制结直肠癌肝转移的疗效并探讨其潜在的作用机制,为中医药防治结直肠癌转移提供科学依据。方法24只6周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组,每组6只,分别为正常饮食组、高脂饮食组、黄芩苷低剂量组(50 mg/kg,喂饲高脂饮食)和黄芩苷高剂量组(200 mg/kg,喂饲高脂饮食)。小鼠接受正常或高脂饮食喂养4周后构建结直肠癌肝转移模型,术后给药干预4周。实验期间记录各组小鼠的体质量。实验结束后采血并检测总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;称量腹股沟白色脂肪组织(iWAT)、附睾白色脂肪组织(eWAT)及背部棕色脂肪组织(BAT)的质量;记录原位肿瘤质量、肝脏质量、肝转移灶数量,计算肝脏指数(肝质量/体质量)和肝转移率;采用苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏组织形态学变化;利用16S rRNA测序分析小鼠肠道菌群变化;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测小鼠肝转移灶中上皮间质转化(EMT)标志物波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和闭合蛋白(Occludin)等相关基因mRNA的表达水平;采用皮尔森(Pearson)相关性分析方法检测肝转移灶中EMT基因表达水平与厚壁菌门细菌丰度的相关性。结果与正常饮食组比较,高脂饮食组小鼠体质量、血清TC和LDL-C水平、脂肪质量、原位肿瘤质量、肝质量、肝脏指数、肝转移灶数量及肝转移率明显增加,黄芩苷低、高剂量组上述指标均低于高脂饮食组,差异有统计学意义(P<0.05)。高脂饮食组小鼠厚壁菌门丰度上升(P<0.05),厚壁菌门/拟杆菌门比值增加(P<0.05),经黄芩苷干预后,厚壁菌门/拟杆菌门比值下降(P<0.05)。与正常饮食组比较,高脂饮食组小鼠肝转移灶Vimentin和N-cadherin mRNA表达水平明显升高(P<0.05),E-cadherin和Occludin mRNA表达水平明显降低(P<0.05);与高脂饮食组比较,黄芩苷组小鼠肝转移灶Vimentin和N-cadherin mRNA表达水平明显降低(P<0.05),E-cadherin和Occludin mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。厚壁菌门多种细菌相对丰度与Vimentin和N-cadherin mRNA表达水平呈正相关,但与E-cadherin和Occludin mRNA表达水平呈负相关。结论黄芩苷可有效抑制高脂饮食诱导的结直肠癌肝转移,且与肠道菌群结构的恢复、上皮间质转化的逆转相关。

耳聋左慈丸上调SIRT1减轻老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤的作用机制研究

目的探讨耳聋左慈丸对老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤的保护作用及其机制。方法①将27只C57BL/6J小鼠随机分为3组,即对照组、老年性聋组和耳聋左慈丸组,每组9只。耳聋左慈丸组小鼠从3月龄开始给予含有中药的饲料喂养至9月龄,老年性聋组同时喂养普通饲料;对照组采用2月龄小鼠。听性脑干反应(ABR)法检测小鼠听阈值的变化;苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠耳蜗螺旋神经节细胞形态学变化;免疫荧光染色法观察小鼠耳蜗螺旋神经节细胞微管相关轻链蛋白3(LC3)、选择性自噬接头蛋白(p62)和沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白的表达;转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素刻痕末端标记(TUNEL)法检测小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的凋亡情况。②体外实验采用C57BL/6J小鼠耳蜗基底膜离体培养模型,分为空白对照组、过氧化氢(H2O2)模型组(0.3 mmol·L^(-1))和耳聋左慈丸低、中、高剂量组(5μg·mL^(-1)、10μg·mL^(-1)和50μg·mL^(-1))。神经丝蛋白200(NF200)免疫荧光染色法观察耳蜗基底膜螺旋神经节细胞形态变化;Western blot法检测SIRT1、LC3-Ⅱ、p62、切割的半胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、半胱天蛋白酶-3(Caspase-3)的蛋白表达。结果①与对照组比较,老年性聋组小鼠(9月龄)听阈值显著升高(P<0.05),耳蜗底回螺旋神经节细胞数量显著下降(P<0.05),SIRT1蛋白表达明显下降(P<0.05),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达升高(P<0.05),TUNEL阳性细胞数表达增多(P<0.05)。耳聋左慈丸可明显降低老年性聋小鼠的听阈值(P<0.05),显著增加耳蜗底回螺旋神经节细胞的数量(P<0.05)。与老年性聋组比较,耳聋左慈丸组SIRT1蛋白表达显著增加(P<0.05),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞数显著减少(P<0.05)。②体外实验发现,与空白对照组干预措施比较,H2O2可致螺旋神经节细胞出现核碎裂或胞体皱缩,听神经纤维紊乱,SIRT1蛋白表达显著下降(P<0.05),LC3-Ⅱ和p62的蛋白表达及cleaved Caspase-3/Caspase-3比值上升(P<0.05)。与H2O2模型组干预措施比较,耳聋左慈丸可显著降低H2O2所致小鼠耳蜗基底膜螺旋神经节细胞的损伤与丢失,减少听神经纤维紊乱,耳聋左慈丸中、高剂量组SIRT1蛋白表达显著增加(P<0.05),LC3-Ⅱ、p62蛋白表达及cleaved Caspase-3/Caspase-3比值明显下调(P<0.05)。结论耳聋左慈丸可减轻老年性聋小鼠螺旋神经节细胞的退化,改善自噬,抑制凋亡,其机制可能与上调SIRT1蛋白表达有关。

葛根素治疗阿尔茨海默病作用机制的网络药理学及分子对接研究

目的运用网络药理学及分子对接的方法探究葛根素(Pue)干预阿尔茨海默病(AD)的分子作用机制,并进行动物实验验证。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、集成药效团匹配平台(PharmMapper)等获取Pue的作用靶点,利用人类基因综合数据库(GeneCards)获取AD相关靶点,映射后获取交集靶点,应用Cytoscape v3.9.1软件构建蛋白质相互作用网络图,并筛选出核心靶点进行基因功能富集分析、信号通路分析和分子对接;通过基因鉴定将5月龄的早老素1/2条件性双基因敲除(PS cDKO)小鼠给予Pue(100 mg/kg)的腹腔注射治疗,然后进行行为学测试,测试结束后取材进行分子生物学检测。结果通过筛选获得Pue干预AD的核心靶点共118个。基因本体论(GO)功能富集分析得到148个条目(P<0.05),其中生物过程条目100个,细胞组成条目23个,分子功能条目25个;京都基因和基因组百科全书数据库(KEGG)通路分析富集得到11条信号通路(P<0.05),主要包括AD信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路等。分子对接结果显示,Pue与丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)、白蛋白(ALB)、表皮生长因子受体(EGFR)、肿瘤坏死因子(TNF)、血管内皮生长因子A(VEGFA)可以对接。行为学结果显示,Pue可以改善PS cDKO小鼠受损的空间记忆(P<0.05)。免疫印迹(Western blot)结果显示,Pue下调了PS cDKO小鼠前额皮质中细胞外调节蛋白激酶(Erk1/2)的磷酸化水平的表达,并抑制了裂解的半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)的表达水平。结论基于网络药理学和实验研究表明,Pue可以通过多靶点、多通路发挥对AD的干预作用,在临床和新药研发中具有参考价值。

基于网络药理学及实验验证研究地黄饮子防治阿尔茨海默病作用机制

目的:采用网络药理学结合实验验证,探讨地黄饮子防治阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、HERB数据库获取地黄饮子化学成分,基于药代动力学信息与文献检索筛选符合条件的有效成分,综合TCMSP、SwissTargetPrediction、STITCH数据库获取对应靶点。利用Therapeutic Target Database、GeneCards、DisGeNET数据库收集AD靶点。利用Cytoscape 3.7.1软件构建“中药-成分-靶点”网络。利用Metascape在线工具对靶点进行GO和KEGG通路富集分析。利用东莨菪碱构建AD小鼠模型,采用Y迷宫、新物体识别、Morris水迷宫评价小鼠学习记忆能力,酶联免疫吸附法(ELISA)检测海马组织乙酰胆碱酯酶(AChE)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-6 (IL-6)的水平,Western Blot检测海马组织核因子κB (NF-κB)和磷酸化核因子κB (p-NF-κB)蛋白表达。结果:通过中心网络拓扑分析筛选出地黄饮子中61个关键有效成分,作用于AD的关键靶点106个。GO富集分析发现关键靶点参与肽结合(淀粉样蛋白)、胆碱能结合、神经递质受体的活动,炎症反应的调节、行为活动调控等。KEGG通路富集分析发现AChE、CHRNA7、RELA、TNF等关键靶点富集于胆碱能突触、NF-κB信号通路。体内实验表明地黄饮子预处理能够改善AD模型小鼠的认知功能障碍;抑制小鼠AChE、IL-6、TNF-α水平;抑制p-NF-κB蛋白表达。结论:地黄饮子可能通过抑制小鼠海马AChE的水平,减轻胆碱能损伤,抑制由NF-κB介导的神经炎症,恢复“胆碱能抗炎途径”,改善小鼠认知功能障碍,起到防治AD的作用。