上海中医药大学免疫学与病原生物学教研室

上海中医药大学免疫学与病原生物学教研室始建于2002年,由原医学微生物学与人体寄生虫学两室合并拓展而来。经过历届教研室主任章育正、杨黎青、王易教授等薪火相传,在基础医学院鼎力支持和建设下,教研室揽聚国内外名校精英,已建立起一支以教研室主任朱诗国研究员、副院长郑月娟教授为学科带头人的教学和科研团队,目前在读硕博研究生达到30余人,教研室成员先后获得上海市三八红旗手、上海高校特聘教授(东方学者)、上海市科技启明星、上海市晨光学者、上海市超级博士后等荣誉称号和专项资助。

几种抗痨方药对结核感染中固有免疫作用靶标的研究

目的:探究传统抗痨方药抗结核感染的可能作用靶标。方法:用沙参麦冬汤、百合固金汤、人参蛤蚧散含药血清作用U937细胞株24小时后,分别采用RT-PCR法和流式细胞术检测巨噬细胞表面CR1、CR3、CD14、CD43、TLR2及TLR4 mRNA和蛋白的表达。再以BCG作用于经含药血清干预24小时后的U937细胞株,检测细胞的吞噬杀菌能力。ELISA法检测各组细胞IL-10、IL-12,生化方法检测iNOS的活力。结果:沙参麦冬汤、百合固金汤、人参蛤蚧散含药血清在mRNA和蛋白水平上对巨噬细胞表面模式识别受体的表达均产生一定影响。并可提高巨噬细胞的吞噬百分率、吞噬指数(P<0.05)。且不同程度影响IL-10、IL-12等的产生。但对iNOS活力均无显著影响。结论:沙参麦冬汤、百合固金汤、人参蛤蚧散含药血清可在体外影响巨噬细胞表面不同类型的模式识别受体的产生,这可能成为抗结核杆菌感染的药理作用的分子基础;但属滋阴方药的沙参麦冬汤、百合固金汤,与属补气方药人参蛤蚧散对巨噬细胞的影响具有明显不同。

NK细胞的免疫监视作用及肿瘤免疫逃逸

自然杀伤(NK)细胞在机体抗肿瘤及抗感染免疫中发挥着重要的免疫监视作用,在杀伤肿瘤细胞的过程中,不需要肿瘤特异性抗原的识别便可以直接发挥杀伤效应,故NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用更直接、更迅速,在肿瘤免疫治疗方面具有显著优势。NK细胞的免疫监视功能主要与其表面不同类型受体的表达有关,如NKG2D、自然杀伤细胞毒性受体(NCR)、CD226等。而肿瘤细胞则可以利用肿瘤微环境中多种因素逃逸NK细胞的免疫监视,如血小板、腺苷酸、细胞因子、吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)等,进而形成肿瘤并发生转移。因此肿瘤微环境中诱导肿瘤逃逸NK细胞免疫监视的这些因素,有可能成为今后提高NK细胞免疫治疗疗效的候选靶点之一。

耻垢分枝杆菌在感染与免疫研究中的应用

耻垢分枝杆菌属革兰阳性腐生菌,具有快速生长,无致病性,与结核分枝杆菌基因高度同源、细胞结构相似等特点,较多应用于分枝杆菌感染及相关免疫学研究,是一种相对理想的实验模型。同时,其在非分枝杆菌感染及其他相关免疫研究中也有拓展性的应用。本文就耻垢分枝杆菌在感染与免疫研究中的应用现状进行综述。

“芩部丹”中三种单体对结核分枝杆菌作用下TLR2表达的影响

目的观察"芩部丹"中3种单体对巨噬细胞TLR2的调节作用,以探寻其抗结核的可能作用机制。方法取黄芩苷、对叶百部碱、丹参多酚酸盐单体作用于感染结核杆菌的U937单核巨噬细胞,分别采用RT-QPCR、FACS方法检测用药前后巨噬细胞表面TLR2的表达差异。结果与模型组相比,黄芩苷、对叶百部碱、丹参多酚酸盐均具有上调TLR2表达的作用。结论 "芩部丹"中3种单体抗结核作用可能通过纠正TLR2的表达而发挥作用。

百合固金汤对结核杆菌感染后巨噬细胞自噬功能的调节作用

目的观察百合固金汤对巨噬细胞内自噬功能的调节作用,以探寻其可能的抗结核分枝杆菌作用机制。方法以百合固金汤含药血清干预感染结核分枝杆菌的RAW264.7巨噬细胞,0、6、12、24、36 h后RT-QPCR法检测干预前后巨噬细胞atg5、atg7、atg8、atg12表达变化;12、24、36 h后Western blot法检测干预前后巨噬细胞内自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达差异;12、24、36 h后QPCR法检测用药前后胞内结核分枝杆菌DNA含量。结果药物干预24 h后,用药组巨噬细胞atg5、atg7、atg8、atg12表达量出现不同程度增加(P<0.05),自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ表达量亦显著增高(P<0.05);药物干预36 h后,在自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ表达量显著增高(P<0.05)的同时检测到胞内结核分枝杆菌DNA含量明显减少(P<0.05)。结论百合固金汤可能通过激活细胞自噬现象发挥抗结核的作用。

氢溴酸槟榔碱对幽门螺杆菌生长和空泡毒素A表达和活性的影响

目的评价氢溴酸槟榔碱对幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)的抑制作用及其对H.pylori空泡毒素A表达水平和活性的影响。方法使用平皿稀释固体法和脑心浸液液体法测定中药活性成分氢溴酸槟榔碱对H.pylori的最低抑菌浓度(MIC),以反映药物对H.pylori的抑制作用。通过中性红摄入法评价药物干预后H.pylori培养上清中空泡毒素A对胃癌细胞BGC-823的毒性作用,并通过RT-PCR方法和Western blot方法检测经药物处理后H.pylori菌体及分泌上清中空泡毒素A mRNA和蛋白的表达水平,以反映药物对H.pylori空泡毒素A活性和表达的影响。结果高浓度氢溴酸槟榔碱对H.pylori具有抑制作用,MIC为:固体法和液体法均为1.25 g·L-1。低浓度氢溴酸槟榔碱可不同程度抑制H.pylori空泡毒素A的活性(P<0.01);抑制H.pylori菌体和分泌上清中空泡毒素A mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.05)的表达。结论氢溴酸槟榔碱在较高浓度(1.25 g·L-1)时具有抑制H.pylori生长作用,而在较低浓度(0.15 g·L-1)时,即可抑制H.pylori空泡毒素A的表达和活性。

黄芩苷对结核分枝杆菌作用下TLR2-MyD88信号通路的影响

目的:观察黄芩苷是否存在对TLR2和MyD88的调节,以探寻其抗结核的可能作用机制。方法:取黄芩苷单体作用于感染结核杆菌的U937单核巨噬细胞,分别采用RT-QPCR、Western blot和FCM方法检测用药前后TLR2和MyD88的表达。结果:与对照组相比,模型组TLR2及MyD88表达均显著降低(P<0.05);而与模型组相比,黄芩苷组TLR2及MyD88 mRNA表达则显著增高(P<0.05),TLR2蛋白表达亦显著增高(P<0.05)。结论:黄芩苷具有上调TLR2和MyD88的作用,从而为黄芩苷抗结核机制的揭示提供了依据。

加味玉屏风散及拆方组分对利什曼原虫感染模型CD4^+CD25^+Treg水平的影响

目的:探讨中药复方加味玉屏风散及拆方组分对感染机体内CD4+CD25+Treg细胞(Treg)潜在的调节作用。方法:选用加味玉屏风散及其拆方单味药组分(黄芪、防风、白术、党参)对利什曼原虫感染模型进行干预。流式细胞仪分析脾细胞内Treg水平;RT-PCR法检测Treg功能相关转录因子Foxp3水平。结果:与正常对照鼠相比较,利什曼原虫感染BALB/c小鼠脾脏内Treg水平和Foxp3 mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),复方及其部分单味药可以下调感染动物脾细胞内Treg和Foxp3表达水平(P<0.05),显著抑制感染部位的肿胀程度(P<0.05),减轻病变。结论:利什曼原虫感染BALB/c小鼠存在Treg水平的增加,中药复方加味玉屏风散和部分单味药组分可以显著抑制感染机体内Treg水平,促进感染清除。

百合固金汤含药血清对巨噬细胞表面模式识别受体的影响

目的观察传统抗痨方剂百合固金汤含药血清对巨噬细胞表面模式识别受体的影响,以探讨传统医药抗结核的可能作用机制。方法按常规方法制备百合固金汤含药兔血清。以含药血清作用U937单核巨噬细胞24 h后,分别采用RT-PCR法和流式细胞仪检测巨噬细胞表面CR1、CR3、CD14、CD43、TLR2及TLR4的表达。同时设空白兔血清为对照。结果 RT-PCR和流式细胞仪结果均显示百合固金汤含药血清可使巨噬细胞表面模式识别受体CR1、CD14、TLR2、TLR4表达显著增高(P<0.05);而CR3仅在蛋白表达水平显示差异(P<0.05);CD43表达则未见显著差异(P>0.05)。结论传统抗痨方剂百合固金汤的抗结核作用可能通过对巨噬细胞表面模式识别受体的调节而发挥作用。

膜型IL-15联合RAE-1ε增强小鼠NK细胞的杀伤活性

目的:探讨视黄酸早期转录因子1ε(retinoic acid early transcript 1ε,RAE-1ε)和膜型IL-15对小鼠NK细胞杀伤功能的影响。方法:前期研究以小鼠原B淋巴细胞株BaF3为基础构建了3株BaF3工程细胞株,即表达膜型IL-15的BaF3/mb15细胞、表达RAE-1ε的BaF3/RAE细胞和同时表达膜型IL-15和RAE-1ε的BaF3/mb15/RAE细胞。将γ射线灭活后的3株BaF3工程细胞株作为刺激细胞,分别刺激小鼠NK细胞。流式细胞术检测刺激后NK细胞表面分子的表达,胞内染色法检测NK细胞穿孔素和颗粒酶B的分泌,流式细胞术检测NK细胞对小鼠淋巴瘤YAC1细胞的杀伤活性。结果:与BaF3/mb15和BaF3/RAE细胞相比,BaF3/mb15/RAE细胞可有效上调NK细胞表面CD25、CD44、FasL和CD107a的表达,但对穿孔素和颗粒酶B的分泌没有明显刺激作用。当效靶比为20:1时,BaF3/mb15、BaF3/RAE和BaF3/mb15/RAE细胞刺激后NK细胞对靶细胞YAC1的杀伤率分别为(39.7±2.9)%、(45.3±2.3)%和(59.0±6.9)%,均高于BaF3组的(28.3±1.5)%(P<0.01),且BaF3/mb15/RAE组高于BaF3/mb15和BaF3/RAE组(P<0.05)。结论:膜型IL-15联合RAE-1ε可促进NK细胞活化并增强NK细胞的杀伤活性。

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因致病岛及Ⅳ型分泌系统的研究进展

致病岛是指细菌染色体上一段具有典型结构特征的基因簇,主要编码与细菌毒力及代谢等功能相关的产物。Ⅳ型分泌系统指革兰阴性菌中由多种蛋白分子构成的、通过菌毛样结构向宿主细胞注入毒力因子的分泌系统。幽门螺杆菌细胞毒素相关基因致病岛及其编码的Ⅳ型分泌系统是幽门螺杆菌关键性致病因子,有可能成为药物作用的新靶标,是近年相关研究的热点。

玫瑰树碱促进NK细胞识别与杀伤非小细胞肺癌细胞的研究

目的探讨玫瑰树碱(ellipticine,EPT)对人NK细胞杀伤非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞的作用及机制。方法MTT法和CCK8法分别测定EPT对A549、H1299细胞和NK细胞增殖的影响。免疫荧光检测EPT对A549、H1299细胞DNA损伤影响。化学发光法测定EPT对NK细胞杀伤NSCLC细胞杀伤活性的影响。流式细胞术检测EPT对NK细胞脱颗粒CD107α表达影响,以及A549、H1299细胞表面MICA/B表达情况。结果EPT明显抑制A549、H1299细胞的增殖且有时间和浓度依赖性(P<0.05),在24、48、72 h的IC50分别是12.06、3.76、1.65μmol·L^-1和12.9、8.56、4.80μmol·L^-1。EPT对NK细胞的24、48 h的IC50是112.71、72.03μmol·L^-1。EPT在1、2μmol·L^-1作用A549和H1299细胞24 h后,诱导DNA损伤,同时上调细胞表面MICA/B的表达(P<0.05),可明显增加NK细胞脱颗粒水平(P<0.05),增强NK细胞杀伤NSCLC细胞作用(P<0.05)。结论EPT可抑制NSCLC细胞增殖,诱导DNA损伤,上调NSCLC细胞表面配体MICA/B表达,同时增加NK细胞脱颗粒水平,促进NK细胞的识别与杀伤作用。

NK细胞受体及其配体与结核分枝杆菌感染

NK细胞是抗肿瘤和病毒感染的重要的固有免疫细胞，也具有重要的抗结核作用。无须预先致敏就可以杀伤被感染的细胞，但NK细胞的有效活化依赖于其激活和抑制信号间的动态平衡，与其激活性和抑制性 NK 细胞受体（ Natural killer receptor ， NKR）及其靶细胞表面相应配体的表达或缺失密切相关［1］。在结核分枝杆菌（ Mycobacterium Tuberculosis，Mtb）感染时，机体的免疫系统会相应发生一系列生理病理改变。 NK 细胞及其受体、配体也会有相应变化。本文就近年来对NK细胞与Mtb感染的相互关系及NK 细胞受体、配体与Mtb感染的相互关系的研究作一简要综述。

结核病易感相关免疫基因研究进展

结核易感性与遗传、环境、年龄、性别、HIV感染、营养缺乏、BCG接种和吸烟等宿主因素有关［1］。其中，遗传因素是影响结核易感性的重要因素［2］，可以影响结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）与宿主免疫系统间的平衡关系，最终导致不同的感染结局。以家族为基础的连锁分析（1inkagean alysis）和病例一对照为基础的关联分析（association analysis）。

加味玉屏风散对利什曼原虫感染模型免疫调节机制的影响

通过利什曼原虫感染模型,探讨中药复方加味玉屏风散对感染机体免疫调节机制的影响。选用加味玉屏风散及其单味主药对利什曼原虫感染模型进行干预。RT-PCR法检测脾细胞内细胞因子IFN-γ和IL-4 mRNA表达水平,反映感染模型内Th1/Th2平衡状态;流式细胞仪分析脾脏内CD4^+CD25^+Treg(Treg)水平。与正常对照鼠相比较,利什曼原虫感染BALB/c小鼠脾脏内存在IL-4表达增强,呈Th2偏离;且其脾细胞内Treg水平显著升高(P<0.05),加味玉屏风散复方或其单味主药可以下调感染动物脾脏内Treg水平(P<0.05),下调脾细胞IL-4表达(P<0.05),抑制感染部位的肿胀程度(P<0.05),减轻病变。利什曼原虫感染动物模型存在免疫偏离,呈Th2优势应答,且存在Treg水平的增加,二个因素共同作用可能成为易感动物感染持续存在原因;加味玉屏风散复方及主药可以显著下调感染机体内Treg水平,直接或间接抑制Th2优势应答的免疫偏离状态,从而实现抗感染的效力。

NK细胞受体：抗结核免疫中的角色

固有免疫是生物体在长期种系发生和进化过程中逐渐形成的，是机体抵御病原体侵入的首道防线，亦是激发适应性免疫的基础。

中药对感染、自身免疫性疾病中Toll样受体表达影响的实验研究进展

近年来研究发现,在感染性疾病与自身免疫病中,Toll样受体的表达水平与疾病的发生、发展、转归及预后有关,因为传统中医药在该类疾病治疗中发挥了重要作用,使传统中药方剂对Toll样受体表达影响的研究尤为引人瞩目。本文就中药对感染与自身免疫性疾病中Toll样受体表达影响的实验研究做一简要综述。

丹参多酚酸盐活血化瘀作用的多元化药理作用

目的以丹参多酚酸盐制剂的临床应用及相应的多元化药理作用研究资料为对象,探讨丹参多酚酸盐制剂"活血化瘀"作用可能涉及的药理作用机制。方法整理与归纳近年有关的国内外文献,对丹参多酚酸盐制剂的多元化药理作用及其可能的作用机制作出概括,并得出相应判断。结果与结论丹参多酚酸盐"活血化瘀"作用潜含着多元化的药理作用机制,对这些机制的研究和梳理有助于形成中药药理的现代药理学基础,并提供临床同类中药制剂的应用指导。

和厚朴酚对幽门螺杆菌生长和空泡毒素A表达及活性的影响

【目的】幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是胃炎和消化性溃疡的病原体,但其具有潜在的正常菌群的特性。本研究通过评价临床常用中药厚朴的活性成分和厚朴酚对H.pylori的抑制作用及对其空泡毒素A表达和活性的影响,以反映其对H.pylori具有的潜在去除毒性的作用。【方法】使用平皿稀释固体法和脑心浸液液体法测定和厚朴酚对H.pylori的最低抑菌浓度,进一步通过中性红摄入法评价经无抑菌效果的低浓度和厚朴酚干预后,H.pylori培养上清中空泡毒素A(Vacuolating cytotoxin A,VacA)的毒性作用;并通过RT-PCR和Western blot方法检测经低浓度和厚朴酚处理后,H.pylori菌体及分泌上清中VacA mRNA和蛋白的表达水平。【结果】发现高浓度(0.75 g/L)和厚朴酚对H.pylori具有抑制作用;而在远低于最低抑菌浓度时,和厚朴酚可有效抑制H.pylori VacA的形成和分泌。【结论】和厚朴酚具有下调H.pylori毒性的潜在作用,这为基于"致病性H.pylori的非致病性转变"这一机理的干预性治疗提供了有希望的研究前景。