不同中药对小鼠关节滑膜组织释放白细胞介素-1的影响的实验研究

运用不同中药对骨关节损伤小鼠滑膜组织释放白细胞介素-1(IL-1)的影响的实验观察表明：(1)实验小鼠滑膜组织的IL-1释放水乎较正常小鼠高，P<0．001，尤以初起2周最高，与中、晚期比较，P<0．05；(2)养血软坚药物和益肾壮骨药物在造模4周后运用，对滑膜组织释放IL-1的抑制率分别为45．9％和48．4％，与正常组比较，P>0．05，与其他两组比较，P<0．01；(3)温补肾阳药物在第2周和第4周，对滑膜细胞释放IL-1有很强的促进作用，其抑制率分别为-22．6%和-67．5％。本实验提示：在骨关节炎的发病过程中，IL-1作为炎症介质的诱导剂，对滑膜炎症的产生和发展起着重要的作用。养血软坚和益肾壮骨药物在炎症的后期有一定的治疗作用，而在骨关节炎的早、中期不宜使用温补肾阳药物。

基于网络药理学探讨克癀胶囊抗肝纤维化的作用机制

目的:通过小鼠实验及网络药理学方法,研究克癀胶囊治疗肝纤维化的潜在作用机制。方法:建立CCl_(4)诱导的6周小鼠肝纤维化模型,灌胃给药低剂量及高剂量克癀胶囊3周,RT-qPCR法检测小鼠肝组织α-SMA及COL1A1、TGF-β1 mRNA表达,肝脏组织切片进行HE染色和天狼星红染色。采用TCMSP等数据库筛选获取克癀胶囊有效成分治疗肝纤维化的靶标,对其进行GO和KEGG富集分析。利用STRING数据库建立蛋白-蛋白互作网络,通过Cytoscape建立“化合物-靶点网络”进行权重分析,获取核心靶标。结果:与模型组比较,克癀胶囊低剂量组和克癀胶囊高剂量组小鼠肝组织α-SMA和COL1A1、TGF-β1 mRNA表达水平均显著下降(P<0.05);与模型组比较,克癀胶囊低剂量组和克癀胶囊高剂量组小鼠肝组织中天狼星红染色胶原沉积明显改善(P<0.01)。数据库筛选后获取克癀胶囊成分与肝纤维化疾病共有靶标90个,JUN、STAT3、TP53为排名前3的Hub基因。GO富集分析提示核心靶点主要调控RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控和细胞因子介导的信号通路、调控细胞外间隙和细胞外区的反应,酶结合、转录因子活性和序列特异性DNA的结合过程。KEGG富集分析提示涉及克癀胶囊可调控TNF信号通路、PI3K-Akt信号通路、IL-17信号通路、HIF-1信号通路、JAK-STAT信号通路。结论:克癀胶囊可改善CCl_(4)诱导的小鼠肝纤维化,网络药理学提示克癀胶囊可能通过TNF信号通路、PI3K-Akt信号通路、HIF-1等信号通路,可能调控JUN、STAT3、TP53等靶基因发挥抗肝纤维化作用。

MMP-2/9活性与TIMP-1/2蛋白表达在大鼠肺纤维化形成中的变化特点

目的：观察大鼠肺纤维化形成过程中基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）-2／9的活性及其活性抑制物——基质金属蛋白酶组织抑制因子（tissue inhibitor of matrix metalloproteinase，TIMP）-1／2蛋白表达的动态变化，探讨肺纤维化形成过程中细胞外基质（extracellular matrix，ECM）降解的调控规律。方法：SD大鼠48只，随机分为模型组（30只）与正常对照组（18只）。模型组大鼠予以1次性气管内注射博来霉素诱导肺纤维化模型，正常对照组大鼠于气管内注入等量生理盐水。每组再各设1d、3d和1、2、3、4周共6个时间观察点，动态观察大鼠肺系数的变化。HE染色观察大鼠肺组织病理学的改变；Masson染色观察大鼠肺组织胶原沉积情况；Jamall氏法测定肺组织羟脯氨酸（hydroxyproline，Hyp）的含量；Western印迹法分析肺组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白的表达变化；明胶酶图法检测肺组织MMP-2与MMP-9的活性。结果：与正常对照组大鼠比较，模型组大鼠染毒后2周其肺组织发生局灶性病变，肺泡壁与间隔增厚，肺泡腔与间质内有大量炎细胞浸润，伴有少量成纤维细胞；肺系数明显增高；肺组织内Hyp含量稍升高；MMP-2／9蛋白的表达与活性增加，以活化型MMP-2增加更为明显；TIMP-1／2蛋白的表达则逐渐增加。模型组大鼠染毒后3～4周时，肺泡结构遭到破坏，部分肺泡腔塌陷消失，由胶原纤维和成纤维细胞占据，肺泡壁与间隔进一步增厚，形成严重的肺纤维化；肺系数较2周时有所下降，肺组织Hyp含量和TIMP-1／2蛋白的表达明显增加，至染毒后4周时最为明显；MMP-2／9活性较2周时有所下降，尤以活化型MMP-2的活性下降较为明显。结论：博来霉素诱导肺纤维化形成过程中，早期肺组织的病理学变化以肺泡炎症为主，肺组织内MMP-2／9活性增高；后期以纤维化为主，肺组织TIMP-1／2表达明显增加，MMP-2／9活性则有所下降。

小儿哮喘花剥苔产生的免疫机制研究

目的:从免疫学角度探讨哮喘患儿花剥苔形成的机制。方法:采用免疫组化方法检测舌苔脱落上皮细胞中角蛋白13及bcl-2蛋白的含量。应用流式细胞术检测外周血CD4+及细胞趋化因子受体3(cellchemokine receptor-3,CCR-3)的表达量。采用放射免疫法检测血清中皮质醇的含量。结果:哮喘花剥苔组患儿外周血CD4+和CCR-3水平明显高于哮喘非花剥苔组及正常组(P<0.05);哮喘花剥苔组、非哮喘花剥苔组血清中皮质醇含量低于其余各组(P<0.05)。哮喘花剥苔、非花剥苔组血清IgE水平明显高于其余各组(P<0.05)。哮喘花剥苔组、非哮喘花剥苔组舌苔上皮脱落细胞中角蛋白13的含量明显低于哮喘非花剥苔组、非哮喘非花剥苔组和正常对照组(P<0.05)。哮喘花剥苔组患儿舌苔上皮脱落细胞中bcl-2蛋白含量与其余各组比较无统计学差异。结论:花剥苔的形成与免疫反应密切相关,血清皮质醇水平降低、CD4+及CCR-3增多,可能促进了花剥苔的形成。同时,舌上皮细胞角化障碍及舌上皮细胞凋亡亦可能促进花剥苔的形成。

柚皮素对人自然杀伤细胞杀伤肝癌细胞的影响及其机制

目的将人外周血单个核细胞体外扩增为自然杀伤(NK)细胞,与肝癌细胞1∶1共培养。观察柚皮素对NK细胞杀伤率的影响并初步研究相关机制。方法淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞,在体外经重组人白细胞介素2诱导培养NK细胞;0、3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L浓度柚皮素作用于人肝癌细胞0、24、48 h后CCK8检测肝癌细胞增殖情况;不同浓度柚皮素作用于人NK细胞24 h后,CCK8检测NK细胞增殖情况;柚皮素作用于NK-肝癌细胞1∶1共培养体系24 h后,CellTiter-LumiTM检测NK细胞杀伤率;实时荧光定量PCR法检测NK细胞中激活型受体NKG2D的基因表达,以及肝癌细胞中NKG2D配体的基因表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果经重组人白细胞介素2诱导培养后,NK细胞可扩增至人外周血单个核细胞的82.33%±0.70%;柚皮素作用24 h后,所有质量浓度组CLC5肝癌细胞的增殖率无明显差异(P值均>0.05),25及50μmol/L质量浓度组柚皮素对NK细胞的增殖有较明显的促进作用(P值均<0.0001);柚皮素作用NK-肝癌细胞1∶1共培养体系24 h后,25、50μmol/L浓度组对NK细胞杀伤率均有明显提高(P值均<0.0001);柚皮素作用于NK-肝癌细胞1∶1共培养体系24 h后,25、50μmol/L浓度组柚皮素对NK细胞中NKG2D的表达均无影响,对肝癌细胞中MICB、ULBP2的表达亦无影响(P值均>0.05),对肝癌细胞中ULBP1、ULBP3等NKG2D配体的表达有明显上调作用(P值均<0.001)。结论柚皮素可能通过上调肝癌细胞中NKG2D配体表达,从而增加NK细胞的杀伤活性。

HBV相关慢加急性肝衰竭的预测模型

慢加急性肝衰竭(ACLF)是一种被重新定义的严重的临床综合征,以慢性肝病基础和急性加重为特征,有着极高的死亡率。乙型肝炎病毒(HBV)相关ACLF(HBV-ACLF)是中国目前主要的ACLF患者组成。由于ACLF和HBV-ACLF是快速进展的,因此需要预测模型对HBV-ACLF的严重程度及预后进行评价,以帮助临床决策。该文就目前已发表的HBV-ACLF预后预测模型进行介绍。

肝脏代谢分区研究进展

肝脏是机体最重要的器官之一,扮演去氧化、储存肝糖原和合成分泌性蛋白的角色。肝脏合成与生物转化过程中依赖酶促反应的高效催化。在进化与适应的过程中,肝脏演化出代谢分区的功能性组织结构,使不同酶促反应呈现出空间特异性分布,使肝脏对空间和资源实现最大化利用,保证肝脏功能的高效运转和内环境稳态。同样,当暴露于各种损伤因素时,肝脏病理改变也呈现出空间特异性分布的特点,在复杂信号调控网络的作用下,维持肝脏损伤与修复的平衡。本文旨在系统综述肝脏组织和代谢分区的相关研究,以期为理解肝脏生理功能的维持机制及临床治疗肝脏疾病寻找新的治疗靶点。

自免方联合熊去氧胆酸治疗肝肾阴虚证原发性胆汁性胆管炎随机对照研究

目的观察自免方联合熊去氧胆酸(UDCA)治疗肝肾阴虚证原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者的临床疗效和安全性。方法73例符合纳入标准的肝肾阴虚证PBC患者,按照随机数字表法分为对照组37例和治疗组36例,对照组口服UDCA治疗,治疗组口服自免方联合UDCA治疗。比较两组治疗前、治疗后3、6个月的中医证候积分、中医证候疗效、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、凝血酶原时间(PT)、AST与血小板(PLT)比值指数(APRI)/基于4项因子的肝纤维化指数(FIB-4)、血常规、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)的变化,并观察不良反应。结果73例患者治疗过程中脱落8例,最终纳入分析65例,对照组32例,治疗组33例。对照组有效率为56.25%(18/32),治疗组有效率为96.97%(32/33),治疗组临床疗效优于对照组(χ2=27.375,P<0.05)。治疗3个月后,两组患者中医证候积分、ALP、GGT较治疗前明显下降(P<0.05),且治疗组优于对照组(P<0.05)。治疗6个月后,两组患者中医证候积分、ALP、GGT、TBA较治疗前明显下降(P<0.05),与对照组同期比较,治疗组ALP、GGT下降更显著(P<0.05)。治疗6个月后,ALT、AST、PT、APRI评分、FIB-4评分均较治疗前明显下降(P<0.05),但两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗期间两组均未见明显不良反应。结论自免方联合UDCA能明显改善肝肾阴虚证PBC患者的中医证候积分、ALP、GGT,疗效优于单用UDCA治疗,且安全性良好。

抗人Ⅳ型胶原单抗研制及其特性

本文用胃蛋白酶提取的人胎盘Ⅳ型胶原免疫Balb/c小鼠,免疫脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后,经有限稀释法克隆获得两株分泌抗人Ⅳ型胶原单抗的杂交瘤细胞株CO_5和CO_6。用小鼠腹水和杂交瘤细胞培养上清纯化制备的两种单抗均属小鼠IgGl,K键,分别针对Ⅳ型胶原分子上的两个不同抗原决定簇。两种单抗特异性强,与人Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅴ型、Ⅵ型、Ⅷ型胶原、Ⅳ型胶原7S区及人白蛋白等相关蛋白无明显交叉反应,且单抗效价高,亲和力强。

MH60.CSF_2细胞株对IL-6依赖性变异的观察

IL-6依赖性MH60.CSF_2细胞株用於测定淋巴细胞培养上清中IL-6生物活性具有灵敏度高、方便易行等优点,但该株细胞在传代培养中易逐渐丧失对IL-6的依赖性。我们将此株细胞亚克隆后,动态观察各代细胞对IL-6依赖性的变化,确定其用於IL-6测定的最好代数、细胞用量和培养时间。现报告如下。1 材料和方法 材料:MH60.CSF_2细胞株由山东省医科院肿瘤生物治疗研究中心田志刚教授惠赠。小鼠rIL-6标准品购自德国Bochringer公司。

基于网络药理学原理探讨健脾补肾方治疗肌萎缩侧索硬化症的机制

目的:本研究通过网络药理学的研究方法,从分子机制和物质基础的角度探讨健脾补肾方的作用机制。方法:利用疾病数据库与中药数据库获取健脾补肾方治疗肌萎缩侧索硬化症(ALS)的潜在靶点,利用DAVID数据库进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路和基因本体(GO)富集分析,利用String数据库建立蛋白-蛋白互相作用(PPI)网络,利用Cytoscape软件建立和分析靶点网络。结果:KEGG富集结果提示健脾补肾方治疗ALS的机制可能涉及对细胞存活(磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路,PI3K/Akt通路)、炎症(丝裂原活化蛋白激酶通路,MAPKs通路)、钙离子信号通路的调控。GO分析结果提示健脾补肾方主要调控细胞凋亡、蛋白磷酸化、蛋白结合等过程。PPI网络提示其主要调控的蛋白家族为谷氨酸离子型受体家族、MAPKs、半胱氨酸蛋白酶家族。靶点网络分析提示其调控的主要靶点为细胞凋亡相关基因,包括半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)、胱抑素C(CYCS)、肿瘤蛋白53(TP53)。健脾补肾方的主要有效成分可能是槲皮素、木犀草素、山柰酚等。结论:健脾补肾方可能通过多途径抑制神经元死亡和神经炎症治疗ALS。