补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞周期基因表达的调控作用

目的:比较补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞周期基因表达的调控作用。方法:采用上述4种不同的含药血清对衰老的人胚肺二倍体成纤维细胞2BS细胞株进行处理,通过细胞寿命实验、流式细胞仪、RT-PCR、Western blot方法研究不同中药对衰老细胞周期及其相关基因(P16^(INK4)、Cyclin D1及PCNA)的mRNA转录和蛋白表达的影响。结果:补肾、益气中药对衰老细胞周期有一定的促进作用,并可下调衰老细胞增殖抑制基因P16和周期蛋白Cyclin D1的mRNA/蛋白表达;上调细胞周期促进增殖基因PCNAmRNA/蛋白的表达。而健脾、活血中药对细胞周期及其相关基因和蛋白表达的作用不明显。结论:补肾、益气方药对细胞周期有促进作用,其中的作用可能是通过促进P16途径的基因表达来实现。

珠子参体外诱导人肝癌细胞凋亡效应及机制研究

目的观察珠子参体外诱导人肝癌细胞凋亡效应并初探其分子机制。方法体外细胞培养采用人肝癌细胞株SMMC-7721,分为对照(BL)组、珠子参(PJ)组、二甲基亚砜(DMSO)组及5-FU组,采用电镜观察作用后肝癌细胞超微结构改变;流式细胞仪检测肝癌细胞周期和凋亡率;RT-PCR法检测癌基因c-myc、c-fos和抑癌基因p53、p21表达的变化。结果与对照组比较,电镜下珠子参组SMMC-7721细胞染色质浓缩,分解成大小不一有膜包绕团块,内含有新月形DNA物质及细胞器,形成凋亡小体;周期分析可见G0/G1期细胞阻滞,阻止了细胞向S期的转换,并引起细胞凋亡,凋亡率达38.34%;RT-PCR半定量分析珠子参能降低癌基因c-myc表达(P<0.05),增高抑癌基因p53和p21表达(P<0.05)。结论珠子参能诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,部分作用机制可能与阻滞细胞停留在G0/G1,降低癌基因c-myc和c-fos表达,增高抑癌基因p53和p21表达有关。

左归丸、右归丸对老年大鼠海马、杏仁核氨基酸类神经递质含量变化的影响

目的观察左归丸、右归丸对老年大鼠海马、杏仁核氨基酸类神经递质Asp、Glu、Gly、GABA含量变化的影响,探讨老年机体神经元的神经递质的变化,以及左归丸、右归丸延缓老年大鼠神经内分泌调控退化的作用机制。方法以自然衰老大鼠为动物模型,随机分为青年对照组、老年对照组、老年左归丸组、老年右归丸组。采用HPLC荧光法,检测各组大鼠海马、杏仁核Asp、Glu、Gly、GABA含量变化。结果与青年对照组相比,老年对照组大鼠海马、杏仁核Asp、Glu、Gly、GABA含量有不同程度升高,而与老年对照组相比,两用药组含量有不同程度降低。结论左归丸、右归丸通过纠正老年大鼠海马和杏仁核脑区氨基酸类神经递质的紊乱状态,使兴奋性和抑制性氨基酸这两大类递质最终趋向平衡,从而有助于改善大脑边缘系统,延缓机体衰老。

左归丸、右归丸对老年大鼠海马、杏仁核氨基酸类和单胺类神经递质含量变化的影响

目的观察左归丸、右归丸对老年大鼠海马、杏仁核氨基酸类神经递质Asp、G lu、G ly、GABA和单胺类神经递质5-HT、NE含量变化的影响,探讨老年机体神经元的神经递质的变化,以及左归丸、右归丸延缓老年大鼠神经内分泌调控退化的作用机制。方法以自然衰老大鼠为动物模型,分设4组:青年对照组、老年对照组、老年左归丸组、老年右归丸组。采用HPLC-荧光法,检测各组大鼠海马、杏仁核Asp、G lu、G ly、GABA含量变化;采用ELISA法,检测5-HT、NE含量变化。结果与青年对照组相比,老年对照组大鼠海马、杏仁核Asp、G lu、G ly、GABA含量有不同程度升高,而与老年对照组相比,两用药组含量有不同程度降低。同时,老年对照组大鼠海马NE含量减少,左归丸组能提高老年大鼠海马NE含量。而各组大鼠5-HT含量无明显差异。结论左归丸、右归丸通过不同程度地纠正老年大鼠海马和杏仁核脑区氨基酸类和单胺类神经递质的紊乱状态,使兴奋性和抑制性神经递质趋向平衡,从而有助于改善大脑边缘系统,延缓机体衰老。

右归丸对自然衰老大鼠海马5-HT、NE含量与HPA轴活性作用的实验研究

目的:探索自然衰老大鼠海马单胺类神经递质-五羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)含量的变化与下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴活性的相关性。方法:以自然衰老SD雄性大鼠(24月龄)为肾虚衰老模型,设老年对照组、右归丸组和青年对照组(5月龄)共3组。老年对照组大鼠常规喂养至24月龄,右归丸组大鼠自20月龄始,按相当于右归丸生药7.5g.kg-1(60kg成人临床用量的15倍)自由饮用稀释药液,每周停药2d,连续4个月;采用高效液相电化学法(HPLC-ED)检测大鼠海马组织5-HT及NE含量,放免法检测血清皮质酮(CORT)。结果:与青年对照组比较,老年对照组大鼠海马组织5-HT含量明显升高,NE含量明显降低,血清CORT含量显著增高(P<0.05);与老年对照组比较,右归丸组大鼠海马组织5-HT含量明显下降(P<0.05),NE含量明显升高(P<0.05),血清CORT含量显著降低(P<0.05)。结论:大鼠海马组织5-HT、NE含量与HPA轴活性有一定关系,右归丸可能通过降低海马组织5-HT、提高NE含量,进而改善老年肾虚大鼠HPA轴功能。

补肾方药对老年大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质所属组织结构形态变化的影响

目的:观察左归丸、右归丸对老年大鼠HPA轴所属组织形态结构变化的影响。方法:以自然衰老大鼠为肾虚证动物模型,HE染色,光镜观察HPA轴所属组织结构的增龄性变化,以及补肾方药(左、右归丸)的改善作用。结果:老年大鼠垂体、下丘脑、肾上腺皮质组织形态结构呈现明显的老年性退化,左归丸、右归丸能不同程度改善这些组织结构。结论:左归丸、右归丸能从组织结构形态方面延缓下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴的老年性变化。

固真方对老年大鼠下丘脑-垂体-甲状腺-胸腺轴作用的研究

老年大鼠下丘脑-垂体-甲状腺-胸腺轴明显老化,而固真方能不同程度地改善该轴的各项指标,提示团真方能多层次、多环节改善老年机体胸腺神经内分泌网的功能,以延缓机体衰老,这充分体现了中医药的整体调节特点。

白细胞介素-10、脑源性神经营养因子水平与急性脑梗死神经功能受损和预后的关系

目的检测急性脑梗死(ACI)患者不同时期体内白细胞介素(IL)-10、脑源性神经营养因子(BDNF)水平变化,观察IL-10、BDNF与急性脑梗死患者神经功能受损状况和预后相关性。方法抽血化验对照组和ACI组发病第1、3、7、14、21、30天各时间段IL-10、BDNF水平变化并比较其相关性;50例ACI患者根据愈后差异分成3组,比较各组IL-10、BDNF、格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、急性生理学及慢性健康状况评价(APACHEⅡ评分)、美国国立卫生研究所脑卒中量表(NHISS)评分、洼田饮水试验评分的差异。结果与对照组比较,ACI组第1、3、7、14、21、30天IL-10和BDNF均明显升高(P<0.05),在发病第3天IL-10达到高峰,发病第14天BDNF达到高峰,以后逐渐下降;ACI患者发病期间IL-10与BDNF无明显相关性(r=-0.067,P=0.899)。ACI患者发病第1天,愈后差者IL-10水平要高于愈后好和一般患者(P<0.05),而不同愈后组患者BDNF水平无显著差异(P>0.05)。结论 ACI第1天IL-10、GCS评分、APACHEⅡ评分、NHISS评分、洼田饮水试验评分值可预测患者预后。

左归丸、右归丸对老年大鼠海马糖皮质激素受体mRNA表达的影响

目的 :观察左归丸、右归丸对老年大鼠海马糖皮质激素受体 (GR)mRNA表达的影响 ,探讨海马对下丘脑 垂体 肾上腺 (HPA)轴的调节作用 ,以及左归丸、右归丸延缓老年大鼠神经内分泌调控退化的作用机制。方法 :以自然衰老大鼠为动物模型 ,采用原位杂交法 ,观察药物对大鼠海马各分区 (DG、CA1、CA2、CA3 )GRmRNA表达变化。结果 :老年大鼠海马各分区GRmRNA表达均明显减弱 ,而左归丸、右归丸能不同程度地提高老年大鼠海马DG、CA1和CA3分区低下的GRmRNA的表达。结论 :左归丸、右归丸通过提高GRmRNA表达 ,进而改善海马对HPA轴的抑制性调控作用 ,以延缓机体衰老。

三种补肾方对老年大鼠下丘神经递质的影响

目的 :观察三种补肾方对 2 4个月龄老年大鼠下丘氨基酸类神经递质的影响。方法 :采用反相高效液相色谱 (HPLC)荧光法、受体放射分析法、RT PCR法测定大鼠下丘的氨基酸递质含量、受体特异性结合量及受体亚单位的mRNA表达。结果 :2 4个月龄大鼠下丘存在兴奋 抑制失衡 ,表现为下丘γ 氨基丁酸 (GABA)能抑制作用减弱 ,可能与耳鸣发病率随年龄增长而增加有关。补肾息鸣经验方使 2 4个月龄大鼠下丘氨基酸类神经递质介导的抑制作用上调和兴奋作用下调 ;左归丸及右归丸使 2 4个月龄大鼠下丘兴奋性与抑制性氨基酸类神经递质 (Asp、Tau、GABA)含量均有明显上升。结论

固真方对老龄大鼠免疫功能的调节作用

目的从基因转录水平与探讨固真方的免疫调节作用。方法采用ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ和ＰＴ－ＰＣＲ技术。结果老龄大鼠脾脏细胞ＩＬ－２ｍＲＮＡ含量低于青龄鼠，ＩＬ－６ｍＲＮＡ含量高于青龄鼠，老龄大鼠体内存在着一定程度的免疫功能紊乱情况；固真方能明显提高老龄大鼠脾脏细胞ＩＬ－２ｍＲＮＡ含量，降低ＩＬ－６ｍＲＮＡ含量。结论固真方能纠正老年机体免疫功能紊乱，增强机体的抗病能力。

老年大鼠线粒体能量代谢及其调控的研究

目的 探讨衰老与线粒体能量代谢之间的关系。方法 采用氧电极法、荧光法、HPL C法等测定青老年大鼠肝线粒体呼吸功能、线粒体内游离钙、MDA浓度、线粒体氧化酶活性和肝 Na+ - K+ - ATP酶活性以及血清 FT3、FT4、T、下丘脑 NE等含量变化。结果 发现老年鼠肝线粒体呼吸功能较差 ,ATP生成效率下降 ,复合物 IV活性下降 ,自由基生成增加、能量消耗亦降低等 ,呈现衰老表现 ,并伴有神经内分泌功能衰退。结论 老年鼠线粒体能量代谢衰退与氧自由基损伤。

固真方对老年大鼠海马和下丘脑—垂体—肾上腺—胸腺轴作用的研究

本研究观察到由首乌、肉巫蓉等组成的补肾益精方药——固真方能明显提高老年大鼠海马细胞降低的糖皮质激素受体(GCR)数,提高下丘脑降低的NE、DA和5—HT含量,降低老年大鼠异常增高的血浆皮质酮,降低胸腺细胞增高的GCR核转位率,增强胸腺依赖性免疫功能。提示固真方能通过神经内分泌免疫网、多层次、多环节延缓老年大鼠海马和下丘脑—垂体—肾上腺—胸腺轴的老化作用,从而改善胸腺依赖性免疫功能。

左归丸对大鼠胸腺细胞凋亡及Bcl-2,Bax表达的影响

目的观察左归丸干预皮质酮致大鼠胸腺细胞凋亡及对Bcl-2、Bax表达的影响。方法 1×10-5mol/L皮质酮处理乳鼠胸腺细胞。实验分为正常对照组,模型组,左归组。Annexin V-PI双染色法结合FCM检测胸腺细胞凋亡情况;Real time PCR和Western印迹法检测Bcl-2、Bax的表达变化。结果 胸腺细胞经皮质酮处理后,胸腺细胞凋亡率显著升高(P<0.01);Bcl-2 mRNA表达显著降低;Bax表达显著升高(P<0.01),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.01)。与模型组比较,左归组胸腺细胞凋亡率降低(P<0.01);Bax mRNA表达降低,Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05)。结论左归丸鼠血清能通过调节bcl-2/bax比率的异常变化,抑制胸腺细胞过度凋亡。

固真方对老年大鼠胸腺细胞糖皮质激素受体作用的研究

本研究观察了固真方（含首乌、肉苁蓉、覆盆子等中药）对老年大鼠胸腺细胞糖皮质激素受体（ＧＣＲ）位点数和ＧＣＲ核转位率以及血清胸腺因子功能等的影响。结果表明：老年大鼠胸腺细胞ＧＣＲ位点数，胞浆蛋白、核ＲＮＡ和ＤＮＡ含量、胸腺重／体重比值以及血清胸腺因子功能均显著低于青年对照鼠，ＧＣＲ核转位率则明显高于青年对照鼠，而固真方能明显改善胸腺的上述老年性变化，提示固真方可能是通过抑制老年大鼠胸腺细胞ＧＣＲ由胞浆到核的转位活化能力，从而减弱糖皮质激素对胸腺的抑制作用，提高老年机体胸腺依赖性免疫功能。

益心口服液预处理对急性心肌缺血大鼠CEC、血浆ET、CGRP及心肌病理形态学的影响

目的：研究益心口服液预处理对急性心肌缺血大鼠心血管的保护作用。方法：设假手术组、模型对照组、维拉帕米组、益心口服液组，建立急性心肌缺血模型。造模后２ｈ 时采血测血浆内皮素（ Ｅ Ｔ） 、降钙素基因相关肽（ Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ） 、循环内皮细胞（ Ｃ Ｅ Ｃ） 计数，并进行心肌病理形态学观察。结果：益心口服液和维拉帕米均可降低急性心肌缺血大鼠血浆 Ｅ Ｔ（ Ｐ＜ ００５） 和 Ｃ Ｅ Ｃ（ Ｐ＜ ００１） 水平，减轻心肌病理形态学改变。维拉帕米组血浆 Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ低于模型对照组（ Ｐ＜ ００５） 。益心口服液组和维拉帕米组间上述三指标无显著性差异。结论：益心口服液预处理可减轻心肌及血管内皮细胞损伤，调节急性心肌缺血时所发生的 Ｅ Ｔ、 Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ分泌失衡。

调心方对痴呆大鼠模型N受体和神经肽的作用研究

本研究采用单侧电解损毁 SD 大鼠基底核法造成痴呆大鼠模型,观察调心方对该模型 N 受体,乙酰胆碱酯酶(AchE)神经肽生长抑素(ss)和β-内啡肽(β-EP)的调节作用。结果表明该方对模型大鼠大脑皮层和下丘脑降低的 N 受体 Rt 值有上调作用,并能升高海马降低的 AchE 活性;能增加垂体和血浆中减少的神经肽 ss 和β-EP 水平。提示调心方能多环节改善胆碱能系统功能,调节脑内 ss、β-EP 水平,从而改善老年性痴呆患者智力、精神和行为等症状。

补肾药延缓老年大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的功能退化

用放射免疫分析和高效液相测定不同组织和血液的激素和神经递质含量，以观察补肾益精方药──固真方对老年大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴作用的影响。结果表明：（1）与青年对照组比较，老年大鼠下丘脑T_3R、TRH明显降低，垂体TSH呈低下趋势；（2）老年大鼠血清T_3、T_4含量明显下降，而rT_3则显著增高；血清TRH和TSH呈代偿性增高；而血浆亮氨酸脑啡肽（L-EK）含量则明显降低；（3）老年大鼠大脑皮层去甲肾上腺素（NE）含量明显下降，而下丘脑L-EK则显著增加。固真方能不同程度地纠正上述各项指标的老年性变化，改善老年大鼠下丘脑-垂体-甲状腺（HPT）轴的功能低下状态，以延缓机体衰老。

老年期肾阴阳虚损大鼠的线粒体能量代谢及其调控机制的研究

目的 :观察老年期肾阴阳虚损大鼠的线粒体能量代谢变化及其调控机制。方法 :将 2 4月龄大鼠按掌温高低区分为老年“肾阴虚”(掌温高 )、老年对照 (常温 )和老年“肾阳虚”(掌温低 )三组 ,采用氧电极法和放免法等技术观察各组老年鼠肝线粒体呼吸功能、氧化酶活性、游离钙、MDA浓度、肝Na+-K+-ATP酶活性和血清FT3、FT4 、T、下丘脑NE含量以及心率等变化。结果 :老年“肾阳虚”鼠RCR、P O、OPR、细胞色素C氧化酶、Na+-K+-ATP酶活性、线粒体游离钙和血清T、FT3、FT4 及下丘脑NE含量均低于“肾阴虚”鼠 ,而“肾阳虚”组MDA含量却明显升高。结论 :老年“肾阳虚”鼠线粒体能量代谢低下 ,氧化损伤加剧 。

“寒体”、“热体”大鼠肝线粒体能量代谢的研究

为探讨“寒体”、“热体”大鼠肝线粒体能量代谢的机制 ,通过测定 3月龄SD雄性青年大鼠掌温 ,将大鼠分为“热体”、“寒体”和对照组 3组 ,采用氧电极法、荧光法、放免法等测定心率、肝线粒体呼吸功能、氧化酶活性、游离钙及MDA浓度和肝Na+ -K+ -ATP酶活性。结果 :“热体”有较高的RCR、P/O、OPR和琥珀酸氧化酶、Na+ -K+ -ATP酶活性 ,“热体”鼠主要是通过加快Ⅲ态耗氧 ,降低Ⅳ态耗氧而提高RCR。“热体”线粒体内游离钙较高 ,与“热体”线粒体功能微观调控有关 ,但热体鼠有较高的MDA水平。提示“热体”能量生成与消耗较“寒体”鼠旺盛 ,“热体”