大承气汤对实验性肺水肿家兔肺病理改变影响的研究

目的 :探讨大承气汤改善阳明腑实喘满证中肺通气功能和肺组织病变的机制。方法 :将实验家兔随机分为对照组、肺水肿模型组和大承气汤治疗组。从兔耳缘静脉注入油酸建立家兔实验性肺水肿模型。大承气汤由胃管灌入 ,观察动物一般情况 ,分析制模后 7小时和 3日肺形态学改变。结果 :油酸可以致家兔实验性肺水肿 ,以肺水肿、肺出血、毛细血管微血栓和肺泡内透明膜形成为主要标志。大承气汤具有改善肺水肿、促进肺泡上皮特别是 型上皮细胞增生、促进损伤修复的作用。结论 :大承气汤的治疗作用可能与其促进肺泡上皮增生特别是 型上皮细胞增生及修复、改善肺泡通气 /血流比等多种作用有关。

大承气汤改善家兔实验性肺水肿及多脏器损害的病理学研究

目的:研究大承气汤改善阳明腑实喘满证中肺通气功能和肺组织病变的机制。方法:将家兔随机分为对照组(A)、治疗组(B)和大承气汤组(C)。从兔耳缘静脉注入油酸建立家兔实验性肺水肿的动物模型。大承气汤以胃管插入进行治疗,观察动物一般情况、血气分析及形态学改变等指标。结果:油酸可以致家兔实验性肺水肿,以肺水肿、肺出血、毛细血管微血栓和肺泡内透明膜形成为主要标志,同时伴多脏器损伤。大承气汤具有改善肺水肿、促进肺泡上皮增生特别是Ⅱ型上皮增生、保护多脏器功能,促进损伤修复的作用。结论:大承气汤的治疗作用可能与其促进水肿液的吸收、促进肺泡上皮增生特别是Ⅱ型上皮增生与修复、改善肺泡/通气血流比例、保护多脏器以及改善内环境等多种作用有关。

线粒体障碍在糖尿病性心肌病中的作用及中医药研究进展

随着生活水平的提高和生活方式的改变,糖尿病的发病率及死亡率逐年上升。糖尿病发病10年后,约30%-40%的患者至少会发生一种并发症,如糖尿病视网膜病变、肾脏病变或心血管病变等,这些慢性并发症大大影响患者生活质量和寿命。糖尿病性心肌病（diabetic cardiomyopathy,DCM）是指糖尿病患者出现左心室肥厚和舒张功能障碍,进而发展为收缩功能不全,且这种改变不与患者其他潜在的心血管疾病相关。线粒体是细胞内重要的能量代谢场所,它直接参与细胞生长、增殖、胞内信号转导和细胞凋亡等过程。近年来研究发现,线粒体障碍与DCM多个发病环节密切相关,其作用涉及糖脂代谢紊乱、氧化应激损伤、钙调控障碍、线粒体脱偶联、质量控制失衡以及MicroRNAs对线粒体的调节等多个方面。现代生物学研究进展同样启发中医药工作者以线粒体为靶向探寻有效治疗措施,越来越多的单味中药或其提取物（如人参、黄芪、葛根、黄连、姜黄、白藜芦醇等）以及复方制剂（如止消通脉宁、糖心乐、通心络等）被证实可以通过调节线粒体功能,改善糖尿病性心肌损伤。基于以上背景,该文将就线粒体障碍在DCM发病中的作用以及中医药在该领域的干预研究进展进行综述,以期为DCM的预防和治疗提供新的思路。

益母草水苏碱对肥大心肌细胞活性氧信号的影响

目的:观察益母草水苏碱对心肌细胞肥大的作用,探讨其对活性氧(ROS)及其下游NF-κB信号的影响。方法:原代培养乳鼠的心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ建立细胞肥大模型,观察10-7～10-4mol/L浓度的益母草水苏碱对细胞肥大的影响(测定细胞体表面积及Protein/DNA比值),同时利用流式细胞仪检测ROS阳性细胞比例,West-ern Blot法测定细胞浆内p-IκBα(ser32)及核内NF-κB(p65)蛋白表达。结果:一定浓度的益母草水苏碱可以降低肥大心肌细胞的体表面积、Protein/DNA比值以及ROS阳性细胞比例(P<0.05);益母草水苏碱干预降低了肥大心肌细胞浆内p-IκBα(ser32)及核内NF-κB(p65)蛋白的表达水平(P<0.05)。结论:对ROS及其下游NF-κB信号的抑制可能涉及益母草水苏碱对抗心肌细胞肥大的作用机制。

二氮嗪对长时程低温保存大鼠心脏Fas／FasL蛋白表达的影响

本文旨在研究线粒体ATP敏感性钾(mitochondrial ATP-sensitive potassium channel, mitoKATP)通道开放剂二氮嗪(diazoxide,DE)对离体长时程低温保存的大鼠心脏促凋亡蛋白 Fas 和 FasL 表达的影响。利用 Langendorff 离体大鼠心脏灌注法,观察心脏在4 oC 含或不含(对照组) DE 的Celsior 保存液保存8 h 后,复灌期心脏作功量(rate-pressure product, RPP)变化情况,采用原位末端标记(TdT-mediated dUTP nick end labeling, TUNEL)染色法检测心肌细胞凋亡和免疫组织化学方法检测Fas 和FasL蛋白表达情况。结果显示,在Celsior 保存液中加入DE (30 μmol/L),复灌期RPP 的恢复率在多个复灌时间点上优于对照组;同时可降低长时程低温保存心脏心肌细胞凋亡指数,减少 Fas 和FasL 蛋白的表达。DE 的上述作用可被 mitoKATP 通道特异性阻断剂5- 羟基葵酸盐(5-hydroxydecanoate, 5-HD)所取消。以上结果提示,DE 可能通过激活 mitoKATP 通道来减少Fas 和FasL 蛋白表达,从而减轻大鼠心肌缺血 / 再灌注损伤后的心肌细胞凋亡。

补阳还五汤对腹主动脉缩窄致大鼠心肌肥厚肌浆网钙摄取功能的影响

目的观察补阳还五汤对腹主动脉缩窄致大鼠心肌肥厚的影响以阐明其对心肌肌浆网钙泵(sarcoplasmic reticulum calcium,SERCA2a)摄取的分子调控机制。方法采用腹主动脉缩窄法制作压力超负荷大鼠心肌肥厚模型。造模4周后,分为假手术组(S组),模型组(M组),依那普利组(E组),补阳还五汤组(BYHWD组),给药12周后观察各组大鼠的左室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)、左室舒张末压(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)、左室内压最大上升速度(+dp/dtmax)、左室内压最大下降速度(-dp/dtmax)、心输出量(cardiac output,CO)、心脏及左心质量指数变化(heart mass index,HMI;left ventricular mass index,LVMI),并且采用ELISA法检测血清中心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)的含量,以及观察各组肌浆网中SERCA2a活性以及SERCA2a、受磷蛋白(phospholamban,PLN)及磷酸化的表达情况。结果与S组比较,M组LVSP及LV-EDP显著升高(P<0.05),-dp/dtmax及CO下降明显(P<0.05),心肌组织明显肥厚,血清中ANP、BNP含量增高(P<0.05),SERCA2a活性及表达量下降(P<0.05),SERCA2a/PLN比值及PLN磷酸化程度降低(P<0.05)。与M组比较,BYHWD组可明显降低LVEDP,提高-dp/dtmax及CO(P<0.05);可显著减轻心肌肥厚,降低血清ANP及BNP含量(P<0.05),增加SERCA2a活性(P<0.05),提高SERCA2a、Ser16及Thr17蛋白表达相对含量(P<0.05);具有显著提高SERCA2a/PLN比值和PLN磷酸化程度的作用(P<0.05)。结论补阳还五汤能够改善心衰大鼠血流动力学,提高心输出量,减轻心肌肥厚及提高心肌SER-CA2a摄取功能。

益心口服液药物预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 :研究益心口服液药物预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :设正常、假手术、缺血再灌注、经典缺血预处理及益心口服液组 ,观察各组大鼠的血流动力学以及心肌细胞内钙离子浓度变化。结果 :经典预处理组、益心口服液组再灌注 60min后LVSP、±dp/dt均显著高于缺血再灌组 (P <0 .0 5) ;预处理组再灌注 60min后LVSP、±dp/dt均显著高于益心口服液组 (P <0 .0 5)。经典预处理组、益心口服液组钙离子浓度低于缺血再灌注组 (P <0 .0 5) ,益心口服液组钙离子浓度高于经典预处理组 (P <0 .0 5)。结论 :益心口服液预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有一定保护作用 ,部分机制可能是减轻心肌细胞内钙离子超载所带来的损害。

益母草生物碱和黄酮成分抗大鼠心肌缺血药效学研究

目的:探讨益母草生物碱和黄酮成分抗大鼠心肌缺血的药效学作用。方法:将实验大鼠随机分为正常组、模型组、益母草生物碱组、黄酮组、丹参组,及生物碱加黄酮大、中、小剂量组。采用大剂量异丙肾上腺素(ISO)皮下注射,造成大鼠急性心肌缺血损伤模型,用药后检测各组大鼠Ⅱ导联心电图J点变化情况、心肌组织形态学变化、血流动力学变化及酶谱变化。结果:与生物碱组、黄酮组及小剂量组相比,益母草生物碱加黄酮大、大中剂量组J点未发生明显偏移(P<0.05),左室内压峰值(LVSP)、左室内压最大变化速率(±dp/dtmax)向正常水平恢复(P<0.05),抑制损伤大鼠血清中肌酸磷酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶活性(LDH)活性及降低缺血心肌组织中丙二醛(MDA)的含量,提高大鼠心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性(P<0.05),组织切片进一步说明生物碱和黄酮成分能有效保护心肌组织(P<0.05)。结论:益母草中的生物碱、黄酮成分能有效抑制异丙肾上腺素ISO所致心肌组织缺血损伤。

大承气汤对实验性肺水肿伴多脏器损害家兔的保护作用

目的 :探讨大承气汤对实验性肺水肿伴多脏器损害的治疗作用 ,为其临床应用提供科学依据。方法 :沿兔耳缘静脉一次性注射油酸 ,复制实验性肺水肿伴多脏器损害动物模型。用大承气汤灌胃法观察该方对模型动物的治疗作用。结果 :油酸在引起急性肺水肿的同时还可引起多脏器的损害。大承气汤在改善家兔实验性肺水肿的同时可明显减轻多脏器损害。结论 :大承气汤对实验性肺水肿伴多脏器损害家兔具有保护作用 ,可稳定内环境 。

内毒素“二次打击”顽固性低氧血症大鼠ARDS模型建立与评价

目的:研究经内毒素"一次打击"和"二次打击"后致急性肺损伤(ALI)大鼠,建立稳定和可靠的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)动物模型,并探讨其意义和理论依据。方法:大肠杆菌脂多糖(LPS)较大剂量(10mg/kg)静脉注射或气管滴入致伤大鼠,复制"一次打击"ARDS模型;LPS小剂量(1mg/kg)腹腔注射致伤大鼠后,再予中等剂量LPS(5mg/kg)气管滴入,建立"二次打击"ARDS模型。连续3d动脉血气分析,结合肺湿重/干重比值(W/D)及肺组织病理观察,评价3种ALI/ARDS模型异同。测定血浆与支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、IL-1、IL-10水平,探讨LPS二次打击法可能致病机制。结果:(1)单次LPS打击(无论是静脉注射或气管滴入)仅引发大鼠ALI和一过性低氧血症,LPS二次打击法可以引发大鼠更为持久的低氧血症和特异性肺损伤,是较为理想的ARDS的动物模型。(2)LPS二次打击法引发的ARDS发病机制与全身失控性炎症反应与肺的特异性损伤有关。结论:LPS二次打击法可建立更为稳定可靠的符合诊断指标的大鼠ARDS模型,并能更好地反映肺损伤的病理变化。

抗纤灵、丹参、大黄等药物血清对系膜细胞分泌FN和Ⅳ型胶原的影响

目的:探讨抗纤灵及其主要成分丹参、大黄等对大鼠肾小球系膜细胞分泌FN和Ⅳ型胶原的影响. 方法:采用ElisA法观察中药抗纤灵方、丹参、大黄等药物血清对大鼠肾小球系膜细胞分泌FN和Ⅳ型胶原的影响.

益母草水提物对异丙肾上腺素致大鼠心肌重构的影响

目的:从心肌组织胶原表达的角度观察益母草水提物对实验性大鼠心肌重构的影响。方法:SD大鼠皮下注射异丙肾上腺素建立心肌重构模型,随机分为正常对照组、模型组、依那普利组及益母草水提物低、高剂量组,药物干预15 w。检测大鼠心脏血流动力学指标、心输出量、心脏质量系数、左室质量系数、心肌羟脯氨酸含量、心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原含量。结果:与模型组比较,益母草水提物高剂量能改善模型大鼠LVSP、+dp/dtmax和CO(P<0.05),益母草低剂量能改善-dp/dtmax、心脏质量系数和左室质量系数、心肌组织羟脯氨酸含量及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量、Ⅰ/Ⅲ型胶原比(P<0.05)。结论:高剂量益母草水提物能改善ISO致大鼠心肌重构模型心脏收缩功能;低剂量益母草水提物能改善ISO致大鼠心肌重构模型舒张功能,下调胶原表达,改善心肌胶原构成比,减轻心肌重构程度。

金匮肾气丸对异丙肾上腺素致大鼠心室重构不同阶段的影响

目的观察金匮肾气丸对异丙肾上腺素致大鼠心室重构不同阶段的影响。方法异丙肾上腺素连续3 d以20、10、5 mg/kg递减皮下注射,3 mg/kg维持7 d制备大鼠心室重构模型,造模成功后用依那普利和金匮肾气丸分别干预15周,并分别于干预5、10、15周时从心脏血流动力学、心输出量、心脏质量指数等角度评价其疗效。结果 5周时,与正常组比较,模型组左室收缩峰压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大收缩率(+dp/dtmax)、左室内压最大舒张率(-dp/dtmax)差异均无统计学意义(P>0.05),但降低心输出量(CO)和增加心脏指数方面差异有统计学意义(P<0.05);10、15周时,模型组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax均较正常组显著降低(P<0.05);药物干预10周后与模型组比较,金匮肾气丸能有效提高LVSP、+dp/dtmax和CO(P<0.05),并降低心脏指数(P<0.05)。药物干预15周后结果与10周相似,但是金匮肾气丸处理15周能显著降低LVEDP(P<0.05)。结论金匮肾气丸对异丙肾上腺素致大鼠心室重构早期(5周)、中期(10周)和晚期(15周)均有一定的改善作用,在中晚期时更为明显。

益气活血方对压力超负荷致大鼠心肌肥厚的影响

目的:观察益气活血方对压力超负荷致心肌肥厚大鼠的血流动力学、形态学及神经内分泌因子影响。方法:采用腹主动脉缩窄法制作压力超负荷致心肌肥厚模型。造模4周后,分为假手术组(S组),模型组(M组),依那普利组(E组)、卡维地洛组(C组)及益气活血方组(SQAB组),观察8周的血流动力学参数、心率(HR)、心输出量(CO)、心脏指数(HMI、LVMI)、血清ANP、BNP含量、形态学等。结果:与S组相比,M组血压及心室内压显著升高,CO下降明显,心脏指数及血清ANP、BNP含量明显上升(P<0.05),心肌组织肥厚明显。与M组相比,SQAB组具有降低LVSP、升高±dp/dtmax,减慢HR,增加CO,降低HMI及血清ANP、BNP含量的作用(P<0.05),改善心肌肥厚程度。结论:益气活血方具有改善压力超负荷致心肌肥厚大鼠的血流动力学,提高心输出量,减轻心肌肥厚,改善神经内分泌因子的作用。

益气活血方抑制异丙肾上腺素致大鼠心肌肥大的动态研究

目的:观察益气活血方对异丙肾上腺素致大鼠心肌肥大不同病理阶段的影响。方法:以异丙肾上腺素20、10、5mg/kg递减皮下注射,3mg/kg维持7d制备大鼠心肌肥大模型,给予益气活血方5、10、15w,观察大鼠血流动力学指标、心输出量、心脏指数、左心室指数以及血清心房利钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)含量的变化。结果:与模型组比较,益气活血方在5、10、15w3个时间点均能显著增加心输出量,提高心肌收缩功能,改善心肌舒张功能(P<0.05)并能有效降低ANP、BNP含量(P<0.05),降低大鼠心脏指数与左心室指数(P<0.05)。结论:益气活血方能有效改善大鼠血流动力学,增加心输出量,降低神经体液因子水平。

双龙丸对实验性心肌梗死大鼠血流动力学的影响

目的 探讨活血通络类中药双龙丸对心肌梗死后心脏血流动力学的影响。方法 结扎左冠状动脉的大鼠 76只随机分为双龙丸大剂量组、双龙丸小剂量组、双嘧达莫组和心梗对照组 ,另将 1 0只未造模的同龄鼠作为正常对照组。分组治疗至观察终点 (每组半数治疗至 2周、半数治疗至 4周时结束 ) ,分别于股动脉和颈总动脉插管 ,应用八导生理记录仪检测心脏血流动力学参数。结果 治疗 2周和 4周 ,双龙丸大、小剂量组和双嘧达莫组较心梗对照组+dp/dtmax显著增高 ,但仍较正常对照组为低。 2周时 ,双龙丸大剂量组尚较心梗对照组 -dp/dtmax也显著增高。 结论 双龙丸治疗心肌梗死能提高心脏左室最大收缩速率 。

乳腺癌耐药细胞株中P-gp、CD147和E-cadherin表达的意义

目的探讨乳腺癌耐药细胞株中P-gp、CD147和E-cadherin表达的意义。方法采用Western blot方法,比较不耐药细胞、药物诱导的耐药细胞和mdr1基因导入的耐药细胞中P-gp、CD147和E-cadherin(E-cd)表达的差异性。结果 P-gp在不耐药细胞中表达很弱,而在两株耐药细胞中均呈高表达。CD147在药物诱导的耐药细胞中表达增强,分子量较小。而E-cd在药物诱导的耐药细胞中表达缺失。结论药物诱导和基因转入均能造成乳腺癌细胞产生多药耐药,而CD147和E-cd在三株乳腺癌细胞中的表达差异与mdr1基因或P-gp蛋白表达并无直接关系,其内在的关系及临床意义值得深入探讨。

HPV16l1基因的克隆及其在真核细胞中的表达

克隆并表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)晚期基因l1,以期为研制防治宫颈癌的DNA疫苗奠定基础。本实验采用PCR方法从质粒p16L1BN1中获得HPV16l1基因片段,利用基因重组技术,将其克隆至含巨细胞病毒(CMV)启动子的真核表达载体中,核酸序列鉴定HPV16l1基因真核表达质粒构建成功,再用脂质体介导基因转染7721人肝癌细胞。转化阳性细胞经SDS-PAGE显示在分子量大约为55kDa的位置出现一条特异性条带,与HPV16L1分子量大小相符。表达产物经Western blotting分析:能与HPV16L1单克隆抗体特异结合。真核表达质粒pcDNA3-HPV16L1构建成功并能在真核细胞7721中有效表达,为下一步进行动物DNA免疫实验奠定了基础。