Genistein、Na_3Vo_4对椎间盘软骨细胞作用效应的研究

目的探讨染料木黄酮(Genistein)和正钒酸钠(sodium orthovanadate,Na3Vo4)对椎间盘软骨终板软骨细胞的作用。方法采用酶消化法培养大鼠椎间盘软骨终板软骨细胞,将不同浓度的Genistein(15μmol/L、35μmol/L、55μmol/L)、Na3Vo(410μmol/L、20μmol/L、30μmol/L)加入到培养的第Ⅲ代软骨细胞中,培养7d;MTT法检测软骨细胞增殖率,RT-PCR检测Ⅱ型、Ⅸ型胶原和Aggrecan mRNA的表达,定量RT-PCR检测IGFR、PTPn1 mRNA的表达。结果干预7d后,15μmol/L Genistein组各项指标与模型组比较变化不明显(P>0.05);35μmol/L Genistein组与模型组比较,软骨细胞增殖率、Ⅱ型胶原及aggrecan mRNA表达显著降低(P<0.01),IGFR mRNA表达较模型组有所降低,但无显著性差异(P>0.05);55μmol/L Genistein组与模型组比较,软骨细胞增殖率、aggrecan基因表达显著下降(P<0.01),Ⅸ型胶原、IGFR mRNA表达较模型组有所降低(P<0.05);Genistein各浓度组PTPn1 mRNA表达无显著变化(P>0.05)。与模型组比较,10μmol/L Na3Vo4组各项检测指标变化不明显(P>0.05);30μmol/L Na3Vo4组Ⅱ、Ⅸ型胶原mRNA表达明显降低(P<0.01);20μmol/L及30μmol/L Na3Vo4组软骨细胞增殖率明显下降(P<0.01),aggrecan及PTPn1 mRNA表达显著降低(P<0.05),IGFR mRNA表达无显著变化(P>0.05)。结论Genistein可特异性抑制PTKs中IGFR基因表达,适当剂量Na3Vo4可抑制PTPs中PTPn1的基因表达,降低软骨细胞生物学功能。

痉、痿证方对大鼠脊髓持续性压迫损伤局部VEGF的影响

目的研究大鼠脊髓持续性压迫后VEGF(血管内皮生长因子)含量变化,探讨痉、痿证方 对大鼠脊髓持续性慢性损伤VEGF的影响。方法采用大鼠颈椎前路螺钉压迫颈脊髓,螺钉持续留 置压迫30天以产生慢性损伤,用免疫组化EnVision法检测局部VEGF表达的变化。结果 与假手 术组相比,轻、重压模型组有非常显著性差异,P<0.01;药物干预后,各组表达进一步增高,治疗组与 模型组以及治疗组之间相比,具有非常显著性差异,P<0.01。结论脊髓慢性损伤能够刺激VEGF表 达增高,痉、痿证方能进一步增强VEGF的表达。

新生鼠嗅鞘细胞培养的几种纯化方法的比较

目的对文献报道的嗅鞘细胞(OEC)纯化方法进行比较,寻找一种较优化的纯化方法,为细胞移植修复脊髓损伤实验研究提供高纯度的种子细胞。方法实验分别比较了3种纯化方法:差速贴壁法、差速贴壁法联合阿糖胞苷化学纯化法、差速贴壁法联合NGFRp75抗体纯化法纯化原代培养的新生SD大鼠的OEC,并对纯化的OEC的形态学和免疫学特性等进行观察。结果与另两种纯化方法相比,差速贴壁法联合NGFRp75抗体纯化法得到的OEC不仅纯度高而且细胞活性好。结论该实验找到了一种纯化OEC的较优化方法——差速贴壁法联合NGFRp75抗体纯化法,此法得到的细胞较符合细胞移植的要求,为下一步细胞移植修复脊髓损伤实验研究打下了细胞学基础。