中医药治疗非酒精性脂肪性肝病临床试验的相关问题探讨

非酒精性脂肪性肝病的患病率呈逐年上升趋势,中医药作为非酒精性脂肪性肝病的主要治疗手段之一,其临床试验受到关注和重视。从现有已经报道的临床试验来看,须要在证候选择性、疾病评估标准、行为干预控制和疗效评价指标确立等关键问题上形成共识。结合国内外研究新进展,对上述问题进行全面述评,期望为提高中医药治疗非酒精性脂肪性肝病临床试验的质量提供对策和建议。

《2016年英国国家卫生与临床优化研究所非酒精性脂肪性肝病的评估和管理指南》摘译

该指南的推荐代表英国国家卫生与临床优化研究所（NICE）的观点,并且是基于可用证据、认真考虑后得出的意见。在临床实践判断时,期望专业人员充分考虑这份指南,结合个人需求、倾向（偏好）和对患者或者使用者的价值。指南的建议不是强制性的,医务人员应根据患者的个人情况,并与患者或其监护人协商而制订合适的医疗策略。如果地区的个体医护人员或者他们的患者有意愿使用该指南,当地的医疗决策者有责任支持和帮助该指南的应用。

基于整体网分析理论的脂肪肝中医辨证研究

目的探讨脂肪肝中医证候的分类。方法运用整体网分析方法对SOM神经网络整理出的关系数据集进行整体网络结构分析,为脂肪肝的中医辨证提供参考依据。主要考量中心性用以评价各个症状在"辨证论治"中的重要程度;考量中心势用以推测论证型的多寡和兼杂程度;考量分派指数用以推测理想辨证的可靠程度。结果脂肪肝疾病的中医辨证,较难得到单一的主证,辨证体系比较复杂,证型较多;脂肪肝辨证中较易出现兼杂证。结论基于症状与症状的关联进行分析可以发现中医证候的集群现象;提出脂肪肝的中医辨证标准具有较高参考价值;基于兼杂证型的调查研究数据,提取中医基本证候类型的思路是可行的。

基于权重配方法的降脂颗粒治疗非酒精性脂肪性肝病组分配伍优化研究

目的:依据权重配方法结合治疗非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的药效,筛选降脂颗粒组分配比最优方案。方法:降脂颗粒中5味药的提取物,按权重配方设计表U6(35)配制成3水平5味药共6个配伍组(A、B、C、D、E、F)。雄性Wistar大鼠,随机分为空白组(K)、模型组(M)、降脂颗粒6个配伍组(A～F)和辛伐他汀组(S)。K组给予普通饲料,其余予高脂饲料。造模同时A～F和S组给予相应药物灌胃,K、M组予生理盐水,持续6周。收集各组大鼠肝组织和血清,检测血清ALT、AST、HDL、LDL和肝组织甘油三酯(TG)含量,分析肝脏组织病理学变化。结果:M组大鼠肝细胞明显脂肪变性,A～F组与S组大鼠肝组织均有不同程度改善,且A～F组优于S组。相对于K组,M组大鼠ALT、AST升高;A～F组与M组相比ALT、AST水平下调,D、E组下调趋势明显,S组无改善。M组大鼠LDL升高,C、E组LDL水平显著降低。M组大鼠肝组织TG显著升高,A～E和S组TG均显著下调,其中A、C、E组优于S组,E组作用最明显。结论:降脂颗粒各组分配伍组对大鼠NAFLD模型均有疗效,其中优选出E组疗效最显著,可作为研发治疗NAFLD疗效更优的中成药的基础。

铁超载与非酒精性脂肪性肝病的关系及其作用机制的研究进展

作为多重打击的一部分,铁超载在非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,N A F L D)的发生发展过程中起到重要作用.铁超载影响机体的糖、脂、能量代谢以及炎症反应.因此本文就铁超载与NAFLD的关系加以综述,以期能阐明铁超载对NAFLD的代谢调节机制.

清肝活血方及其拆方对酒精性肝病大鼠CD14、TLR_4表达的影响

目的:探讨清肝活血方及其拆方对酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)大鼠肝组织CD14、TLR4表达的影响.方法:♂Wistar大鼠100只随机分成空白组、CCl4组各10只,余80只为造模组,采用复合因素复制ALD模型6wk.CCl4组予微量CCl4腹腔注射,每周2次.造模4wk后将模型组随机分成4组,清肝活血方及其拆方组各15只,余为模型组.予等效剂量清肝活血方及拆方ig2wk.检测血清ALT,AST水平;留取肝脏标本进行HE染色.RT-PCR检测肝组织CD14 mRNA、TLR4 mRNA表达,免疫组织化学染色检测肝组织CD14表达,Western blot检测肝组织TLR4蛋白表达.结果:与模型组比较,清肝活血方及其拆方均可明显改善ALD大鼠肝脏脂肪变及肝脏炎症程度(0.67±0.50,2.15±1.28,1.38±1.06vs4.56±0.73,均P<0.01).清肝活血方能显著降低模型大鼠血清ALT水平(725.65±111.02vs884.68±177.54,P<0.05),清肝方和活血方无明显作用;清肝方、活血方、清肝活血方均可明显降低ALD大鼠血清AST水平(2383.81±888.18,2158.93±922.85,2001.90±519.27vs3210.98±640.63,P<0.01或0.05),组间比较无显著差异.清肝方及清肝活血方能显著降低模型大鼠CD14 mRNA表达(1.46±0.52,1.10±0.40vs2.67±0.66,均P<0.01),活血方作用不明显,清肝活血方优于活血方.清肝方、活血方、清肝活血方均能显著降低模型大鼠肝组织TLR4 mRNA表达(1.91±0.03,2.11±0.03,1.53±0.01vs2.37±0.03,均P<0.01),组间比较无显著差异.清肝活血方显著降低模型大鼠肝组织CD14表达(13392.28±9287.54vs32288.89±15631.03,P<0.01).清肝方、活血方、清肝活血方均能显著降低模型大鼠肝组织TLR4表达(1.06±0.10,1.19±0.05,0.98±0.12vs1.40±0.11,均P<0.01).结论:清肝活血方及其拆方发挥对ALD的防治作用,其作用机制可能与降低CD14、TLR4基因和蛋白的表达有关.

下丘脑STAT3在非酒精性脂肪性肝病大鼠发病中的作用及降脂颗粒的干预

目的:观察非酒精性脂肪肝大鼠下丘脑STAT3蛋白表达和组成性激活的改变,以及中药降脂颗粒对其干预作用.方法:高脂饲料制备非酒精性脂肪肝大鼠模型,待造模成功后将大鼠随机分为模型对照组(n=10)、辛伐他汀组(n=10)、降脂颗粒组(n=10),每日进行ig药物干预,4wk,并设空白对照组(n=8).比色法检测血清TG、TC;HE染色观察观察肝组织脂肪变和炎症;Westernblot检测下丘脑磷酸化STAT3蛋白表达,EMSA检测下丘脑STAT3的组成性激活状态.结果:磷酸化STAT3蛋白表达及其组成性激活在非酒精性脂肪肝大鼠均明显降低,降脂颗粒用药组及辛伐他汀组能下调大鼠血清TG(0.54±0.09mmol/L,0.68±0.08mmol/Lvs0.84±0.09mmol/L,均P<0.05)、TC(1.85±0.31mmol/L,2.08±0.30mmol/Lvs2.84±0.30mmol/L,均P<0.05)水平,减轻肝脂肪变(2.26±0.52,2.57±0.67vs3.10±0.57,均P<0.05)和炎症程度(0.68±0.67,0.95±0.6vs1.52±0.71,均P<0.05);上调下丘脑组织磷酸化STAT3蛋白表达及其组成性激活.结论:STAT3在非酒精性脂肪肝大鼠下丘脑组织表达和激活明显下降,中药降脂颗粒对非酒精性脂肪肝有很好的治疗作用,并可上调STAT3的表达和组成性激活.

三七理血脂肝方对大鼠非酒精性单纯性脂肪肝的药效学研究

目的:探讨三七理血脂肝方对大鼠非酒精性单纯性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver,NAFL)的治疗作用,进而探讨其作用机制。方法:雄性Wistar大鼠36只,随机分成正常组(C)、模型组(M)、三七理血脂肝方组(Y),每组12只。C组给予普通饲料,M和Y组予高脂饲料造模,4周后继续予高脂饲料同时Y组大鼠予相应药物干预4周。动物实验结束时,取3组大鼠肝脏组织用苏木精-伊红染色、油红O染色进行病理学观察,检测肝组织甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量。检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性,以及血脂血糖指标TG、TC、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(FFA)、空腹血糖(FBG)。蛋白免疫印迹法检测肝组织细胞色素P450亚型2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1)和解耦联蛋白2(uncoupling protein-2,UCP2)的表达水平。结果:M组大鼠血清ALT和LDL-C较C组显著升高,Y组中这两个指标较M组明显下调,并能降低血清FFA水平;M组大鼠肝组织出现弥漫性大泡性脂肪变性,肝组织TG、TC含量显著升高,Y组大鼠肝脏的脂肪变性从分布和程度上均有所减轻,肝脂含量降低。另外M组大鼠肝脏的CYP2E1的表达上调、UCP2下调,Y组表达趋向正常水平。结论:三七理血脂肝方对大鼠NAFL治疗有效,方药的降脂理血功效可能通过抑制氧化应激、调节脂质代谢发挥降脂保肝作用。

当飞利肝宁胶囊预防非酒精性脂肪性肝病大鼠肝纤维化

目的:研究当飞利肝宁胶囊对大鼠非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)肝纤维化的预防作用。方法:雄性Wistar大鼠30只,随机分为正常组、模型组和治疗组。正常组大鼠喂食普通饲料,模型与治疗组大鼠给予高脂饲料,治疗组同时予当飞利肝宁胶囊灌胃。8周后,对模型与治疗组大鼠腹腔注射小剂量四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4),48小时后处死各组动物并取肝组织固定或冻存。观察各组大鼠肝组织天狼猩红染色结果,应用荧光定量RT-PCR和Western blot检测肝脏纤溶酶原激活物抑制因子-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)、转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle ac-tin,α-SMA)及I型胶原α1(collagen type I alpha 1,COL1A1)表达水平。结果:模型组大鼠肝组织出现广泛肝细胞脂肪变性,在肝小叶3区可见轻度窦周纤维化,而治疗组大鼠肝细胞周围无明显胶原沉积。模型组大鼠肝组织PAI-1、α-SMA、TGF-β1、COL1A1表达水平较正常组升高(P<0.05),在治疗组大鼠肝脏中上述促纤维化基因的表达被显著下调(P<0.05)。结论:当飞利肝宁胶囊对高脂饮食联合CCl4诱导的大鼠NAFLD肝纤维化具有预防作用,其机制可能与调控NAFLD进展中TGF-β1和PAI-1的表达从而抑制肝星状细胞活化、胶原增生及促进细胞外基质降解相关。

非酒精性脂肪性肝病的代谢发病机制

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是常见的慢性肝脏疾病,往往与肥胖、高血糖症、高脂血症、高胰岛素血症、高血压病等胰岛素抵抗相关性疾病并存,严重威胁着人类的健康.本文主要从代谢网络调控角度探讨NAFLD与机体糖、脂代谢间的相关性,并提出运用现代代谢组学的方法研究两者之间的可能内在关系,旨在为临床诊断和治疗提供依据.

茵陈蒿汤护肝作用研究进展

茵陈蒿汤是临床上治疗肝病的有效方剂。茵陈蒿汤及其有效成分包括乙醇提取物、6,7-二甲氧基香豆素、茵陈二炔酮、茵陈炔、蒽醌类化合物和京尼平,能抑制核因子κB激活,减少炎症细胞因子产生和氧化应激,减轻肝细胞损伤和凋亡,抑制肝星状细胞激活和增殖,促进肝星状细胞凋亡,减少肝组织细胞外基质沉积,因而具有较显著的抗肝损伤和抗肝纤维化作用,为其临床应用和试验研究提供了科学依据。

清肝活血方及其拆方对酒精性肝病大鼠肝组织P-ERK NF-κB表达的调控

目的:通过研究清肝活血方及其拆方对酒精性肝病大鼠肝组织P-ERK、NF-κB蛋白表达的影响,探讨清肝活血方及其拆方治疗酒精性肝病的作用机制。方法:将Wistar大鼠随机分为空白组、CCl4组、造模组,造模组采用复合因素复制酒精性肝病模型。4周后将造模组随机分为模型组、清肝方组、活血方组、清肝活血方组。各中药组予相应中药灌胃2周。观察肝功能、肝脏病理学变化、Western blot法检测肝组织P-ERK、NF-κB蛋白表达。结果:清肝活血方及其拆方均可明显改善模型大鼠肝脏脂肪变性及炎症程度,清肝活血方优于拆方。清肝活血方能显著降低模型大鼠血清ALT水平,拆方无明显作用;清肝活血方及其拆方均可显著降低模型大鼠血清AST水平及肝组织P-ERK、NF-κB蛋白表达。结论:清肝活血方及其拆方可通过抑制肝组织P-ERK、NF-κB表达发挥对酒精性肝病的防治作用,清肝活血方的作用优于拆方。

重视非酒精性脂肪性肝病胰岛素抵抗的防治

胰岛素抵抗广泛存在于非酒精性脂肪性肝病发生、发展的各个环节.胰岛素抵抗的存在不仅影响非酒精性脂肪性肝病的进展,还提高肝细胞对损肝因素的敏感性,影响药物治疗的效果.重视非酒精性脂肪性肝病胰岛素抵抗的诊断和治疗,将有益于改善非酒精性脂肪性肝病的预后,提高药物治疗效果.中医药治疗胰岛素抵抗已经显示了一些特色和优势,在加强患者科学管理,重视生活方式干预的基础上,开展对非酒精性脂肪性肝病胰岛素抵抗证候病机的研究,加强对有效方药的科学评价并积极探索其作用机制,将有助于提高中医药防治胰岛素抵抗的研究水平.

锌指蛋白A20在肝损伤中的研究进展

锌指蛋白A20是具有独特生物学特征和生物学活性的一类具有锌指结构的蛋白,上世纪90年代美国病理学家Dixit在研究内皮细胞对TNF诱导应答的基因时发现使用TNF、IL-1和PLS刺激内皮细胞时均能够高速表达一条特殊基因,这条基因的可读编码是一种新型的锌指蛋白,即锌指蛋白A20（Zinc-finger protein A20,A20）。

克罗恩病的糖、脂类和蛋白质代谢异常

炎症性肠病(inflammatory bowel diseases,IBD)包括克罗恩病(Crohn's disease,CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC),其威胁着人类的健康.他起因不适当的免疫应答、遗传易感个体及共生的微生物抗原,并可被特定的环境因素所诱发.本文主要综述了CD的糖、脂类及蛋白质代谢异常及代谢组学平台在揭示CD生物学标志和发病机制中的意义.

当飞利肝宁胶囊改善高脂饮食联合四氯化碳诱导的大鼠非酒精性脂肪性肝炎的作用机制

目的研究当飞利肝宁胶囊对高脂饮食联合四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)防治作用及机制。方法雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组、NASH模型组和当飞利肝宁胶囊治疗组。正常组大鼠喂食普通饲料,模型和治疗组给予高脂饲料,治疗组同时每天予当飞利肝宁胶囊灌胃干预。8周后,除正常组外,其余大鼠腹腔注射CCl4,48 h后处死并收集血清和肝脏组织。观察肝脏组织病理学改变,检测血清ALT、AST、乳酸脱氢酶(LDH)、总胆红素(TBil)、胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和游离脂肪酸(FFA)水平,检测血清空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FIN)并计算HOMA指数,以及血清脂联素和肝组织肿瘤坏死因子(TNFα)含量。结果肝组织油红O染色显示,模型组出现大面积小叶内肝细胞脂肪变性,HE染色同时显示出肝细胞气球样变性和炎性细胞浸润,而治疗组肝细胞脂肪变性、气球样变和炎性浸润明显减轻。模型组血清ALT、AST、LDH、TG、LDL、FFA水平较正常组显著升高(P<0.05),HOMA指数和肝组织TNFα含量也显著升高(P<0.05),血清脂联素含量明显下降;治疗组大鼠上述指标均显著改善(P<0.05)。结论当飞利肝宁胶囊对高脂饮食联合CCl4诱导的大鼠NASH具有显著防治作用,对脂联素、TNFα表达水平的调节和改善胰岛素抵抗是其重要机制。

不同治则中药复方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠uPA纤溶途径的调控

目的:研究不同治则中药复方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠uPA-纤溶酶-MMP级联反应纤溶途径的调控作用。方法:SD雄性大鼠60只随机分为假手术组和造模组,造模组1周后随机分为模型组、二至丸组、失笑散组及合方组。各治疗组分别给予相应药物灌胃,模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,4周末处死大鼠。观察一般情况、肝功能(ALT、AST、ALP、TB il)、肝组织病理、W estern印迹法检测肝组织uPA蛋白表达、ELISA法检测肝组织MMP-2、MMP-9的表达。结果:与模型组比较,3个复方均能降低胆汁淤积性肝纤维化大鼠血清ALP、ALT、AST水平(P<0.01),失笑散及合方能降低TB il(P<0.01);合方改善ALP、ALT优于两个复方。3个复方均能不同程度地减轻模型大鼠肝纤维化程度(P<0.01),合方优于两个复方。3个复方均能显著提高胆汁淤积性肝纤维化大鼠uPA、MMP-2、MMP-9的表达(P<0.01),合方对上述环节的调控优于两个复方。结论:不同治则中药复方均能改善胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝功能,减轻纤维化程度,合方作用优于两个复方,其机制可能与通过上调uPA、MMP-2、MMP-9,从而调控uPA-纤溶酶-MMP级联反应纤溶途径有关。

尿激酶型纤溶酶原激活剂在大鼠胆汁淤积性肝纤维化形成过程中的动态变化及其意义

目的:研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)在胆汁淤积性肝纤维化形成过程中的变化及其作用。方法:应用胆管结扎法复制胆汁淤积性肝纤维化动物模型,分为假手术组,模型1周组、2周组、3周组、4周组,观察模型大鼠肝组织病理、纤维化程度、Western印迹法检测肝组织中uPA蛋白含量的动态变化。结果:随胆管阻塞时间延长,胆管阻塞性大鼠肝纤维化程度逐渐增加,uPA蛋白含量逐渐显著升高(1周121.39±8.35,2周199.83±13.45,3周361.56±21.28,4周198.49±8.04 vs 32.38±5.35,P<0.01),3周时达到峰值,随后显著下降。结论:uPA在胆汁淤积性肝纤维化形成过程中存在动态变化和差异表达,与胆汁淤积性肝纤维化形成有关。

强肝胶囊对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏瘦素受体及P-JAK2和P-STAT3蛋白的影响

[目的]观察强肝胶囊对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠的治疗作用,及其对血清瘦素、肝组织瘦素受体mRNA、P-JAK2和P-STAT3蛋白表达的影响,探讨强肝胶囊治疗NAFLD的可能机制。[方法]高脂饲料制备SD雄性大鼠NAFLD模型,随机分为空白组和造模组。待造模成功后将造模组大鼠随机分为模型对照(模型)组、强肝胶囊组和辛伐他汀组。治疗4周后行肝组织病理学检测,并同时应用ELISA试剂盒检测血清瘦素,RT-PCR法检测肝组织瘦素受体mRNA表达,western blot检测肝组织P-JAK2、P-STAT3蛋白的表达。[结果]强肝胶囊能明显降低NAFLD模型大鼠肝组织三酰甘油、总胆固醇的水平,改善脂肪变性,降低肝脏炎症反应,并能明显降低血清瘦素高水平状态,改善瘦素抵抗,同时增加瘦素受体mRNA的表达,增加肝组织P-JAK2、P-STAT3蛋白的水平。[结论]强肝胶囊对NAFLD大鼠肝脏脂质和炎症有较好的治疗作用,其可能机制是通过改善瘦素抵抗,增加肝脏瘦素受体mRNA表达及P-JAK2、P-STAT3蛋白水平而完成的。

HPLC测定清肝活血方中4种黄酮的含量

目的建立HPLC同时测定清肝活血方中葛根素、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素含量的方法。方法采用HPLC进行分析，色谱柱为AgilentZorbaxEclipseXDB—C18柱（4．6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇-0．5％甲酸水梯度洗脱，流速为1．0mL·min^-1，检测波长为276nm。结果葛根素的线性范围为0．12～1．98g·L^-1（r=0．9998），平均回收率为99．87％，RSD=2．04％；黄芩苷的线性范围为0．24～3．82g·L^-1（r=0．9999），平均回收率为99．74％，RsD=1J84％；黄芩素的线性范围为n01～n14g·L^-1（r=n9996），平均回收率为99．64％，RSD=1．96％；汉黄芩素的线性范围为0.007～0．12g·L^-1（r=0．9995），平均回收率为100．83％，RSD=2．37％。结论本方法操作简便，测定结果准确可靠，可用于清肝活血方的质量控制。