人NEDD8原核表达及兔高免血清制备

本研究根据基因比对,将合成的nedd8基因(HN8)酶切克隆入p Cold-TF原核表达载体中,命名为p Cold-HN8,转化到感受态宿主菌BL21(DE3)中,加入不同浓度异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)于16℃中诱导表达24 h,超声波裂解,通过His-bind纯化试剂盒纯化,分别进行SDS-PAGE检测,结果 HN8蛋白获得可溶性表达,融合蛋白大小为64 k Da。用纯化的蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,经Western Blot和间接免疫荧光试验证实,兔抗HN8蛋白的血清能够特异性识别HN8蛋白。这为进一步研究HN8蛋白在Neddylation通路中的修饰作用奠定了基础。