化痰散结方对肿瘤间质纤维母细胞活化相关蛋白表达的影响

目的探讨化痰散结方对肿瘤间质纤维母细胞活化状态的影响。方法 walker-256细胞株建立大鼠胃种植瘤模型,40只大鼠,36只于胃部接种瘤块,其余4只不接种的大鼠为正常对照组,种植瘤块的Wistar大鼠随机分为化痰散结方高剂量组,化痰散结中药3m L/只(含生药3g·m L-1),化痰散结方低剂量组,化痰散结中药3m L/只(含生药1g·m L-1),模型对照组(给予生理盐水3m L/只);每组12只,各组于造模后次日立即给药,每日灌胃,连续给药21d;正常对照组每日仅正常饮食饲养;21d后通过免疫组化、Western-blot、Real-time PCR法检测各组胃种植瘤组织中及正常大鼠胃组织中CD34、成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein alpha,FAPα)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-Sma)的表达。结果模型对照组与化痰散结方高、低剂量组胃种植瘤中CD34的蛋白及基因表达水平明显低于正常对照组大鼠胃组织(P<0.05或<0.01),而其FAPα和α-SMA的表达则明显高于正常对照组(P<0.05);与模型对照组相比,中药高、低剂量组CD34的表达均升高(P<0.05或<0.01);而中药高剂量组中FAPα与α-SMA的表达则明显低于模型对照组(P<0.01)。结论化痰散结方可以降低肿瘤间质纤维母细胞活化相关蛋白的表达,对间质纤维母细胞活化有一定的阻断作用。

肺腺癌转移相关转录本1诱导肺癌HCC827细胞对奥希替尼耐药的作用机制

目的探讨肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)和奥希替尼对肺癌细胞HCC827增殖和凋亡的影响以及MALAT1介导奥希替尼耐药的机制。方法应用LV-vector和LV-over/MALAT1转染HCC827细胞,建立稳定细胞株HCC827/Vector和HCC827/MALAT1。应用短发夹RNA阴性对照(shRNA-NC)、shRNA人表皮生长因子受体3(shRNA-ERBB3)转染HCC827/MALAT1细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MALAT1、奥希替尼和shRNA-ERBB3对细胞增殖的影响,应用流式细胞术检测MALAT1、奥希替尼和shRNA-ERBB3对细胞凋亡的影响。应用Westernblot检测MALAT1、奥希替尼和shRNA-ERBB3作用后,肺癌细胞中表皮生长因子受体(EGFR)和ERBB3信号通路相关蛋白的表达。结果MTT结果显示,奥希替尼对HCC827/MALAT1细胞增殖的抑制作用显著降低,半数抑制浓度(IC50)>4000nmol/L;但干扰ERBB3后,HCC827/MALAT1细胞对奥希替尼再次敏感,IC50为(17.27±3.21)nmol/L。细胞凋亡实验显示,10nmol/L奥希替尼干预HCC827/MALAT1细胞后,凋亡率为(8.38±0.92)%;但干扰ERBB3后,奥希替尼能促进HCC827/MALAT1细胞凋亡,凋亡率为(27.17±5.83)%,差异有统计学意义(P<0.01);Westernblot检测结果显示,HCC827/MALAT1细胞中磷酸化ERBB3(p-ERBB3)、p-AKT和p-ERK蛋白明显上调,奥希替尼能抑制磷酸化EGFR(p-EGFR)蛋白的表达,但对p-ERBB3、p-AKT和p-ERK蛋白的表达无影响。敲减ERBB3后,奥希替尼能下调p-EGFR、p-ERBB3、p-AKT和p-ERK蛋白的表达水平。结论MALAT1可能是通过激活ERBB3/PI3K/AKT和ERBB3/MAPK/ERK信号通路介导了奥希替尼耐药。