从肺脾肾不同组织水通道蛋白变化研究中医“水液代谢理论”的实验基础

目的从肺脾肾不同组织水通道蛋白变化研究中医"水液代谢理论"的实验基础。方法通过2%腺嘌呤混悬液灌胃4周制备肾阳虚大鼠模型,并予肉苁蓉煎液进行干预6周,检测尿17羟皮质醇值含量、尿肌酐和尿渗透压,检测水通道蛋白1(AQP1)基因在肺、脾、肾的表达量的变化,及AQP1蛋白在各组织的表达情况。结果腺嘌呤模型大鼠尿17羟皮质醇值含量较正常组降低,符合肾阳虚,同时尿肌酐和尿渗透压降低。AQP1基因在腺嘌呤模型大鼠脾、肾组织的表达下调,肉苁蓉干预组AQP1基因在肺、肾组织的表达较模型组显著上调。AQP1蛋白在腺嘌呤模型组肺脾肾各组织中表达均增加,经肉苁蓉干预的大鼠肺肾组织中AQP1蛋白表达减少。结论肺、脾、肾均参与水液调节,AQP1是其分子基础之一,补益肾阳药物肉苁蓉有上调AQP1基因的作用,AQP1蛋白的表达还受到其他因子的调控。

肝郁脾虚型慢性乙型肝炎中医证候改善与临床疗效的相关性

目的:探讨肝郁脾虚型慢性乙型肝炎中医证候改善与临床疗效的相关性。方法:纳入符合诊断标准的60例肝郁脾虚型慢性乙型肝炎患者,随机分为治疗组(n=30)和对照组(n=30)。在基础治疗和情志调护的基础上,治疗组加用逍遥散加减治疗。两组患者均治疗3个月。以中医证候积分、情志量表积分、临床疗效、为评价指标,探讨其相关性。结果:①治疗组患者中医证候积分由治疗前(6.70±2.02)下降至(3.17±1.34)(P<0.01),对照组患者中医证候积分由治疗前(6.37±1.50)下降至(3.77±1.22)(P<0.01)。治疗后两组患者中医证候积分改善存在差异,治疗组优于对照组(P<0.05)。②治疗组患者中医证候积分改善与年龄、治疗前HAMA评分、SAS减分、体重变化因子减分、治疗后HBV DNA阴转、治疗前HBeAg(-)均具有相关性(P<0.05),其中与治疗后HBV DNA阴转、SAS减分呈正相关,与体重因子评分、治疗前HAMA呈负相关。结论:①逍遥散可显著改善慢性乙型肝炎患者的中医证候积分。②中医证候疗效改善与SAS减分呈正相关,与治疗前HAMA评分呈负相关,表明慢性乙型肝炎患者的情绪状态在证候疗效中占有主要作用。

中医外治法治疗非酒精性脂肪性肝病临床研究进展

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指排除长期大量酒精和其他明确损肝因素所致的以脂质在肝细胞中蓄积为病理改变的临床病理综合征,与胰岛素抵抗(IR)和遗传易感密切相关的代谢应激性肝损伤。疾病谱括非酒精性肝脂肪变(non-alcoholic hepatic steatosis)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化和肝细胞癌(HCC)[1,2]。非酒精性脂肪性肝病是代谢综合征、2型糖尿病、动脉硬化性心血管疾病以及结直肠肿瘤的重要危险因素之一。随着生活水平的提高,生活方式和膳食结构的改变,全球NAFLD患病率呈逐年增长的趋势,中国NAFLD患病率大于25%,已成为我国第一大慢性肝病[3,4]。

594例轻度慢性乙型肝炎中医证候分布规律调查研究

目的:探讨轻度慢性乙型肝炎(CHB)患者的中医证候分布规律,为规范化治疗CHB提供参考依据。方法:运用中医证候量表对594例轻度CHB患者进行中医证候调查,采用聚类分析的方法对纳入的患者进行聚类,并结合变量频数分析对证型归属进行判定。结果:收集的轻度CHB病例均以肝郁脾虚为主要证型,在此基础上合并有6个兼证,分别为肝郁脾虚兼湿热阴虚血瘀证型(62.80%)、肝郁脾虚兼肝肾阴虚证型(24.24%)、肝郁脾虚兼肝郁化火证型(5.05%)、肝郁脾虚兼肝胃不和证型(3.70%)、肝郁脾虚兼中气亏虚证型(2.53%)和肝郁脾虚兼瘀血阻络证型(1.68%)。肝郁脾虚兼湿热阴虚血瘀证型又进一步分为5个亚型,分别为脾虚为主型(45.30%)、普通型(22.52%)、气滞为主型(17.70%)、湿热为主型(10.46%)、肾虚为主型(4.02%)。结论:肝郁脾虚证型为轻度CHB的基本证型。

复方鳖甲软肝片治疗原发性胆汁性肝硬化的临床疗效评价

目的评价复方鳖甲软肝片治疗原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者的临床疗效。方法按照随机双盲安慰剂对照设计方法,纳入上海中医药大学附属曙光医院2011年11月-2013年12月确诊的56例PBC患者,分为治疗组和对照组各28例。治疗组给予复方鳖甲软肝片（4片/次,3次/d,口服）联合熊去氧胆酸片（UDCA）（50 mg/片,10～15 mg·kg^-1·d^-1）治疗。对照组给予空白安慰剂（4片/次,3次/日,口服）联合UDCA 50 mg/片,10～15 mg·kg^-1·d^-1）治疗。两组患者均治疗12个月。观察治疗前后患者临床症状、PBC-40量表、肝功能（ALT、AST、ALP、GGT、TBil）、肝脏弹力硬度值的变化。组间计量资料比较采用t检验,计数资料比较采用χ2检验。结果治疗12个月后,治疗组患者肝功能ALT、AST、GGT、ALP、TBil均有显著下降,与治疗前相比差异有统计学意义（t值分别为3.2019、3.0953、3.0279,P值均〈0.01;t值分别为2.4420、2.1621,P值均〈0.05）,对照组患者肝功能仅GGT显著下降,与治疗前相比差异有统计学意义（t=1.9981,P〈0.05）;治疗后两组患者肝功能比较,治疗组GGT、ALP较对照组显著下降,两组相比差异有统计学意义（t值分别为2.0061、2.3106,P值均〈0.05）。治疗组患者脏弹力硬度值由治疗前（14.37±10.58）k Pa显著下降至（10.02±5.96）k Pa,差异有统计学意义（t=2.1134,P〈0.05）。治疗组患者治疗后PBC-40量表皮肤瘙痒、社交和疲劳维度较治疗前显著下降,差异有统计学意义（t值分别为2.5158、2.1409、3.2441,P值均〈0.05）,两组患者治疗后在疲劳和社交维度差异有统计学意义（t值分别为3.1491、2.6287,P值均〈0.05）。结论复方鳖甲软肝片可显著改善PBC患者肝功能,降低患者肝脏弹力硬度值,显著改善患者PBC-40皮肤瘙痒和疲劳等临床症状,在临床上具有一定推广应用价值。

健脾消脂方联合运动饮食疗法治疗非酒精性脂肪性肝炎的临床疗效评价

目的:评价健脾消脂方联合运动饮食疗法治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的临床疗效。方法:60例NASH患者按照随机双盲对照设计方法,分为治疗组和对照组各30例。治疗组患者给予健脾消脂方(0.5剂/次,2次/d,口服)联合运动饮食治疗。对照组患者给予易善复(456 mg/次,3次/d,口服)联合运动饮食治疗。疗程均为24周。观察两组患者治疗前后BMI值、肝功能(ALT、AST、GGT)、血脂(TC、TG)、肝/脾CT比值和中医证候积分变化。结果:治疗24周后,治疗组患者BMI、肝功能(ALT、AST、GGT)、血脂(TC、TG)较治疗前明显下降(<0.05),与对照组相比差异有显著性意义(<0.05);治疗组患者中医证候积分较对照组有明显改善(<0.05);治疗组患者肝/脾CT比值较治疗前升高了0.22±0.20,对照组患者升高了0.07±0.18;治疗组肝/脾CT比值较对照组明显改善(<0.05)。结论:健脾消脂方联合运动饮食疗法能明显改善非酒精性脂肪性肝炎患者的临床症状、肝功能、血脂水平和肝/脾CT比值,具有较好的临床疗效,有一定推广应用价值。

中医药对慢性乙型肝炎T细胞及其亚群的调节作用

慢性乙型肝炎(CHB)是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起,以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种疾病。CHB的主要发病机制是HBV感染以及免疫调控紊乱。因此,有关抗病毒和免疫调节的研究对治疗CHB有重要意义。CHB发病的主要原因是细胞免疫功能紊乱,T细胞亚群失衡,不能有效地清除病毒。中医药对CHB的免疫调节具有多层次、多靶点、多途径的治疗优势,但其具体治疗机制尚未明确。该文章主要通过中医药调节T细胞及其亚群,阐述中医药对CHB的治疗作用。

黄芪提取物调节TRPM2表达的抗急性药物性肝损伤作用研究

目的 探讨黄芪提取物(AR)调节TRPM2表达的抗急性DILI作用机制。方法 雄性小鼠39只,随机分为对照组(n=7),对乙酰氨基酚(APAP)模型组,AR低、高剂量组及N-乙酰半胱氨酸(NAC)治疗组,每组各8只。其中AR低、高剂量组分别以50、75 mg/kg的AR灌胃,NAC组以100 mg/kg灌胃,每日1次,共3 d。第4天,除对照组外,其余各组以350 mg/kg剂量APAP灌胃,12 h后处死全部小鼠,收集血清及肝组织。检测血清ALT、AST活性;HE染色观察肝组织病理学变化;免疫组化染色观察肝组织髓过氧化物酶(MPO)、瞬时受体电位M2型离子通道(TRPM2)表达。体外实验以不同剂量APAP(0、5、10、20 mM)孵育AML12细胞12、24 h,筛选出APAP肝细胞损伤最佳浓度和作用时间,并动态检测肝细胞TRPM2基因及蛋白表达。肝细胞分为对照组,模型组,AR低、高剂量组及NAC对照组,除对照组外,其余各组以20 mM APAP诱导损伤,并分别以125、250μg/mL的AR、50 mM NAC孵育24 h。采用CCK8检测细胞活力,qRT-PCR检测肝细胞TRPM2基因表达、Western Blot检测蛋白表达。结果 与对照组比较,APAP可诱导急性DILI,血清ALT、AST活性明显升高(F=35.717、F=18.997,P值均<0.01),肝组织结构破坏严重、肝细胞大块/亚大块坏死、中央静脉淤血;与模型组相比,AR能显著降低模型小鼠血清ALT、AST活性,减轻肝细胞坏死、肝组织MPO及TRPM2表达,具有明显的保肝作用,且AR高剂量组与NAC疗效相当。5 mM APAP孵育AML12细胞24 h明显诱导肝细胞损伤,且肝细胞TRPM2表达随着时间的延长而增加(F=25.408,P<0.01);与模型组相比,AR可提高肝细胞活力、降低肝细胞TRPM2表达。结论 黄芪提取物具有良好的保护APAP诱导急性DILI作用,其机制与抑制TRPM2表达相关。

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血T细胞γ干扰素和白细胞介素4的水平变化

目的研究慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染过程中外周血T细胞表达细胞因子的调节作用。方法 60例慢性HBV感染者分为免疫耐受期组、免疫清除期组和非活动期组,20例健康人群作为对照组。另收集21例乙型肝炎病毒e抗原(HBe Ag)阳性的慢性乙型肝炎患者,进行恩替卡韦治疗6个月。全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,PCR法检测HBV DNA载量,流式细胞术检测T细胞γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平。结果慢性HBV感染者的外周血CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的IFN-γ水平与HBV DNA载量呈反比,IFN-γ/IL-4比率与HBV DNA载量和血清ALT水平均呈反比。此外,从免疫耐受期到非活动病毒携带期,T细胞的IFN-γ水平逐渐增加、IL-4水平逐渐降低,且与对照组相比,免疫耐受期患者的T细胞表达IL-4增加且IFN-γ减少,到非活动携带期其细胞因子表达逐渐恢复。慢性乙型肝炎患者经恩替卡韦抗病毒治疗后,血清HBV DNA载量和ALT水平均明显降低,同时其外周血CD8^+T细胞的IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4比率均明显增加。结论慢性HBV感染过程中,外周血T细胞的IFN-γ和IL-4发挥双向调节作用,与恩替卡韦抗病毒疗效相关。

补肾健脾方对ALT轻度升高的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者程序性死亡受体1/程序性死亡配体1表达的影响

目的研究补肾健脾方对ALT轻度异常的HBe Ag阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者程序性死亡受体(PD)1/程序性死亡配体(PD-L)1表达的影响。方法选取2010年9月1日-2013年12月31日在上海中医药大学附属曙光医院就诊的32例ALT轻度升高的HBe Ag阳性CHB患者。在明确临床疗效的基础上,分离外周血单个核细胞,流式细胞仪检测补肾健脾方治疗前后患者外周血T淋巴细胞上PD-1和树突状细胞(DC)上PD-L1的表达变化。计量资料组间比较采用独立样本t检验,计数资料组间比较采用χ2检验。结果与治疗前相比,治疗组患者外周血CD4+T细胞表达PD-1百分率明显降低(P<0.01),CD4+T细胞表达PD-1的平均荧光强度(MFI)显著下降(P<0.05);治疗后两组患者CD4+T细胞表达PD-1百分率和MFI比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。治疗组CD8+T细胞表达PD-1百分率和MFI与治疗前相比均明显降低(P值均<0.01);治疗后两组患者CD8+T细胞表达PD-1的MFI比较差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前相比,治疗组DC表达PD-L1的MFI水平降低(P<0.05),髓样树突状细胞(m DC)表达PD-L1的MFI亦明显降低(P<0.01);治疗后两组患者比较DC和m DC的PD-L1表达水平,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论补肾健脾方治疗HBe Ag阳性的CHB患者能够显著降低外周血CD4+T、CD8+T细胞的PD-1的表达水平,降低DC和m DC的PD-L1表达水平,与其临床疗效有一定关系。

NK细胞和NKT细胞在慢性乙型肝炎中的表型和功能特征

目的检测慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞的比例、NKG2D/NKG2A水平和γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。方法采集并分离CHB患者外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术检测NK、NKT细胞占PBMC的比例,NKG2D、NKG2A水平,经佛波酯(PMA)、布雷菲德菌素A(BFA)、离子霉素(ionomycin)处理后,流式细包术检测IFN-γ、TNF-α的水平,分析各指标与乙肝病毒载量和血清丙氨酸氨基转移酶的关系,采用独立样本t检验与Pearson相关性分析。结果与正常对照者相比,CHB患者外周血NK细胞和NKT细胞比例明显降低;NKG2A阳性的NK细胞和NKT细胞明显升高;经PMA、BFA、ionomycin刺激后,IFN-γ阳性的NK细胞和NKT细胞明显降低。结论 CHB患者NK、NKT细胞存在不同程度的减少、受体表达失调和细胞因子分泌功能下降等功能紊乱。

HBeAg阳性和阴性慢性乙型肝炎患者肝组织学与血清学关系的比较

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者(1×ULN≤ALT≤2×ULN)肝组织学与血清学的关系。方法对全国多中心516例CHB患者(1×ULN≤ALT≤2×ULN)行血清学及肝穿刺病理检查,依据血清HBeAg表达水平将患者分为HBeAg阳性组和HBeAg阴性组,分析两组肝组织病理学与血清学指标的相关性。结果 HBeAg阳性患者肝组织炎症分级和肝纤维化分期与血清HBsAg和HBeAg表达水平呈负相关(P<0.01),与血清透明质酸(HA)和α2-巨球蛋白水平呈正相关(P<0.01),与血清HBV DNA水平无明显相关性;HBeAg阴性患者肝组织炎症分级和肝纤维化分期与血清HBV DNA水平呈正相关(P<0.01),与HBsAg、HA和α2-巨球蛋白等无明显相关性。结论血清HBV DNA可做为HBeAg阴性CHB患者肝脏病变程度的有效预测指标,HB-sAg、HBeAg、HA和oα2-巨球蛋白均可做为HBeAg阳性CHB患者肝组织损伤的预测指标。

高月求教授补肾健脾法治疗慢性乙型肝炎的经验

中医药治疗一直是我国防治慢性乙型肝炎（CHB）的主要措施之一，其辨证论治的个体化与CHB极具个体化的免疫发病机制非常契合。高月求教授应用补肾健脾为主要治则的治疗方法，将CHB的免疫机制同中医病机、证候分布规律及辨证论治有机地结合起来，丰富和发展了CHB的治则治法。现从4个方面介绍高月求教授治疗CHB的见解与经验。

血府逐瘀汤对刀豆蛋白A诱导小鼠肝纤维化的干预作用

目的:观察血府逐瘀汤对刀豆蛋白A(Con A)诱导小鼠肝纤维化的干预作用。方法:Balb/c雄性小鼠40只,随机分为正常组(8只),模型组(16只)和治疗组(16只)。模型组和治疗组按照1.25mg/100g小鼠体重予以尾静脉注射Con A,正常组予注射相应剂量生理盐水,1次/周,共10周。治疗组于造模同时,予血府逐瘀汤药液1ml/100g小鼠体重灌胃,正常组及模型组则予以等量饮用水,1次/d。10周后,处理各组小鼠,留取血清、肝脾标本。全自动生化仪检测血清血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和白蛋白(Alb);HE和天狼星红染色观察肝组织炎症和胶原沉积;RT-PCR和Western Blot法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达。结果:模型组小鼠ALT和AST活性均较正常组明显升高(P<0.05);肝组织HE染色可见肝细胞坏死和大量炎性细胞浸润;天狼猩红染色可见大量胶原沉积和假小叶形成;肝组织α-SMA和TGF-β1较正常组显著升高(P<0.01)。与模型组相比,治疗组ALT、AST水平明显降低(P<0.05);肝脏炎症和胶原沉积明显改善;α-SMA和TGF-β1表达显著下调(P<0.01)。结论:血府逐瘀汤可通过减轻肝脏炎症和抑制肝星状细胞活化而改善Con A诱导的小鼠肝纤维化。

中药治疗非酒精性脂肪性肝病研究进展

非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一种最普遍的慢性肝脏疾病。现代医学对于本病尚无特异有效的治疗方法,中医药作为我国治疗疾病的常用手段,在治疗NAFLD方面运用的比较广泛。中医药凭借其独特的理论体系及临床疗效优势,势必在NAFLD这一复杂性代谢性疾病中发挥重要的作用。该文综述了NAFLD的发病机制及中药复方、中成药、单味中药和中药单体对NAFLD的治疗,为临床治疗NAFLD提供广阔的前景。

健脾清化方调节局灶节段硬化大鼠炎症信号通路的机制

目的从阻断炎症细胞生物功能角度,探讨健脾清化方对局灶节段硬化(FSGS)模型大鼠肾纤维化的影响。方法左侧肾切除加尾静脉注射阿霉素致大鼠肾脏FSGS,观察健脾清化方对模型大鼠白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子(ICAM-1)表达的影响。结果大鼠肾小管间质IL6表达,健脾清化方组、健脾方组、清化方组、尿毒清组明显低于模型组(P<0.01)。大鼠肾小管间质MCP-1表达,健脾清化方组、健脾方组、清化方组、尿毒清组较模型组明显下降(P<0.01);健脾清化方组较尿毒清组下降(P<0.05)。大鼠肾小管间质ICAM-1表达,与模型组相比,健脾清化方组、清化方组、尿毒清组明显下降(P<0.01),健脾方组较模型组下降(P<0.05);健脾清化方组较尿毒清组下降(P<0.05)。大鼠肾小管间质MCP-1、ICAM-1荧光强度,与模型组相比,健脾清化方组、健脾方组、清化方组、尿毒清组明显减弱(P<0.01),与尿毒清组比较,健脾清化方组、清化方组荧光强度明显减弱(P<0.01)。健脾清化方能显著降低IL6、MCP-1、ICAM-1表达,且对MCP-1、ICAM-1的效果优于尿毒清组。结论健脾清化方对FSGS模型大鼠肾脏的炎症损伤和肾纤维化有一定的改善作用,该机制可能与健脾清化方终止IL-6的信号通路有关。

补肾冲剂调控MAVS介导的Ⅰ型干扰素信号通路抗病毒作用机制

目的研究补肾冲剂对MAVS介导的I型干扰素信号通路的影响,探讨补肾冲剂的抗病毒作用机制。方法采用补肾冲剂药物血清干预HepG2.2.15细胞,ELISA法检测细胞培养上清中HBsAg、HBeAg水平,RT-PCR法检测RIG-I、MDA-5、LPG2、IFN-β、TNF-α的mRNA表达水平,Western-blot检测MAVS、IRF-3和p IRF-3的蛋白表达水平。结果与生理盐水组相比,补肾冲剂能够显著抑制HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg的分泌,上调RIG-I、MDA-5、IFN-β和TNF-αmRNA的表达,下调LPG2 mRNA的表达。RIG-I刺激剂(聚肌胞)预干预后,补肾冲剂能显著上调MAVS的表达,且能明显活化IRF-3。结论补肾冲剂能通过活化MAVS-IRF-3信号通路,诱导IFN-β和TNF-α的表达,从而发挥抗病毒作用。

山药化学成分与药理活性研究进展

山药为薯蓣科植物薯蓣(Dioscorea opposita Thunb.)的干燥根茎,具有补脾养胃、生津益肺、补肾涩精的功效。现代研究表明山药主要化学成分包括多糖、氨基酸、脂肪酸、山药素类化合物、尿囊素、微量元素、淀粉等。具有降血糖、降血脂、抗氧化、调节脾胃、抗肿瘤、免疫调节等药理作用。通过查阅近年来国内外山药的研究报道,综述山药在种属来源、真伪鉴别、化学成分及药理作用方面的研究进展,以期为其药效物质基础、质量标准及药理活性的深入研究提供参考。

清热解毒凉血方治疗慢加急性肝衰竭小鼠模型的效果及机制

目的探究清热解毒凉血方对慢加急性肝衰竭(ACLF)小鼠模型的作用机制。方法将36只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组(n=6)、中药组(n=6)、西药组(n=6)和模型组(n=18)。除正常组外,其他组均腹腔注射10%CCl4,3次/周,共8周,于最后一次给予LPS 0.5 mg/kg联合D-gal 400 mg/kg。模型组给予D-gal后于3 h、12 h、24 h分别处死小鼠,每次6只。中药组及西药组在小鼠腹腔注射10%CCl44周后,开始灌胃中药/西药,持续4周,予D-gal后3 h处死小鼠,同时处死正常组小鼠。检测血清ALT、AST以及炎症因子[粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、TNF、IFN、单核细胞趋化因子(MCP)1、IL];HE及天狼猩红染色观察肝组织病理变化;免疫荧光法观察F4/80、CD11b;免疫组化法观察髓过氧化物酶(MPO)的表达;Western Blot测定CD44、黏附分子(ICAM)1、高迁移率族蛋白(HMGB)1的表达情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果与正常组相比,模型组-3h ALT、AST水平明显升高(χ^2值分别为51.41、71、71.22,P值均<0.001);与模型组-3h相比,中药组小鼠血清中IL-17A升高明显(P<0.01),TNFα、GM-CSF、IL-10、IL-1β、MCP-1、IFNγ表达均降低(P值均<0.05)。与模型组相比,西药组小鼠血清中GM-CSF、IFNγ、IFNβ均降低(P值均<0.05)。HE染色提示与正常组相比,模型组小鼠肝细胞损伤严重,炎性细胞浸润明显,给予中药/西药后,小鼠肝脏病理示均有所改善。模型组-3 h中MPO表达量明显较正常组升高,模型组-12 h与模型组-24 h的MPO的表达量逐渐降低(P值均<0.05),但高于正常组;中药组MPO表达量与模型组-3 h相比降低(P<0.05)。模型组中F4/80、CD11b表达量与正常组相比逐渐升高;中药组F4/80、CD11b表达量与模型组-3 h相比升高。模型组中CD44、ICAM-1表达量与正常组相比均明显升高(P值均<0.05);中药组HMGB1、CD44、ICAM-1表达量与模型组-3h相比均降低(P值均<0.05)。结论清热解毒凉血方能够降低ACLF小鼠模型血清中ALT、AST,改善肝损伤,同时升高IL-17A,降低TNFα、GM-CSF、IL-10、IL-1β、MCP-1、IFNγ的表达,另外,清热解毒凉血方可降低小鼠肝组织中MPO、CD44、ICAM-1、HMGB1的表达,升高F4/80、CD11b的表达,表明清热解毒凉血方可能通过调节中性粒细胞与Kupffer细胞改善肝损伤。

柔肝方通过抑制纤维化蛋白抗肝纤维化的机制研究

目的:柔肝方是上海市名中医王灵台教授治疗肝纤维化的临床有效验方,本研究旨在探讨柔肝方通过抑制纤维化蛋白(FBRS)抗肝纤维化的分子机制。方法:质谱法鉴定柔肝方的化学成分及其入血成分。BALB/c小鼠随机分对照组、模型组、柔肝方高剂量组、柔肝方中剂量组和柔肝方低剂量组。通过尾静脉注射ConA(12.5 mg/kg),每周1次,共10周,建立肝纤维化小鼠模型。体外应用重组FBRS蛋白刺激人肝星状细胞系(LX2细胞),并用柔肝方大鼠药物血清干预。肝组织HE染色、天狼猩红染色和Masson染色。生化法检测血清ALT、AST、肝纤四项(LN、HA、PⅢNP、Col-Ⅳ)表达水平。Western blot法检测肝组织α-SMA,Western blot法和ELISA法检测Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、TGF-β1、FBRS的表达水平。结果:各剂量柔肝方均可减少ConA肝纤维化模型小鼠肝脏的胶原沉积,且呈剂量依赖性抑制;柔肝方可明显降低模型小鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Col-Ⅰ和FBRS的表达水平;体外应用重组FBRS蛋白可上调LX2细胞的α-SMA、TGF-β1、Col-Ⅰ和FBRS的表达,柔肝方药物血清可抑制FBRS介导的LX2细胞的活化及胶原表达。质谱分析鉴定淫羊藿苷、丹酚酸B、绿原酸是柔肝方中含量较高的活性成分。结论:柔肝方通过下调肝星状细胞FBRS的表达抑制其活化及胶原沉积,发挥抗肝纤维化作用。