肝硬化的病证结合诊疗若干热点问题述评

肝硬化属于中医“肝积”范畴,由本病病变发展所致的病死率较高,病证结合是我国当今中医临床诊疗的主要策略。抗病毒药物及微创技术的快速发展与中医药抗肝纤维化中成药的广泛应用在降低我国肝硬化的发病率和病死率方面彰显出明显特色与优势。主要阐述病证结合策略在肝硬化及其并发症诊治中应用的若干临床议题,包括扶正化瘀法抗肝纤维化/肝硬化,胃镜结合补虚化瘀清热法治疗肝硬化所致上消化道出血,中医辨证诊疗肝硬化所致难治性腹水,滋肾养肝法促进肝细胞恢复代偿等。已有临床疗效的论据揭示了肝硬化的核心病机“气虚血瘀”以及“阴虚瘀热”病机的演变规律,但还需要更多临床研究数据的支撑。认为推进建立病证结合治疗肝硬化及其并发症的临床方案,需要积累更规范的循证依据。

旋覆花汤对高脂高果糖高胆固醇饮食诱导非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型的影响

目的探讨旋覆花汤对高脂高果糖高胆固醇饮食诱导小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的干预作用。方法32只雄性C57/BL6J小鼠随机分为正常组、模型组、旋覆花汤组和奥贝胆酸组,每组8只。高脂高果糖高胆固醇饮食造模第24周开始,各组给予相应药物干预,旋覆花汤组给药剂量为14.19 g/kg灌胃,奥贝胆酸组给药剂量为10 mg/kg灌胃,灌胃体积均为20 mL/kg,每天给药1次,连续6周。HE染色、油红O染色、天狼星红染色及Masson染色观察肝组织病理学变化、脂质沉积及胶原沉积;试剂盒检测血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C和葡萄糖水平,肝组织TG及羟脯氨酸(Hyp)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应检测肝组织脂质代谢相关、炎症相关以及纤维化相关基因的表达;免疫组化染色观察肝组织F4/80和α-SMA阳性表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与正常组相比,模型组小鼠体质量、肝湿重、血清AST、ALT、TC、TG、LDL-C和葡萄糖水平均显著增高(P值均<0.01);HE染色显示,模型组小鼠肝组织可见肝细胞脂肪变,大量脂肪空泡,肝细胞气球样变以及炎症细胞浸润,且非酒精性脂肪性肝病活动度评分(NAS)较正常组显著增加(P<0.01);油红O染色显示,模型组小鼠肝细胞内有大量红色脂滴沉积,大小不一,油红O染色面积百分比和肝脏TG含量较正常组均显著增加(P值均<0.01);天狼星红染色和Masson染色显示,模型组小鼠窦周、中央静脉以及汇管区胶原纤维增生明显,且肝组织Hyp含量较正常组显著增加(P<0.05)。与模型组比较,旋覆花汤组小鼠血清AST、ALT、TC、TG、LDL-C及葡萄糖水平均明显降低(P值均<0.05);肝组织脂肪变、炎症浸润、脂滴沉积以及胶原纤维增生明显改善,且NAS、油红O染色面积百分比、肝脏TG含量及Hyp含量均显著降低(P值均<0.05)。与正常组相比,模型组小鼠肝组织脂质代谢相关基因SREBP-1c、FASN、SCD1、PPARγ和CD36,炎症相关基因F4/80、TNFα、CCL2和CD11b,以及纤维化相关基因α-SMA mRNA表达水平均显著增高(P值均<0.05);免疫组化染色结果显示,F4/80和α-SMA阳性表达显著增加(P值均<0.01)。与模型组比较,旋覆花汤组小鼠肝组织SREBP-1c、FASN、SCD1、PPARγ、CD36、F4/80、TNFα、CCL2、CD11b及α-SMA mRNA表达均显著降低(P值均<0.05),免疫组化染色F4/80和α-SMA阳性表达明显减少(P值均<0.01)。结论旋覆花汤对高脂高果糖高胆固醇诱导的小鼠NASH具有良好的干预作用,其可显著抑制肝脏脂质沉积、炎症反应及肝纤维化。

肝硬化门静脉高压症中医证候病机特点及治疗进展

肝硬化门静脉高压症及食管胃静脉曲张破裂出血是临床有待解决的问题。目前对该病的干预措施包括一级预防(预防曲张静脉的进展和破裂出血)、急性活动性出血的治疗以及二级预防(首次曲张静脉破裂出血后预防再出血)。文章对肝硬化门静脉高压症的中医病机及证候特点,中医药干预改善血流动力学、改善食管胃静脉曲张、防治食管胃静脉曲张破裂出血、预防再出血等作一归纳整理,以期推动临床研究发展。

一贯煎对急性肝窦阻塞综合征大鼠模型的干预作用及其部分效应机制

目的观察一贯煎对野百合碱诱导的急性肝窦阻塞综合征(hepatic sinusoidal obstruction syndrome,HSOS)大鼠模型的干预作用并探析其部分作用机制。方法24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组及一贯煎组,每组8只。采用野百合碱90 mg/kg灌胃,制备大鼠HSOS模型。一贯煎组大鼠在造模后6小时及30小时予以浓度为1.139 g/kg一贯煎灌胃,造模48小时后处死取材。检测血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶活性,采用扫描电镜及苏木素—伊红染色观察肝组织病理变化,微板法检测肝组织匀浆谷胱甘肽S转移酶、总谷胱甘肽、丙二醛含量,TUNEL法检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测肝组织肿瘤坏死因子α、血红加氧酶1、炎症小体NLRP3及白介素1β的mRNA表达,免疫组化法检测肝组织巨噬细胞标志物F4/80表达,Western Blot法检测肝组织肿瘤坏死因子α、细胞凋亡相关B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X,Bax)的蛋白表达。结果(1)与正常对照组相比,模型组血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性显著升高(P<0.01),苏木素—伊红染色可见大量肝细胞坏死、炎性细胞浸润及红细胞淤积,电镜观察可见肝血窦扩张,窦内皮窗孔扩大,“筛状”结构消失,甚至脱落,Disse空间暴露。(2)模型组肝组织丙二醛含量显著增高(P<0.05),巨噬细胞标志物F4/80及肿瘤坏死因子α的蛋白表达显著增加(P<0.01),肿瘤坏死因子α、血红加氧酶-1、炎症小体及白介素1β的mRNA表达显著增加(P<0.01),而一贯煎用药可降低肝组织丙二醛含量(P<0.05),下调F4/80及肿瘤坏死因子α蛋白表达(P<0.01)及肿瘤坏死因子α、血红加氧酶1(P<0.001)、炎症小体及白介素1β(P<0.05)的mRNA表达。(3)TUNEL检测模型组肝组织凋亡细胞显著增加,Bcl2/Bax比值显著下降(P<0.05)。结论一贯煎可有效改善野百合碱诱导的急性肝窦阻塞综合征,可显著降低模型大鼠血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶的活性,改善肝组织坏死及肝窦内皮损伤,并减少肝组织细胞凋亡。其作用机制可能与抗过氧化、抗炎性损伤、抑制肝细胞凋亡有关。

一贯煎的处方考证和临床应用研究概况

通过系统梳理一贯煎的中医古籍及现代临床文献,对其出处、组成、基原、炮制要求、剂量、制法用法、功能主治、方义衍变等历史沿革进行考证,明晰一贯煎的历史沿革和临床应用研究概况。在充分考虑经典名方制剂开发实际需求及现代临床实践使用习惯的基础上,提出可行的开发建议。清朝钱敏捷《医方絜度》所载一贯煎由6味药物组成,其组方药物基原及药用部位选用与2020年版《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)收载品种保持一致,所选药物皆为生品,并参照2020年版《中国药典》收载方法炮制。该方药物参考剂量以《医方絜度》所载为准,按照一钱相当于今3.73 g折算,北沙参、麦冬、当归各5.60 g,枸杞子、生地黄各11.19 g,川楝子7.46 g;水煎服;古医籍记载一贯煎功效为滋阴疏肝,主治肝肾阴虚,肝气郁滞证,证见胸脘胁痛,吞酸吐苦,咽干口燥,舌红少津,脉细弱或虚弦及疝气瘕聚。本研究明确了一贯煎的出处与组成、药物基原、药物炮制、剂量用法、功能主治与方义衍变及现代临床应用,可为该经典名方的开发与应用提供文献参考依据。

UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS法同时测定大黄-桃仁药对中16种成分及其溶出规律探究

目的建立UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS法同时测定大黄-桃仁药对中16种成分的含量,并探讨不同配比药对中其溶出规律。方法分析采用BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相0.1%甲酸-乙腈,梯度洗脱。质谱采用电喷雾离子源,一级负离子全扫模式。测定单煎液、大黄-桃仁药对不同配比合煎液中,以及单药组、药对组温浸不同时间16种成分的含量。结果16种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9994),加样回收率95.39%~104.90%,RSD≤4.14%,单煎液和不同配比大黄桃仁药对煎液中16种成分的溶出量差异明显。大黄总蒽醌苷类和桃仁氰苷类成分的含量随着大黄占比减少具有先增加后降低的趋势。在温浸试验中,除没食子酸、番泻苷B、番泻苷A、大黄素外,其他12种成分含量在单药组与药对组的组间差异显著。结论该方法可用于快速、准确测定大黄-桃仁药对中16种成分的含量。大黄-桃仁药对中的糖苷及相对应苷元含量受到大黄占比的影响。

基于UHPLC⁃Q⁃Exactive Orbitrap HRMS技术分析黄芪汤颗粒的化学成分与小鼠口服后的入血成分

目的运用超高效液相串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS)技术,分析鉴定黄芪汤颗粒的化学成分及小鼠灌胃黄芪汤颗粒后的主要入血成分。方法色谱分离采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱。质谱采用电喷雾电离正离子模式(ESI+)和电喷雾电离负离子模式(ESI-)交替扫描,并自动触发二级质谱扫描功能(Full MS/dd-MS2)采集质谱数据。经Xcalibur 3.0软件获取色谱保留时间以及母离子和碎片离子信息,定性鉴别黄芪汤颗粒的化学成分及小鼠灌胃黄芪汤颗粒后的入血成分及可能的代谢途径。结果综合保留时间、准确分子量、二级碎片信息、对照品比对、文献参考等色谱质谱检测信息,从黄芪汤颗粒中共鉴定出167种化学成分,从小鼠灌胃黄芪汤颗粒后的血清中共检测到甘草素、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷等60种原型成分和43种代谢产物。结论完成了黄芪汤颗粒化学成分及主要入血成分快速鉴定,可为黄芪汤颗粒效应物质解析、质量标准研究及作用机制探讨等提供参考。

下瘀血汤抗肝纤维化作用及其机制研究进展

肝纤维化是机体对多种慢性损伤的一种复杂修复应答,是诸多慢性肝病共有的病理变化,细胞外基质过度沉积和肝星状细胞活化被认为是其主要的发病机制,抗肝纤维化治疗已成为当前慢性肝脏疾病研究的焦点之一。下瘀血汤出自《金匮要略》,由大黄、桃仁、土鳖虫3味中药组成,现代中医临床用其治疗肝纤维化与肝硬化,取得了较好的临床疗效。本文拟对近年来下瘀血汤抗肝纤维化作用及其机制的研究进行总结,发现该经典名方通过抑制肝星状细胞活化和诱导活化的肝星状细胞凋亡、调控巨噬细胞功能、抑制肝窦毛细血管化及抗脂质过氧化等途径发挥抗肝纤维化作用,对该方在肝纤维化方面的新药研发及临床应用具有参考意义。

下瘀血汤及其组分对蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎的干预作用

目的:探讨下瘀血汤及其组分对蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的治疗作用及潜在机制。方法:40只C57/BL6J雄性小鼠随机分为对照组、模型组、下瘀血汤全方组(3.03 g/kg)、下瘀血汤组分组(乙酸乙酯部位萃取液,0.65 g/kg)及吡格列酮组(10 mg/kg),每组8只。对照组小鼠给予蛋氨酸-胆碱充分(MCS)饲料,其他组小鼠给予MCD饲料诱导NASH模型,连续6周。造模第4周起,各药物组灌胃给予相应药液,连续3周。末次给药后,收集肝组织,分离血清。试剂盒检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平以及肝组织三酰甘油(TG)含量。HE染色和油红O染色分别观察肝组织形态学变化及脂滴沉积。PCR检测肝组织脂质代谢[二酰甘油酰基转移酶(Dgat)1、Dgat2、脂滴包被蛋白2(PLIN2)、诱导细胞凋亡的DFF45样效应因子C(CIDEC)、白细胞分化抗原簇36(CD36)、脂肪酸转运蛋白3(FATP3)、脂酰辅酶A氧化酶(ACO)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)]、炎症[F4/80、CD11b、CD11c、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)]、血管新生[血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、血管性血友病因子(vWF)、血小板/内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)、CD34、内皮糖蛋白(ENG/CD105)、E-选择素(E-sele)、血管细胞黏附分子(VCAM)]相关因子的mRNA表达水平。结果:(1)与对照组相比,模型组小鼠血清ALT、AST水平及肝脏TG含量显著增加(P<0.05,P<0.01);HE染色发现,模型组小鼠肝组织可见肝细胞脂肪变,大量脂肪空泡,肝细胞气球样变以及炎症细胞浸润,且NAS积分>4分;油红O染色发现,模型组小鼠肝细胞内有大量红色脂滴沉积。与模型组相比,下瘀血汤组分组小鼠血清ALT水平显著下降(P<0.05),下瘀血汤全方组及组分组小鼠血清AST水平及肝组织TG含量均显著降低(P<0.05,P<0.01),两组肝组织脂肪变、炎症浸润以及脂滴沉积明显改善,且NAS积分和油红O染色阳性表达面积占比均显著降低(P<0.01)。组分组ALT和AST水平、全方组AST水平较吡格列酮组明显降低(P<0.05,P<0.01)。(2)与对照组相比,模型组小鼠肝组织脂质代谢相关基因Dgat1、PLIN2、CIDEC、CD36、FATP3的mRNA表达水平明显升高(P<0.01),而ACO与LCAD的mRNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01);炎症相关基因F4/80、CD11b、CD11c、TNF-α及TGF-β的mRNA表达,以及血管新生相关基因VEGF、VEGFR2、vWF、CD31、CD34、E-sele、VCAM的mRNA表达均显著上调(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,脂质代谢方面,下瘀血汤全方组与组分组Dgat1、Dgat2、PLIN2、CIDEC、CD36及FATP3的mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01),LCAD的mRNA表达显著上调(P<0.01);下瘀血汤全方组ACO mRNA表达亦明显升高(P<0.01);炎症方面,下瘀血汤全方组及组分组F4/80、CD11b、CD11c及TNF-α的mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01),组分组TGF-β mRNA表达亦明显下调(P<0.01);血管新生方面,下瘀血汤全方组及组分组VEGF、VEGFR2、vWF、CD31、CD34、E-sele、VCAM、CD105的mRNA表达均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:下瘀血汤及其乙酸乙酯部位组分可有效治疗MCD诱导的小鼠NASH,其作用机制可能与改善肝脏脂质代谢、炎症反应及血管新生有关。

黄芪总苷上调miRNA-744表达抑制肝星状细胞活化的效应机制

目的:探析黄芪总苷抑制肝星状细胞活化的作用机制。方法:(1)以转化生长因子β1(TGF-β1,2.5 ng/ml)诱导人肝星状细胞株LX-2细胞活化,并给予不同浓度黄芪总苷(1.25、2.5、5、10、20、30、40μg/ml)。药物作用24 h后,Edu掺入法检测细胞增殖,筛选适合的药物浓度。(2)将LX-2细胞分为对照组、TGF-β1(2.5 ng/ml)组、TGF-β1+黄芪总苷(20μg/ml)组、TGF-β1+SB431542(10μmol/L)组。各组给予相应干预24 h后,PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、TGF-β1、miRNA-744基因表达;Western blot检测ColⅠ、TGF-β受体Ⅰ(TβRⅠ)、Smad2、p-Smad2、Smad7的蛋白表达;免疫荧光检测纤维状肌动蛋白(F-actin)表达。(3)取细胞分别加入miRNA-744激动剂(50 nmol/L)、miRNA-744拮抗剂(100 nmol/L)或阴性对照试剂,构建相应的转染细胞。在3种体系的转染细胞,将细胞分为对照组、TGF-β1(2.5 ng/ml)组、TGF-β1+黄芪总苷(20μg/ml)组、黄芪总苷(20μg/ml)组。各组给予相应干预24 h后,Edu掺入法检测细胞增殖,免疫荧光检测F-actin表达。结果:(1)20、30和40μg/ml黄芪总苷可显著抑制TGF-β1诱导的LX-2细胞增殖,选用20μg/ml的剂量进行后续实验。(2)TGF-β1组细胞F-actin、α-SMA、ColⅠ、TGF-β1和TβRⅠ的表达以及p-Smad2/Smad2蛋白表达比值较对照组显著升高(P<0.05,P<0.01);而与TGF-β1组相比,TGF-β1+黄芪总苷组细胞F-actin、α-SMA、ColⅠ、TGF-β1和TβRⅠ的表达以及p-Smad2/Smad2蛋白表达比值显著降低(P<0.05,P<0.01)。TGF-β1组细胞Smad7和miRNA-744的表达较对照组显著降低(P<0.05,P<0.01),而TGF-β1+黄芪总苷组细胞Smad7和miRNA-744的表达较TGF-β1组显著升高(P<0.01)。(3)与阴性对照组相比,miRNA-744拮抗剂作用可显著升高LX-2细胞的Edu阳性染色细胞占比和F-actin表达(P<0.05),且对TGF-β1诱导的LX-2细胞具有相似效应。在miRNA-744拮抗剂构建的转染细胞,给予黄芪总苷协同干预后,Edu阳性染色细胞占比和F-actin表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪总苷通过上调miRNA-744表达,抑制TGF-β/Smad信号通路,进而抑制肝星状细胞活化。

UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS分析黄连解毒汤的化学成分及大鼠组织分布

目的运用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS技术实现高效、快速、精准分析鉴定黄连解毒汤的化学成分及大鼠ig后其主要成分在不同组织中的分布。方法色谱分离采用Acquity UPLC BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相梯度洗脱,通过HRMS的正、负离子监测模式,全扫描及自动触发二级质谱扫描功能(Full MS/dd-MS^(2)),对黄连解毒汤中的化学成分进行快速分析及鉴定。在此基础上,对大鼠口服黄连解毒汤后血及组织中的移行成分进行鉴定。结果通过化合物的一级、二级质谱信息,结合对照品比对确认与相关文献报道分析,从黄连解毒汤中共鉴定出110种化学成分,包括36种黄酮类、28种环烯醚萜、15种生物碱、15种有机酸、5种木脂素以及11种其他类化合物。大鼠ig黄连解毒汤后,分别从血清、心、肝、脾、肺、肾、脑、睾丸中检测到40、50、55、65、61、62、32、46种原型成分。根据各原型成分在原方、血清及各组织中的均一化峰面积,可知栀子新苷、黄连碱、小檗碱、巴马汀、药根碱、黄柏碱等成分在肝、肾等组织中有较大的暴露量。结论借助UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS技术系统、准确、快速地实现了黄连解毒汤化学成分鉴定,并揭示了黄连解毒汤大鼠ig给药后主要成分的组织分布特征,为后续黄连解毒汤潜在药效物质基础研究及临床应用提供参考。

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS分析桃仁化学成分及快速测定苦杏仁苷和野黑樱苷的含量

目的:采用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS法对桃仁化学成分进行分析鉴定,并建立快速测定桃仁中苦杏仁苷和野黑樱苷含量的方法。方法:采用ACQUITY UPLC HSS T3(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,以0.1%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱;采用正负离子Full MS/dd-MS^(2)模式,通过化合物的一级、二级质谱信息,结合对照品比对确认,进行桃仁主要化学成分的快速、精准识别。采用负离子Full MS-SIM模式,建立快速测定桃仁中苦杏仁苷和野黑樱苷含量的UHPLC-Q-Orbitrap HRMS方法,并测定10批次燀桃仁中苦杏仁苷和野黑樱苷的含量。结果:共鉴定出桃仁中47种化学成分,包括14种氨基酸类成分、12种核苷酸类成分、12种糖苷类成分、3种氰苷类成分以及6种其他成分。成功建立一种4 min完成桃仁中苦杏仁苷和野黑樱苷含量测定的UHPLC-Q-Orbitrap HRMS方法,2种成分在3.28~2000.00ng·mL^(-1)范围内均线性关系良好(r≥0.9994);精密度、重复性及稳定性良好(RSD≤9.57%);加样回收率在104.01%~104.64%,RSD≤4.52%。10批次样品中苦杏仁苷含量范围为15.62~46.92 mg·g^(-1)、野黑樱苷含量范围为0.18~1.66 mg·g^(-1)。结论:运用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS方法实现了桃仁化学成分的快速、准确分析。建立的定量方法分析时间短、灵敏度高、准确性好,方法学考察结果均符合含量测定的要求,可用于桃仁中苦杏仁苷和野黑樱苷含量的快速测定,可为其质量评价提供部分科学参考。

UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS法同时测定当归配方颗粒中12种成分的含量

目的:建立超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS)法同时测定当归配方颗粒中12种成分的含量。方法:采用ACQUITY UPLC^(■)BEH C_(18)(2.1 mm×100 mm, 1.7μm)色谱柱;以甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,进行梯度洗脱;流速为0.3 mL·min^(-1);柱温为45℃;进样量为2μL。质谱采用电喷雾离子源,正负离子全扫描(Full MS/SIM)模式。对当归配方颗粒中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、丁烯基苯酞、洋川芎内酯A、正丁基苯酞、藁本内酯和欧当归内酯A共12种成分进行含量测定,并对含量测定结果进行化学计量学分析。结果:12种成分在各自范围内线性关系良好(r2≥0.997 9),精密度、重复性及稳定性良好(RSD≤9.22%);加样回收率在88.01%~108.77%,RSD均小于10%。聚类分析将18批当归配方颗粒聚为4类,主成分分析共筛选出6个差异标志物。结论:该方法可快速、灵敏测定当归配方颗粒中12种成分的含量,为当归配方颗粒质量评价提供部分新的科学依据和参考。

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS分析覆盆子不同部位的化学成分及其9种成分含量的快速测定

目的采用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS法对覆盆子Rubus chingii不同部位(小核果和花托)化学成分进行分析鉴定,并建立快速测定覆盆子中9种成分含量的方法。方法采用Acquity UPLC HSS T_(3)(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,以0.1%甲酸水与乙腈为流动相,梯度洗脱;覆盆子化学成分鉴定时采用正负离子Full MS/dd-MS^(2)模式,通过化合物的一级、二级质谱信息,结合对照品比对确认,进行覆盆子不同部位主要化学成分的快速、精准识别。采用ACQUITY BEH C_(18)(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱在负离子Full MS/SIM模式,建立快速测定覆盆子不同部位中9种成分(没食子酸、芦丁、鞣花酸、金丝桃苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、椴树苷、槲皮素和山柰酚)含量的UHPLC-Q-Exactive OrbitrapHRMS方法,并测定其含量。结果从覆盆子小核果和花托中共鉴定122种化学成分,包括黄酮类66种、有机酸类28种、萜类24种、其他类4种。成功建立一种6 min完成覆盆子中9种成分含量测定的方法,各成分在其线性范围内线性关系良好;精密度、重复性及稳定性良好(RSD≤6.30%);加样回收率在99.45%~105.30%(RSD≤4.43%),并发现小核果中芦丁的含量显著高于花托;而花托中的鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷和椴树苷的含量显著高于小核果。结论覆盆子小核果和花托部位的化学成分存在差异性,运用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS建立的定量方法分析时间短、灵敏度高、准确性好,方法学考察结果均符合含量测定的要求,可用于覆盆子中9种成分的快速测定。