重组HBcAg激活p38MAPK信号通路增加髓源性树突状细胞IL-15的分泌

目的探讨重组人乙型肝炎病毒核心抗原(rhHBcAg)诱导髓源性树突状细胞(mDC)分泌白细胞介素15(IL-15)的机制。方法采用人单核细胞磁珠负分选试剂盒分选外周血单核细胞,采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导分化为mDC,10μg/m L rhHBcAg刺激mDC 1~6 d;分别用25μmol/L磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂LY294002、1μmol/L p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂SB203580、100 nmol/L c-Jun N末端激酶(JNK)信号通路抑制剂SP600125和150 nmol/L胞外信号调节激酶(ERK)信号通路抑制剂U0126预处理1 h,再给予10μg/m L rhHBcAg刺激48 h。之后收集细胞和细胞培养上清,实时定量PCR检测IL-15 mRNA水平,ELISA检测IL-15蛋白水平,Western blot法检测PI3K/Akt和MAPK信号通路分子磷酸化水平。结果与rhHBcAg未刺激组比较,rhHBcAg刺激组IL-15 mRNA和蛋白水平显著升高;与rhHBcAg刺激组比较,p38抑制剂预处理组IL-15水平明显降低,但PI3K/Akt、JNK和ERK抑制剂预处理组IL-15水平未见显著性改变。结论 rhHBcAg通过p38MAPK信号通路上调外周血mDC IL-15的分泌。

慢性HBV感染者血清IL-15和外周血iNKT细胞水平变化及相关性研究

目的探讨慢性乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者血清IL-15和外周血恒定自然杀伤T(invariant nature killer T,i NKT)细胞水平的变化。方法收集54例慢性HBV感染者和15名健康者外周血,分离血清和外周血单个核细胞(PBMC);ELISA法检测血清中IL-15水平;流式细胞术检测i NKT细胞占T细胞的比例,PMA、BFA和ionomycin处理PBMC后,流式细胞术检测i NKT分泌的IFN-γ和TNF-α水平,并利用Pearson法进行相关性分析。结果与正常对照者相比,免疫清除期患者血清中IL-15水平明显升高(P<0.05),免疫耐受期患者高于正常对照者,低于免疫清除组,差异无统计学意义(P>0.05);免疫清除期和免疫耐受期患者血清ALT水平和HBV DNA载量与IL-15水平无明显相关性(P>0.05)。免疫清除期患者外周血i NKT细胞比例显著降低,免疫耐受期患者略升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。免疫耐受期和清除期患者外周血i NKT细胞分泌IFN-γ和TNF-α的细胞比例略有升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。免疫耐受期和免疫清除期患者i NKT细胞分泌IFN-γ水平与IL-15水平呈正相关;免疫耐受期和免疫清除期患者i NKT细胞分泌TNF-α水平与IL-15水平无相关性(P>0.05)。结论慢性HBV感染者血清中IL-15水平升高,且外周血i NKT细胞数量减少,且不同感染状态患者血清IL-15水平和外周血i NKT细胞数量呈动态变化。

基于中医辅助诊疗仪的慢性乙型肝炎患者中医证型分布及临床诊断特征研究

目的观察慢性乙型肝炎患者中医证型的分布特点及临床诊断特征。方法纳入124例慢性乙型肝炎患者,应用中医辅助诊疗仪采集面色、舌脉和脉象信息,参照中医诊断标准辨证分型。检测临床主要诊断指标(生化指标、病毒学指标和病理分级)并分析其与中医证型的关系。结果 124例慢性乙型肝炎患者中,湿热中阻型占比最高(32.3%),其余依次为肝郁脾虚型(30.6%)、脾肾阳虚型(16.9%)、瘀血阻络型(13.7%)、肝肾阴虚型(6.5%)。不同中医证型间ALT、HBsAg、Fibroscan硬度值和Metavir分级水平具有显著性差异(P<0.05)。湿热中阻证型患者的ALT和HBsAg水平明显高于其他证型(P<0.05,P<0.01),血瘀阻络证型患者的Fibroscan硬度值明显高于其他证型(P<0.01),且Metavir分级以F4期为主。结论慢性乙型肝炎患者的中医证型以湿热中阻、肝郁脾虚为主,不同证型的ALT、HBsAg和病理分级水平存在一定的差异。

慢性乙型肝炎患者外周血纤维化蛋白表达水平与肝纤维化的相关性分析

目的研究慢性乙型肝炎患者外周血纤维化蛋白(FBRS)的表达水平与肝纤维化的相关性。方法收集52例慢性乙型肝炎患者,全部进行肝脏穿刺活检,将肝穿刺标本肝组织胶原纤维采用Masson三重染色和常规病理HE染色,判定肝脏纤维化分期和炎症活动度分级;检测患者外周血的ALT、AST、TBil、白蛋白(Alb)、HBV DNA载量;分离患者外周血单个核细胞,提取RNA,Real-time PCR法检测FBRS的表达水平;分析FBRS表达水平与肝组织病理分级和炎症活动度等指标的相关性。结果按照肝组织纤维化程度(S)分组,外周血单个核细胞FBRS mRNA水平从S0至S4随着肝纤维化程度的加重表达水平增加,且均比前一期明显升高(P<0.01),S与FBRS mRNA水平呈正相关(P<0.05);按照肝脏炎症活动度(G)分组,随着炎症活动度的加重,FBRS mRNA表达水平有增高的趋势,G与FBRS mRNA水平呈正相关(P<0.05),G2与G1比较差异有明显的统计学意义(P<0.01),G3与G2,G4与G3比较,虽然有升高的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);ALT与FBRS mRNA表达水平呈正相关,Alb与FBRS mR-NA表达水平呈负相关(P<0.05)。结论慢性乙型肝炎外周血FBRS的表达水平与肝组织纤维化程度呈正相关。

“肝藏魂”理论与慢性乙型肝炎伴失眠症状患者的相关性

目的:探讨"肝藏魂"理论与慢性乙型肝炎(CHB)伴失眠症状患者的相关性。方法:对CHB伴失眠症状患者和失眠症患者(各100例)进行中医辨证分型,计算匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)和中医证候积分并比较两组患者PSQI积分差异,研究不同证型CHB伴失眠症状患者的中医证候积分和PSQI积分的相关性。结果:CHB伴失眠症状患者的睡眠质量、入睡时间、睡眠时间、睡眠效率、睡眠障碍积分和PSQI总积分明显高于国内常模和失眠症患者(P<0.01,P<0.05),催眠药物积分高于国内常模(P<0.01)。CHB伴失眠症状患者以肝郁脾虚证和肝肾阴虚证为主,失眠症患者以肝郁化火证和阴虚火旺证为主,且CHB伴失眠症状患者的两个主要证型的PSQI总积分与中医证候积分呈正相关(P<0.01)。结论:与失眠症患者比较,CHB伴失眠症状患者的失眠症状尤为明显;两组患者失眠症状的病机均与"肝藏魂"功能有关。