电穿孔法介导siRNA高效转染小鼠原代软骨细胞

目的建立小鼠原代软骨细胞高效电转si RNA的方法。方法常规分离得到的小鼠原代软骨细胞继续用链丝菌蛋白酶消化3h,然后应用高效电转缓冲液和优化的电转参数转染p CMV-EGFP表达质粒或si RNA,用台盼蓝检测细胞存活率;转染后48h分析转染效率和si RNA靶分子的m RNA和蛋白表达水平。结果电穿孔后原代软骨细胞的存活率>80%,质粒的转染效率达到37.3%±5.2%;si RNA靶分子的m RNA和蛋白表达水平分别下调了75%和66%。结论成功建立了通过电穿孔介导si RNA转染小鼠原代软骨细胞的方法,达到了很好的基因沉默效果且保持了较高的细胞存活率。