SIN-1产生ONOO^-及其被抗氧化剂清除的化学发光研究

采用3-morpholino-sydnonimine(SIN-1)作为过氧亚硝基(ONOO^-)的发生器.以鲁米诺作为光的扩增剂,建立一个检测ONOO^-及筛选清除剂的发光体系。在探索pH、温度、SIN-1浓度对ONOO^-发光强度影响的基础上,确定了ONOO^-—鲁米诺化学发光体系,测定了水溶性维生素E(Trolox)、茶多酚、槲皮素对ONOO^-的清除作用。建成SIN-1为0.30mg/mL、鲁米诺为1×10^(-4)mol·L^(-1)、pH7.4、温度为30℃的发光体系,测得3种清除剂皆有清除ONOO^-的作用,清除效果槲皮素>茶多酚>Trolox。SIN-1—鲁米诺化学发光体系测定ONOO^-的产生和清除是一个快速、简便、灵敏且较稳定的新技术。

应用鲁米诺化学发光法测定脂质过氧化

建立了一个测定脂质过氧化(Lipid peroxidation,LPO)的化学发光体系,测试某些抗氧化剂清除脂自由基的活性。取含有不饱和脂肪酸的脂质加入到测量管中,再加入鲁米诺及双重蒸馏水,放入预恒温箱中37℃预温育0.5h,取出并加入启动剂AAPH{2,2’-azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride},立即放入预先温度设至38—39℃的生化发光测量仪中,用T-2程序测定每6s钟的脉冲数(CP6s),连续测定,观察化学发光(chemiluminescence,CL)的动力学变化和是否产生脂质过氧化,随后加入各类抗氧化剂,根据实际需要,选其某一次的CL强度作为评判指标。建立了一个应用鲁米诺化学发光法测定脂质过氧化的体系并对比了多种抗氧化剂的活性。结果发现,Vit.C、茶多酚(EGCG)、还原型谷胱廿肽(GSH)皆有抑制CL,即抗脂质过氧化的作用。该方法是一种快速、灵敏、简便的测定脂质过氧化及筛选抗氧化剂的新方法。