中老年女性家务劳动与恶性肿瘤关系的横断面研究

目的:探讨上海市区中老年妇女的家务劳动与恶性肿瘤的关系。方法:对上海市女性健康队列基线资料中共74 942名中老年妇女的家务劳动进行了简单描述,并对家务劳动与恶性肿瘤的关系进行了logistic回归分析。结果:研究对象平均每周花费14h进行家务劳动,其中68.3%的对象表示担任家庭中大部分的家务劳动。家务劳动的活动量达到全部非职业性体力活动总量的1/4。家务劳动活动量与乳腺癌、直肠癌、卵巢癌和肺癌的患病率均呈负相关,OR分别为0.79(95% CI:0.73,0.87),0.53(95%CI:0.42,0.70),0.71(95%CI:0.55,0.95)和0.52(95%CI:0.36,0.73),根据活动量分层后显示有明显的剂量反应关系(趋势检验P≤0.05)。家务劳动与结肠癌和子宫内膜癌的OR分别为0.85(95%CI:0.68,1.05)和1.03(95%CI:0.79,1.33)。结论:家务劳动是中老年女性日常体力活动的主要组成部分,并与乳腺癌等一些常见恶性肿瘤的患病率呈负相关。

2009年恶性肿瘤临床治疗新进展

本文综述了2009年临床肿瘤治疗领域的一系列值得关注的研究结果,包括肿瘤的个体化治疗和靶向治疗在肺癌、胃癌、肾癌和淋巴瘤等恶性肿瘤中的令人瞩目的进展。此外,有关肺癌、乳腺癌和前列腺癌等的数项肿瘤治疗新标准的提出同样令人关注。通过重新检视常规的肿瘤筛查、检测和预防策略,发现了存在于其中的局限。大样本量临床试验结果的发表,解答了乳腺癌领域的一些争论。总之,2009年的恶性肿瘤治疗进展值得令人关注。

Hsa-miR-93在肝癌中的作用机制研究

目的观察hsa-miR-93对肝癌细胞生长和细胞周期的影响,以分析其在肝癌中的作用机制。方法用real time RT-PCR法分析hsa-miR-93在人肝癌和癌旁肝组织的表达情况。此后构建hsa-miR-93过表达载体,同时合成二甲氧修饰的hsa-miR-93的反义核苷酸序列,二者转染肝癌细胞株观察它们对肝癌细胞生长及细胞周期的影响,分别以空载体和无关寡核苷酸序列为对照。转染后CCK-8法检测肝癌细胞生长情况,通过流式细胞仪分析细胞周期。结果hsa-miR-93在肝癌组织中表达明显高于癌旁肝组织。hsa-miR-93过表达载体可以促进肝癌细胞生长,促进细胞周期的G1/S期转换,而hsa-miR-93反义序列抑制肝癌细胞生长,使肝癌细胞阻滞于G1期(P<0.05)。结论hsa-miR-93通过促进细胞周期的G1/S期转换而促进肝癌细胞生长,提示hsa-miR-93可能是肝癌的发病机制中一个重要分子。

癌干细胞研究进展

关于肿瘤发生及发展的机制人们已探索多年,但由于肿瘤病因本身的复杂性、研究技术和知识积累不足等各种原因,研究进展缓慢。近些年来,癌干细胞的发现、确认和特性研究为肿瘤发病机制的揭示,乃至新型高效治疗策略的制定提出了新线索。许多研究成果显示,癌干细胞因具有自我更新和潜在的强增殖能力,在肿瘤发生发展、复发转移中均发挥着很重要的作用;肿瘤化疗的失败与肿瘤组织中癌干细胞的耐药性可能存在密切关系。本文就癌干细胞在这方面的研究进展及存在的问题作一综述。

靶向VEGF基因siRNA对放射性核素杀伤肿瘤的增强作用

目的建立特异性靶向VEGF基因表达的siRNA质粒,在肿瘤细胞内诱导RNA干扰,抑制VEGF表达,观察siRNA对放射性核素杀伤肿瘤的增强作用。方法构建针对人VEGF mRNA干扰质粒载体pRNAH-VEGF和对照载体pRNA-Ctr并转染人乳腺癌的MCF-7细胞株。采用RT-PCR和Western blot检测VEGF在mRNA和蛋白水平的表达抑制作用。用放射性核素32P胶体作为放射源照射细胞24h,采用克隆形成实验分析siRNA对放射性核素杀伤肿瘤的增强作用。结果与对照组相比较,转染了pRNAH(VEGF的MCF-7细胞VEGF mRNA和蛋白质抑制率均明显下调,细胞培养液上清中VEGF浓度下降了60.6%;siRNA和放射性核素联合使用组细胞克隆数量明显少于各自单独使用组;联合使用组细胞凋亡率也高于单独使用组。结论针对人VEGF mRNA干扰质粒载体有效地抑制内源性VEGF表达,增强了放射性核素对肿瘤细胞的杀伤作用。利用RNA干扰技术抑制VEGF表达可作为肿瘤放射治疗中的辅助治疗,以增加疗效。

卵巢上皮性癌血清DNA中p15、p16基因纯合性丢失及其共丢失的研究

背景与目的:p15和/或p16基因高频率的丢失与卵巢癌的发生、发展及预后关系密切,在卵巢癌组织DNA中的研究已有报道,但其在血清DNA中的丢失情况尚不清楚。本研究拟对卵巢上皮性癌、卵巢囊肿及健康对照者血清DNA中的p15、p16基因纯合性丢失及共丢失现象进行研究,探讨其与卵巢癌发生、发展的相关性。方法:采用PCR技术分别对165例卵巢上皮性癌、其相应淋巴细胞、25例卵巢囊肿及15例健康对照者血清DNA中p15/p16基因纯合性丢失及共丢失情况进行检测。结果:165例卵巢上皮性癌血清DNA中,p15、p16基因纯合性丢失率及p15/P16基因共丢失率分别为27.9%(46/165)、27.3%(45/165)及24.2%(40/165),而卵巢癌患者相应的淋巴细胞DNA与卵巢囊肿及健康对照者血清DNA中均未见丢失,差异有极显著性(P值分别为0.000、0.000及0.000)。Ⅰ、Ⅱ期卵巢上皮性癌血清DNA中,p16/p15基因共丢失率为8.6%(3/35),Ⅲ期及Ⅳ期共丢失率分别为29.3%(22/75)及27.3%(15/55),差异有显著性(P=0.049)。而p15、pl6基因丢失率与组织学类型无关。结论:p15、p16基因纯合性丢失及p15/p16基因共丢失现象与卵巢癌发生及发展相关,且可能为卵巢癌发生过程中的关键基因;采用血清DNA作为研究载体,可作为研究卵巢癌相关生物学特性的检测手段。

中医药对乙型肝炎患者肝癌前期状态的干预研究

目的:探讨中药对乙型肝炎相关性肝癌的干预作用. 方法:在慢性乙型肝炎患者中,筛选出肝癌高危患者30 例,治疗组17例根据审因论治的原则,以中药制剂对其进行为期2 a的肝癌干预治疗;对照组13例以中西药进行常规保肝治疗．治疗过程中每月随访临床症状、体征、肿瘤标志物、肝功能、病毒载量及T细胞亚群等项目,定期进行B超和CT检查．结果:中药干预组肿瘤标志物甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体和γ-谷氨酰转肽酶同工酶Ⅱ的转阴率分别为86％(6／7)、 83％(5／6)和82％(9／11),对照组中所有病例肿瘤标志物持续阳性,无1例转阴．2 a期间中药干预组累计肝癌发生率为 12％(2／17),对照组为85％(11／13),两者比较差异具有极显著性(P<0．0 001)．结论:中医“养正徐图”治则能有效降低肝癌高危患者肿瘤标志物水平,并能延缓或阻止肝癌的发生．

DNA甲基化与肿瘤诊断

包括靶向性治疗在内的新疗法已使癌症患者的整体生存期有所延长，但对晚期恶性肿瘤患者而言，治愈率并无改善。缺乏检出早期癌症的能力是其根本原因。此外，目前应用的肿瘤临床分期和分型方法不能满足临床肿瘤治疗有效性评估的需求。因此，建立、整合包括肿瘤行为在内的表观遗传学病理机制新理念，并提出肿瘤分期和分型系统新标准实属当务之急。

核苷酸切除修复基因和谷胱甘肽-S-转移酶基因多态与胆道癌风险关系的研究

目的:研究核苷酸切除修复基因XPA、XPC、XPD、XPG及Ⅱ相代谢酶基因GSTM1、GSTT1多态与上海市市区人群胆道癌风险的关系。方法:采用全人群病例-对照研究的方法,运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)的方法对443例胆道癌患者和845例正常对照进行基因型分析。比较各基因型在病例与对照中分布频率的差异,并探讨其与胆道癌之间的关系。结果:XPD exon10-Asp312Asn和exon23-Lys751Gln多态位点的频率分布在壶腹癌病例和对照之间的差异有统计学意义(P<0.05),调整了年龄、性别、吸烟、胆石症和高血压后,证实Asn/Asn和Gln/Gln基因型可能增加壶腹癌的危险,比值比(odds ratio,OR)分别为32.03和9.33,且趋势检验有统计学意义。未发现其他修复基因多态位点与胆道癌有关联。分层分析显示,GSTM1缺失型可增加女性胆囊癌发生的危险,OR=1.73(95%可信区间:1.06～2.82)。在胆道癌的发生中,GSTM1与部分修复基因存在联合作用。结论:XPD exon10-Asn/Asn基因型和exon23 Gln/Gln基因型可能与壶腹癌的危险性有关。GSTM1缺失型可能增加女性胆囊癌发生的危险,且GSTM1基因型与部分修复基因之间可能存在联合作用。

肝癌细胞系中肝癌转移相关候选基因启动子区域CpG岛甲基化和表达水平的相关性研究(英文)

背景与目的:DNA甲基化被认为是反映细胞内DNA转录状态的重要表观遗传学标记。本研究旨在对启动子区域CpG岛的甲基化与基因转录水平的相关性进行评估。方法:采用甲基化特异性PCR的方法确定7个与肝癌转移相关的候选基因的启动子区域在6个肝细胞系(包括5个肝癌源性的)中的甲基化状态,并通过半定量PCR的方法确定6个基因稳定态的mRNA水平。结果:仅有纯合和杂合去甲基化的基因状态得到发现。RT-PCR分析表明除了OXCT基因在其处于杂合去甲基化状态的HepG2和HCCLM3细胞中不表达,在其他的情况下,7个候选基因均有表达。讨论:本研究中的7个肝癌转移相关基因的甲基化状态仅在细胞系中部分的反映了基因的转录状态,提示其它转录调控机制的存在。

肺癌干细胞的球体形成与致瘤性分析

目的：从人肺腺癌细胞株SPC—A1中诱导球体形成，对其中的肺癌干细胞进行鉴定并评估其致瘤能力。方法：无血清条件下培养肺癌细胞，采用表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）、重组人胰岛素样生长因子-1（insulin—like growth factor-1，IGF-1）和重组人成纤维细胞生长因子-10（fibroblast growth factor—10，FGF-10）等细胞生长因子诱导球体形成，球体细胞采用RT—PCR及免疫荧光技术检测干细胞相关标志的表达，并通过NOD—SCID小鼠移植评估其致瘤性。结果：SPC—A1肺腺癌细胞经培养5—10d后，即可形成悬浮生长的细胞球体（肺球体）。RT—PCR检测显示肺球体细胞表达肺癌干细胞表面标志CD24和CD221．细支气管肺泡干细胞标志Clara细胞分泌蛋白和肺泡活性蛋白C，胚胎干细胞主干基因OCT4、Nanog和Bmi-1，以及肺干细咆主干基因甲状腺转录因子-1。采用免疫荧光检测其中3个标志的蛋白表达，证实80％以上的肺球体细胞呈Clara细胞分泌蛋白、肺泡活性蛋白C和OCT4染色阳性。肺球体细胞具有高致瘤性，在NOD—SCID小鼠中移植5103个细胞即可形成肿瘤。结论：肺球体细胞中肺癌干细胞高度富集并具有致瘤性。

人肺腺癌干细胞的分离及鉴定

目的:从人肺腺癌细胞株中分离及鉴定具有干细胞特征的高致瘤性癌干细胞。方法:采用磁性细胞分选(magnetic activated cell sorting,MACS)技术将肺腺癌细胞分成多个亚群,然后应用流式细胞及RT-PCR技术检测干细胞相关标志表达,通过NOD-SCID小鼠移植评估其致瘤性。结果:在A549和SPC-A肺腺癌细胞中发现一个新颖的癌细胞亚群,此类癌细胞的表型特征为CD24+IGF-1R+,具有高侵袭性和高致瘤性,在NOD-SCID小鼠中仅需移植100个细胞即可形成肿瘤,其致瘤能力是上述标志阴性细胞的1000倍。此外,这些细胞表达胚胎干细胞标志(OCT4和Bmi-1)及肺干细胞标志(CCSP,SP-C,TTF-1和Gremlin),类似小鼠肺脏细支气管肺泡干细胞(bronchioalveolar stem cells,BASC),并具有自主生长特性,能够在无血清条件下长期培养。结论:人体肺腺癌中CD24+IGF-1R+细胞属于BASC样癌干细胞。

环孢素A增强三氧化二砷诱导的胶质瘤细胞U87-MG自噬性死亡

目的:探讨环孢素A(cyclosporine A,CsA)联合三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对脑胶质瘤细胞U87-MG自噬性死亡的影响。方法:CsA联合ATO作用U87-MG细胞后,应用MTT法检测细胞的存活率及ATO半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50),FCM法检测细胞周期的改变,荧光显微镜下观察及FCM法定量分析经吖啶橙(acridine orange,AO)活体染色后细胞质内酸性自噬泡(acidic vesicular organelles,AVO)的形成情况;Western印迹法检测细胞自噬相关蛋白Beclin-1和自噬标志蛋白LC3-Ⅱ的表达水平。结果:小剂量CsA(2μmol/L)联合ATO可明显抑制U87-MG细胞的生长,CsA可增加ATO诱导的细胞自噬性死亡,使ATO的IC50值由单独作用时的4.28μmol/L降低至联合作用时的1.28μmol/L;与对照组相比,CsA联合ATO作用后G2/M期细胞明显减少(P<0.05);AO活体染色可见,CsA联合ATO作用可显著增加细胞内的AVO形成,与CsA、ATO单独作用组相比差异有统计学意义(P<0.01);Western印迹可见CsA联合ATO作用后细胞内Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达明显上调,与对照组和单独作用组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CsA可以增强ATO诱导的恶性脑胶质瘤细胞U87-MG的自噬性死亡,为恶性脑胶质瘤的治疗提供新的方向。

肿瘤患者循环DNA的定量研究

目的建立纳克水平DNA定量方法,并探讨循环DNA检测在肿瘤诊断中的应用价值。方法对483例恶性肿瘤患者以微量基因组抽提试剂盒抽提血清DNA,以SYBRgreenⅠ荧光染色法行DNA定量;BRCA1(D17S579、D17S855)和p53(TP53,D17S786)微卫星位点的杂合性丢失检测采用聚合酶链反应结合聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染的方法进行。同时与150例健康人血清的检测结果进行对照。结果SYBRgreenⅠ荧光染色可精确定量2～10ngDNA。483例恶性肿瘤患者血清DNA平均水平为(81.3±98.3)ng/ml,150例健康人血清DNA平均水平为(22.2±13.4)ng/ml,两者间差异有显著性(P<0.001);50例良性肿瘤患者血清DNA未见显著升高。在33例血清DNA含量增高的卵巢癌患者中,27例(81.8%)能测及BRCA1和p53微卫星标记中至少1个位点的杂合性丢失。结论循环DNA的定量有可能成为一种新的恶性肿瘤标志物。

TF和Her-2在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨组织因子(tissue factor,TF)和人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor2,Her-2)在乳腺癌组织中的表达及其在临床诊断和评价预后中的意义。方法:应用免疫组织化学法检测了45对包括原发乳腺癌组织及其癌旁组织共90例以及30例乳腺良性病变组织中TF,Her-2的表达,分析其与临床病理指标的关系及其和5年无病生存率的关系。结果:45例乳腺癌组织中,TF表达阳性的为31例(68.9%),Her-2表达阳性的为26例(57.8%)。30例乳腺良性病变组织中TF表达阳性的4例(13.3%),6例(20.0%)Her-2表达阳性的6例(20.0%)。TF,Her-2的表达在癌组织与良性病变组织中均有显著差异(P<0.001)。45对癌组织与癌旁组织中,TF与Her-2在癌组织中的表达均显著高于癌旁组织(P<0.001),2者差异有统计学意义。TF,Her-2表达阳性时,与乳腺癌病理分级、淋巴结是否转移呈正相关。结论:TF,Her-2可能参与乳腺癌组织的发生发展过程,2者结合可共同应用于临床共同预测乳腺癌患者的预后。

分类资料的组间比较方法

本刊从2006年起将不定期地刊出函授继续医学教育讲座,附有问答题。请读者撕下该问答题(打印、复印无效),连同读者本人的答案于2006年10月20日前寄回本杂志社(地址：上海市斜土路2200弄25号,邮编：200032)。回答正确者可获得上海市肿瘤研究所颁发的继续医学教育Ⅱ类学分,每期2分。2006年第8期的标准答案将在第10期上公布,请读者留意。2006年有关各期的学分将于本年底前寄出,届时请将学分证的工本费5元(无发票)寄到本杂志社。

肝癌中乙型肝炎病毒整合位点的研究

确定HBV整合在染色体上的精确位置。结果在40例乙肝表面抗原阳性的肝癌组织中,有34例(85%)存在HBV整合现象。每份标本中的病毒整合拷贝数为1～5个不等,因此共获得了68个病毒整合位点。从病毒基因分析,整合可发生于X基因的任何长度,并不集中于通常认为的HBVDR1和DR2区,但在96%(65/68)的整合中,X基因均以截短形式插入宿主细胞DNA;从宿主基因分析,HBV偏好插入于基因的内含子和上游调控区,未见外显子中的插入。这些基因80%已被报道与肿瘤有关,它们的产物大多与细胞基本生存和死亡密切相关,可在各个细胞调控环节上促进肿瘤生成。十分有意义的是,在总共26个基因中即有3个基因(myeloid/lymphoidormixed lineageleukemia4,G proteinalphatransducingactivity polypeptide1和fibronectin1)发现被HBV重复整合。结论HBV在肝癌细胞染色体上的整合并不呈均衡分布,病毒对宿主细胞的“插入诱变”及整合子中持续表达的“截短型X蛋白”可能在病毒的致癌过程中起重要作用。

动脉灌注GE7系统介导1型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶／羟甲基无环鸟苷对大鼠诱发性卵巢恶性肿瘤的作用

目的观察非病毒载体介导1型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶（HSVl-tk）／羟甲基无环鸟苷（GCV）基因治疗系统，经肿瘤供血动脉灌注，对大鼠诱发性卵巢癌的作用，并初步探讨其作用机制。方法构建GE7-polylysine／pCMV-HSVl-tk／polylysine-HA20四元复合物，取二甲基苯蒽（DMBA）诱发的大鼠卵巢肿瘤模型18只，随机分为3组，每组6只。分别经卵巢供血动脉注入四元复合物8“g／只（Atk组）、同体积的生理盐水（ANS组），经尾静脉注入四元复合物8μg／只（Vtk组）。72h后，3组大鼠均腹腔注射GCV，50mg·kg-1.d-1，连用10d。停药后3d处死大鼠，瘤体称重，计算抑瘤率。采用流式细胞仪检测各组大鼠卵巢肿瘤细胞的细胞周期变化和细胞凋亡情况。结果Atk组大鼠肿瘤瘤重为（4．774-2．31）g，明显低于ANS组[（14．66±6．26）g，P〈0．01]和Vtk组[（17．53±7．19）g，P〈0．01]。Atk组抑瘤率为67．5％Vtk组的抑瘤率为-19．6％。流式细胞检测结果显示，Atk组S期细胞占（54．32±9．65）％，高于ANS组[（27．434-9．22）％，P〈0．01]和Vtk组[（30．16±11．57）％，P〈0．01]。Ark组肿瘤细胞凋亡率为（39．15±12．16）％，高于ANS组[（11．864-5．28）％，P〈0．01]和Vtk组[（14．32±6．43）％，P〈0．01]。结论HSVl-tk在GE7导人系统介导下，经卵巢供血动脉导人大鼠卵巢肿瘤组织，给予GCV后，可使肿瘤细胞阻滞于S期，促进肿瘤细胞凋亡，从而发挥良好的抑瘤作用。