大鼠终板软骨内源性转化生长因子β1与早期钙化相关基因表达的变化

目的建立大鼠终板软骨细胞体外自然传代的退变模型，探讨自然退变过程中内源性转化生长因子（TGF）-β1与钙化基因表达变化的关系。方法取大鼠腰椎终板软骨细胞，酶消化法及自然传代法分离培养大鼠终板软骨细胞，选取P2代和P4代，在体外均培养6d，观察细胞表型及利用茜素红染色，观察P2与P4代细胞的变化。用实时PCR检测软骨标志基因Ⅱ型胶原、转录因子SOX-9及代谢相关基因蛋白多糖、基质金属蛋白酶（MMP）-13、含I型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（ADAMTS）4、5的变化，验证体外退变模型的建立，在此基础上，继续检测生长因子TGF．131及钙化相关基因（ANK）、胞外核苷酸焦磷酸酶（ENPP）、组织非特异性碱性磷酸酶（TNAP）的变化。结果相对于P2代细胞，P4代细胞形态上有梭形变趋势，茜素红染色无明显变化。P4代转录因子SOX-9表达明显低于P2代（P4／P2=0．0690，P=0．0489），Ⅱ型胶原（P4／P2=0．0535，P=0．009）及蛋白多糖（P4／P2=0．2672，P=0．0343）表达也均明显低于P2代，其他代谢相关基因无明显改变。P4代细胞TGF-131（P4／P2=0．5934，P=0．0482）、TNAP（P4／P2=0．0385，P=0．0139）和ANK（P4／P2=0．2121，P=0．0009）表达均明显低于P2代，ENPP表达无明显改变（P〉0．05）。结论终板软骨随着传代次数增多，从P2代到P4代，开始发生体外自然退变，Ⅱ型胶原、SOX-9及蛋白多糖明显下调。内源性TGF-β1与钙化相关基因表达均下调，钙化相关基因ANK下调可能由内源性TGF-β1下调引起，提示调节内源性TGF-β1在终板软骨中的表达有可能会阻止椎间盘的退变。