从提高学习兴趣尝试临床免疫学检验的教学改革

临床免疫学检验的教学,不仅要求学生能牢固地掌握免疫学的基础知识和实验检测技术,还要求学生能紧随免疫学飞快发展的趋势,不断地孕育创新意识、增强科学的思维。笔者通过筹建学生免疫兴趣小组,以点带面,寓教于乐,很大程度上带动了全班同学学习的兴趣和积极性,为逐步深入的临床免疫学的教学改革奠定了一定的基础。

Prion相关疾病免疫学诊断和治疗的研究进展

羊搔痒症、克雅氏综合征等神经退行性疾病从20世纪初起就受到人们的高度关注，然而此类疾病的病原体prion却在20多年前才被人们所发现和认识。Prion不同于一般病原体，它与免疫系统之间有着极其复杂的相互关系，其在免疫学领域的研究历经坎坷。现就近年来免疫学在Prion相关疾病的诊断和治疗上的各种方法、理论及应用状况作一综述和比较。

Toll样受体对睾丸Sertoli细胞免疫调节的初步研究

目的:研究睾丸Sertoli细胞感染后,TLR发挥免疫调节功能的情况。方法:正常大鼠Sertoli细胞表达Toll样受体的情况以及用溶脲脲原体(Ureaplasma Urealyticum,UU)体外感染Sertoli细胞后,分别在12、24、36小时时间段比较感染组与对照组之间Toll样受体表达变化情况。结果:正常大鼠Sertoli细胞表达TLR2-8,低表达TLR9和10,未检出TLR1和5;与对照组相比,体外感染处理后TLR2、6表达增加。结论:Toll样受体的激活参与Sertoli细胞对炎症的免疫调节,两者具有一定的联系。

IL-21及其在自身免疫病中的研究进展

白介素-21(IL-21)是近年来被发现和关注的一个四螺旋束的细胞因子,主要由活化的CD4^+Th细胞和NKT细胞分泌,与IL-2、IL-4和IL-15具有高度同源性。它的受体属于Ⅰ型细胞因子受体,由α链和γc链组成,广泛分布于T细胞、B细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞、巨噬细胞和角质化细胞等细胞表面,在固有免疫和适应性免疫中发挥重要作用。IL-21具有多效性,在类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、炎症性肠病等一些自身免疫病的发病机制中起着重要的作用。本文就IL-21及其与自身免疫病的关系作一综述。

“问题式学习”的原理及其在教育实践中存在的问题

问题式学习(Problem-based learning,PBL)又称"基于问题的学习",在高等教育实践中被广泛采用。目前的许多证据表明学生和教员对这种教育方法都非常满意。然而,在教育实践中仍然经常会遇到一些问题,诸如导师过度指导、问题过于结构化以及学习小组失去功能,等等。为了使学习者能更有效地为未来的学习作准备,学习应基于4个现代理念:学习是一种建构性的、自我指导的、合作性的和情景式的过程。论文详细地描述这4个学习原理,解释其在PBL中是如何被应用的,并讨论在PBL实践中出现的问题及解决方法。

RA患者滑膜液及血清中IFN-γ、IL-10、IL-12与TRAIL的病理学意义

目的:研究IFN-γ、IL-10、IL-12及TRAIL在类风湿关节炎(RA)病理过程中的作用。方法:采用夹心ELISA法检测46名RA患者关节滑膜液和血清中IFN-γ、IL-10、IL-12及TRAIL的浓度。结果:RA患者关节滑膜液中IFN-γ、IL-12及TRAIL浓度(ng/L)分别为(106.2±7.8)、(57.7±3.5)和(166.5±12.3);RA患者血清中IFN-γ、IL-12及TRAIL浓度(ng/L)分别为(56.3±7.4)、(35.1±12.7)和(69.5±8.3);正常对照血清中IFN-γ、IL-12及TRAIL浓度(ng/L)分别为(31.1±4.4)、(25.2±2.6)和(41.2±4.8);RA患者关节滑膜液IFN-γ高于其血清含量(P<0.05)及正常对照组(P<0.01);RA患者关节滑膜液和血清中IL-10浓度和正常对照差异无统计学意义。结论:在RA疾病中IFN-γ和IL-12浓度明高于正常人,表明RA发病过程中细胞因子分泌格局以Th1型为主,并且滑膜液比外周血更为典型。RA患者关节滑膜液和血清中TRAIL浓度增高,说明RA疾病过程中伴随有凋亡分子的参与。

探讨高表达肿瘤抗原基因OVA66对WISH细胞生物学特征的影响

目的分析转染OVA66基因WISH细胞的生物学特征变化,探讨该基因的功能。方法采用脂质体方法将重组真核表达载体pcDNA3.1-OVA66转染正常人羊膜细胞系WISH,经G418稳定筛选、克隆和扩增。采用RT-PCR、Western blotting和免疫荧光等方法检测目的基因及其蛋白的表达,通过电镜分析细胞超微结构,体外侵袭实验检测细胞生长特性和侵袭能力,软琼脂克隆形成实验检测细胞的克隆性生长能力,并应用基因芯片技术检测相关基因差异表达。结果RT-PCR检测显示,转染pcDNA3.1-OVA66细胞OVA66基因呈高表达;Western bloting显示OVA66蛋白处出现明显的条带;电镜检测表明该基因可明显增强WISH细胞增殖能力;体外侵袭实验显示,该基因可增强WISH细胞的侵袭转移能力;软琼脂克隆形成实验表明OVA66基因可以促进单克隆性生长能力;基因芯片提示,该基因高表达影响某些基因的异常表达。结论提示OVA66基因高表达可促进细胞的增殖,利于肿瘤的侵袭和转移。

Treg细胞在VIP治疗实验性类风湿性关节炎中的作用研究

目的:本研究探讨血管活性肠肽(VIP)治疗实验性类风湿性关节炎的免疫调节机制及Treg细胞参与的调节。方法:本研究以鸡Ⅱ型胶原(CCⅡ)诱导的Wistar大鼠实验性类风湿性关节炎(CIA)为动物模型,分析大鼠关节指数评分和关节病理变化,通过细胞因子检测分析Th1/Th2平衡关系;通过流式细胞术和功能实验分析Treg的变化,评价VIP的治疗作用和机制。结果:我们的研究显示体内经VIP治疗的CIA大鼠在临床和组织学水平均得到了保护和缓解。其抑制作用与下列因素有关:抑制致病性T细胞的增殖,免疫应答由Th1型应答向Th2型应答转换,以及上调了具有抑制T细胞活化和增殖作用的CD4+CD25+Treg细胞数量与功能。结论:本研究揭示了VIP可通过调节Th1/Th2平衡和上调Treg细胞来抑制致病性T细胞的活性,从而保护、缓解实验性关节炎。

早孕期弓形虫感染对大鼠胎盘IL-4、IL-10和IFN-γ表达水平的影响

研究早孕期弓形虫感染对Wistar大鼠胎盘IL-4、IL-10及IFN-γ表达水平的变化,从而探讨弓形虫感染致不良妊娠的分子免疫学机制。将Wistar孕鼠随机分为2组:①对照组12只;②早孕感染组12只。早孕感染组每只孕鼠于妊娠第5天腹腔注射1×105个弓形虫强毒株(RH株)速殖子,对照组不做任何处理。所有孕鼠均于孕19 d颈椎分离处死,无菌获取胎盘,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-ti me PCR)及酶联免疫吸附测定(ELISA)检测其胎盘IL-4、IL-10及IFN-γ mRNA及蛋白表达水平的变化。结果:①实验组与对照组IL-4、IL-10及IFN-γmRNA相对表达水平分别为(0.006±0.010)、(0.119±0.080)、(0.82±0.354)和(0.596±0.444)、(0.478±0.224)、(0.297±0.180),三者之间均具有显著性差异(P<0.01);②实验组与对照组IL-4、IL-10及IFN-γ蛋白表达水平分别为(4.63±1.26)、(239.24±83.16)、(105.47±67.88)和(2.40±1.33)、(103.03±79.72)、(208.02±74.95),三者之间均具有显著性差异(P<0.01)、(P<0.05)、(P<0.05);③实验组与对照组mRNA水平IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10分别为(390.67±264.12)(37.65±21.10)和(1.31±0.96)、(0.79±0.60)两者之间均具有显著性差异(P<0.01);④实验组与对照组蛋白水平IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10分别为(176.51±212.95)、(7.26±8.81)和(23.09±12.95)、(0.44±0.21)。两者之间均具有显著性差异(P<0.01)、(P<0.05)。大鼠早孕期弓形虫感染后,胎盘局部Th1型细胞因子表达增高,Th2型细胞因子表达降低,打破了正常妊娠所需的Th1/Th2平衡状态,使平衡倾向于Th1,可能是弓形虫孕期感染致不良妊娠的重要分子机制之一。

Cyr61促进RA滑膜细胞增殖及炎症因子调控研究

目的:采用类风湿性关节炎(RA)患者滑膜细胞的体外培养,研究基质蛋白Cyr61在RA滑膜细胞增殖中的作用及其机制。方法:通过Real-time PCR、Western blot和免疫组化检测RA病人的滑膜组织和细胞中Cyr61的表达情况;用3H-TdR掺入法检测滑膜液(SF)对滑膜细胞增殖的影响;用ELISA方法检测RA患者滑膜液中Cyr61蛋白的水平。结果:RA病人的滑膜组织和细胞中高表达Cyr61;SF能刺激滑膜细胞发生明显增殖;且RA患者滑膜液中含高浓度的Cyr61蛋白。用SiRNA干扰技术抑制滑膜细胞中Cyr61基因表达,再加入滑膜液后,则滑膜细胞增殖明显降低。同时,将SF与anti-Cyr61抗体共同孵育后再刺激滑膜细胞,FLS也不再发生明显增殖。进一步研究滑膜液中与上调Cyr61表达有关的炎症细胞因子,发现SF中IFNγ-和TNFα-具有上调Cyr61蛋白表达的作用。结论:Cyr61蛋白是促进滑膜细胞增殖的重要调控基因;RA患者滑膜液中含有高浓度的炎症因子IFNγ-和TNFα-,通过上调Cyr61蛋白表达而促进滑膜细胞增殖,可能是促进RA病理性滑膜增生的重要因素之一。

柚皮苷对犬骨髓基质细胞体外增殖及成骨分化的影响

目的:研究犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)在柚皮苷诱导下定向成骨及成骨分化能力。方法:抽取犬骨髓,贴壁法体外培养,流式细胞仪鉴定,加入不同浓度柚皮苷(1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8、1×10-9 mol/L)诱导,以CCK-8检测药物毒性,定量检测碱性磷酸酶、von Kossa检测钙结节形成。采用SPSS20.0软件包对数据进行统计学分析。结果:经流式细胞仪检测,CD34、CD45低表达、CD90高表达分别为0.126%、0.075%和95.4%;柚皮苷浓度在10-6、10-7 mol/L时,能明显促进细胞增殖;经柚皮苷诱导后,碱性磷酸酶含量显著提高,其中,浓度为10-6 mol/L时,ALP相对值最高(P<0.05);von Kossa钙结节检测呈阳性。结论:犬骨髓基质细胞在柚皮苷诱导下能分化为成骨细胞。柚皮苷浓度为10-6 mol/L时,能明显促进骨髓基质细胞的增殖及分化。

巨噬细胞及其表达和分泌产物在类风湿性关节炎发病中的作用

巨噬细胞分化自外周血单核细胞,二者在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发病过程中起着关键性的作用。这些细胞参与了炎症的启动和维持、白细胞的黏附和迁移、基质的降解和血管新生。巨噬细胞表达黏附分子、趋化因子受体(chemokine receptor,CR)和其他表面抗原;它们还分泌趋化因子、细胞因子、生长因子、蛋白酶和其他介质。这些炎症介质是关节炎中炎症和血管新生发生的重要病理机制。近年来,巨噬细胞移动抑制因子(macro-phage migrationinhibitory factor,MIF)受到研究者们的广泛关注,这种细胞因子可由包括巨噬细胞在内的多种细胞产生,它反过来可以促进巨噬细胞的活化和细胞因子的产生;同时,它可以调节机体对糖皮质激素的敏感性;并且将类风湿性关节炎与动脉粥样硬化等炎症疾病联系在一起。在类风湿性关节炎发病过程中,巨噬细胞还可以产生多种蛋白酶(如组织蛋白酶G,cathepsin G),这些蛋白酶促进了炎症和血管新生的发生。鉴于巨噬细胞及其表达和分泌产物在类风湿关节炎致病机理中具有关键性作用,它们已成为治疗类风湿性关节炎的一个理想靶点。

肝癌干细胞标志物及细小病毒H-1非结构蛋白NS-1对肝癌干细胞生长的影响

目的:研究肝癌细胞系SMMC7721肿瘤干细胞表面标志物,探讨细小病毒H-1非结构蛋白NS-1对肝癌细胞的生长抑制作用,以及其对肝癌细胞中具有干细胞特性群体的影响。方法:用流式细胞仪将肝癌细胞按细胞表面标志CD133、CD44进行分离,分为CD133+CD44+、CD133+CD44-、CD133-CD44+、CD133-CD44-4个群体,采用脂质体法将细小病毒H-1非结构蛋白NS-1质粒转染入人肝癌细胞SMMC7721,采用G418筛选稳定转染的细胞克隆,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染细胞NS-1基因的表达。流式细胞仪分析SMMC7721转染前后肿瘤干细胞表面标志CD133、CD90、CD44的表达和细胞生长周期,检测细胞群体的变化。以裸鼠成瘤实验和软琼脂克隆形成实验评价具肿瘤干细胞性质的肝癌细胞表面标志物以及细小病毒H-1非结构蛋白NS-1转染对肝癌细胞生长的影响。结果:肝癌SMMC7721细胞分成CD133+CD44+、CD133+CD44-、CD133-CD44+、CD133-CD44-4组亚群的细胞存在着异质性,4组亚群细胞中均有少数肿瘤干细胞样细胞能在软琼脂上形成克隆,其中CD133+CD44+、CD133+CD44-亚群克隆形成率分别为3.5%和1.8%,CD133-CD44+、CD133-CD44-亚群克隆形成率为0.7%和0.5%。转染细小病毒H-1非结构蛋白NS-1后,4组亚群细胞克隆的形成率都显著下降。裸鼠成瘤实验提示,CD133+表型的细胞成瘤能力强于CD133-表型细胞,CD133-CD44+亚群细胞成瘤能力最弱。流式细胞仪分析显示转染NS-1后,CD133+群体细胞被明显抑制,由31.9%下降至6.3%,而CD90+和CD44+的表达未出现改变;转染NS-1后细胞S期百分率明显下降。结论:肝癌细胞表型为CD133+CD44+和CD133+CD44-亚群中富含肝癌干细胞,转染细小病毒H-1非结构蛋白基因NS-1的部分亚群SMMC7721细胞生长被抑制,提示其对肝癌细胞株中具有干细胞特性的CD133+群体有一定的抑制效应。

Toll样受体信号传导在关节炎发病中的作用

最近的研究证据显示:Toll样受体(TLR)是固有免疫的关键性识别结构。TLR的活化启动了炎症性细胞因子、趋化因子、组织破坏性酶和Ⅰ型干扰素的产生;同时,TLR的信号传导可以通过上调抗原递呈细胞的共刺激分子在适应性免疫系统的活化和发展中扮演重要作用。鉴于TLR信号传导在连接固有免疫和适应免疫中具有重要作用,可以推测TLR信号传导的失调可能与自身免疫性疾病的发生有关。本文将就由对应配体激活的TLR信号转导通路进行一些总结,最后讨论TLR传导通路在类风湿性关节炎致病机制中的作用。

Delta阿片受体激动剂DADLE对神经元转录的影响

目的:观察Delta阿片受体激动剂DADLE([D-Ala2,D-Leu5]enkephalin)对大鼠原代皮层神经元转录的影响。方法:体外培养皮层神经元,免疫荧光法鉴定其纯度,以不同浓度的DADLE与神经元共培养不同的时间,应用[3H]标记脲嘧啶掺入法测定神经元的转录水平,MTT法检测细胞活力。结果:DADLE在不同浓度均能抑制神经元的转录,但是其抑制率与浓度不呈线性关系,当浓度增加到1nmol以上时其抑制率绝对值稳定在40%～60%左右。DADLE的转录抑制率与作用时间也不呈线性关系,当时间超过24h后,其抑制率绝对值维持在40%～60%。将DADLE洗脱72h后其抑制效果完全消失。MTT检测显示各个浓度的DADLE对神经元的活力影响无显著差异。结论:DADLE能可逆、无损伤抑制神经元的转录。

HLA多态性与疾病机制关联的研究进展

人类白细胞抗原(HLA)是人类最复杂、最具多态性的遗传系统,其功能涉及到机体免疫应答和调节的各个方面。大量研究表明,HLA基因多态性与炎症、病毒感染、肿瘤等相关。本文就HLA的多态性与各个系统的的多种疾病机制关联的研究进展进行简要综述。

趋化因子系统与中枢神经系统炎症性疾病

趋化因子(chemokine)及其受体在机体正常和病理状态下对淋巴细胞的迁移起着重要作用。趋化因子在中枢神经系统(central nervous system,CNS)不同部位的不同表达对正常免疫监视和病理免疫效应过程是必需的。CNS炎症过程中,炎性细胞在趋化因子的作用下穿越血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)浸润到病灶部位。因此,对趋化因子及其受体在CNS的深入研究不仅能了解这些疾病的发病机制,也为治疗疾病提供了可靠的药物靶点。