Toll样受体对睾丸Sertoli细胞免疫调节的初步研究

目的:研究睾丸Sertoli细胞感染后,TLR发挥免疫调节功能的情况。方法:正常大鼠Sertoli细胞表达Toll样受体的情况以及用溶脲脲原体(Ureaplasma Urealyticum,UU)体外感染Sertoli细胞后,分别在12、24、36小时时间段比较感染组与对照组之间Toll样受体表达变化情况。结果:正常大鼠Sertoli细胞表达TLR2-8,低表达TLR9和10,未检出TLR1和5;与对照组相比,体外感染处理后TLR2、6表达增加。结论:Toll样受体的激活参与Sertoli细胞对炎症的免疫调节,两者具有一定的联系。

Treg细胞在VIP治疗实验性类风湿性关节炎中的作用研究

目的:本研究探讨血管活性肠肽(VIP)治疗实验性类风湿性关节炎的免疫调节机制及Treg细胞参与的调节。方法:本研究以鸡Ⅱ型胶原(CCⅡ)诱导的Wistar大鼠实验性类风湿性关节炎(CIA)为动物模型,分析大鼠关节指数评分和关节病理变化,通过细胞因子检测分析Th1/Th2平衡关系;通过流式细胞术和功能实验分析Treg的变化,评价VIP的治疗作用和机制。结果:我们的研究显示体内经VIP治疗的CIA大鼠在临床和组织学水平均得到了保护和缓解。其抑制作用与下列因素有关:抑制致病性T细胞的增殖,免疫应答由Th1型应答向Th2型应答转换,以及上调了具有抑制T细胞活化和增殖作用的CD4+CD25+Treg细胞数量与功能。结论:本研究揭示了VIP可通过调节Th1/Th2平衡和上调Treg细胞来抑制致病性T细胞的活性,从而保护、缓解实验性关节炎。

探讨高表达肿瘤抗原基因OVA66对WISH细胞生物学特征的影响

目的分析转染OVA66基因WISH细胞的生物学特征变化,探讨该基因的功能。方法采用脂质体方法将重组真核表达载体pcDNA3.1-OVA66转染正常人羊膜细胞系WISH,经G418稳定筛选、克隆和扩增。采用RT-PCR、Western blotting和免疫荧光等方法检测目的基因及其蛋白的表达,通过电镜分析细胞超微结构,体外侵袭实验检测细胞生长特性和侵袭能力,软琼脂克隆形成实验检测细胞的克隆性生长能力,并应用基因芯片技术检测相关基因差异表达。结果RT-PCR检测显示,转染pcDNA3.1-OVA66细胞OVA66基因呈高表达;Western bloting显示OVA66蛋白处出现明显的条带;电镜检测表明该基因可明显增强WISH细胞增殖能力;体外侵袭实验显示,该基因可增强WISH细胞的侵袭转移能力;软琼脂克隆形成实验表明OVA66基因可以促进单克隆性生长能力;基因芯片提示,该基因高表达影响某些基因的异常表达。结论提示OVA66基因高表达可促进细胞的增殖,利于肿瘤的侵袭和转移。

灭活自体T细胞增强小鼠免疫功能作用机制的研究

接种灭活自身反应性T细胞用于治疗自身免疫性疾病已获初步成效。本研究采用辐射方法灭活ConA活化自体T细胞,经皮下和腹腔免疫正常的C57BL/6J小鼠,结果发现,该免疫方案可明显上调T细胞功能,表现为:免疫小鼠体内活化T细胞增多且Th1型细胞因子分泌增加,淋巴细胞体外增殖能力增强且凋亡细胞明显减少。进一步研究结果提示,接种灭活自体T细胞可能通过上调Fas、GADD45β及下调FasL基因表达而促进T细胞的活化和存活,并增加其生物学功能。这些结果表明,自体T细胞免疫具有增强机体的细胞免疫功能,为其抗肿瘤免疫作用提供了一定的实验依据。

早孕期弓形虫感染对大鼠胎盘IL-4、IL-10和IFN-γ表达水平的影响

研究早孕期弓形虫感染对Wistar大鼠胎盘IL-4、IL-10及IFN-γ表达水平的变化,从而探讨弓形虫感染致不良妊娠的分子免疫学机制。将Wistar孕鼠随机分为2组:①对照组12只;②早孕感染组12只。早孕感染组每只孕鼠于妊娠第5天腹腔注射1×105个弓形虫强毒株(RH株)速殖子,对照组不做任何处理。所有孕鼠均于孕19 d颈椎分离处死,无菌获取胎盘,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-ti me PCR)及酶联免疫吸附测定(ELISA)检测其胎盘IL-4、IL-10及IFN-γ mRNA及蛋白表达水平的变化。结果:①实验组与对照组IL-4、IL-10及IFN-γmRNA相对表达水平分别为(0.006±0.010)、(0.119±0.080)、(0.82±0.354)和(0.596±0.444)、(0.478±0.224)、(0.297±0.180),三者之间均具有显著性差异(P<0.01);②实验组与对照组IL-4、IL-10及IFN-γ蛋白表达水平分别为(4.63±1.26)、(239.24±83.16)、(105.47±67.88)和(2.40±1.33)、(103.03±79.72)、(208.02±74.95),三者之间均具有显著性差异(P<0.01)、(P<0.05)、(P<0.05);③实验组与对照组mRNA水平IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10分别为(390.67±264.12)(37.65±21.10)和(1.31±0.96)、(0.79±0.60)两者之间均具有显著性差异(P<0.01);④实验组与对照组蛋白水平IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10分别为(176.51±212.95)、(7.26±8.81)和(23.09±12.95)、(0.44±0.21)。两者之间均具有显著性差异(P<0.01)、(P<0.05)。大鼠早孕期弓形虫感染后,胎盘局部Th1型细胞因子表达增高,Th2型细胞因子表达降低,打破了正常妊娠所需的Th1/Th2平衡状态,使平衡倾向于Th1,可能是弓形虫孕期感染致不良妊娠的重要分子机制之一。

小檗碱对TNBS诱导的小鼠结肠炎的治疗作用研究

本研究探讨小檗碱(BBR)对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠克罗恩病(CD)模型的免疫调节作用。通过TNBS诱导小鼠造成CD模型,观察BBR对CD小鼠的疗效,并进一步探讨BBR治疗CD的作用及其机制。实验小鼠随机分为4组,分别为对照组、TNBS组(CD模型组)、CD模型BBR高剂量治疗组和CD模型BBR低剂量治疗组。于造模后疾病恢复期取各组脾脏和结肠,观察肠道大体损伤及病理情况,检测了结肠局部的炎症因子水平和脾脏中T细胞亚群数量变化、相关的细胞因子和转录因子的表达。BBR组与TNBS组相比,体重恢复时间提前、速度加快;结肠大体损伤及病理评分下降,结肠匀浆上清炎症因子的水平亦下降;脾脏中Th1、Th17及Treg细胞亚群的比例均有下降,相应的转录因子也有不同水平的降低。结果表明BBR治疗对TNBS诱导的小鼠结肠炎有效,其可通过免疫调节和抗炎症作用而治疗CD。

miRNA在多发性硬化发病中的研究进展

microRNA(miRNA)是一类分子长度为20～24个核苷酸的微小RNA,通常在转录后水平调控靶基因的降解或抑制翻译。越来越多的证据显示miRNA在自身免疫病中发挥重要的作用。多发性硬化(MS)是一种累及中枢神经系统的自身免疫性疾病,最近研究发现,多种miRNA在介导MS致病过程中起到关键的作用。本文将对目前已知的miRNA在MS中的研究作一综述。

睾丸局部溶脲脲原体感染对支持细胞锌指蛋白265表达的初步研究

目的:研究睾丸局部感染后支持细胞免疫调节功能与锌指蛋白265(zinc finger protein265,ZNF265)的变化情况。方法:以溶脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,UU)体内感染支持细胞后,分别在感染1、2、3周时间段运用RT-PCR、免疫组化和流式细胞术(FCM)方法比较感染组与对照组间ZNF265、IL-1α、IL-6、TGF-β和FasL的mRNA及蛋白水平的表达变化情况。结果:与对照组相比,体内感染处理后2周后支持细胞的ZNF-265表达下降,3周后又升高;TGF-β和FasL从感染2周开始表达上升,一直至3周仍处于上升趋势;感染2周IL-1α和IL-6表达分别上升;3周后则分别下降。结论:ZNF265在支持细胞被UU感染后会产生表达变化。

重组抗肿瘤坏死因子-α人鼠嵌合单克隆抗体对类风湿关节炎患者的疗效及其Th细胞亚群的影响

目的研究重组抗肿瘤坏死因子-α（TNF-α）人鼠嵌合单克隆抗体（anti—TNF rcMAb）对类风湿关节炎（RA）患者治疗效果及对患者外周血Th1、Th17、调节性T细胞影响。方法50例经严格筛选的RA患者按随机分配原则分为2组。联合治疗组（40例），给予anti-TNF rcMAb（3mg／kg）＋甲氨蝶呤治疗；对照组（10例）单独接受甲氨蝶呤治疗，分别于0、2、6、14周给药，于0、18周分别观察联合治疗组与对照组的相关临床指标的变化，在相应观察点做ACR20、50、70评分。同时，对比外周血中Th1、Th17、调节性T细胞的表达情况及相关转录因子T-bet、维甲酸相关孤核受体（ROR）C、叉头状转录因子3（Foxp3）的mRNA表达水平变化。采用t检验和χ^2检验或Ridit作统计学分析。结果治疗前后，联合治疗组ACR20、50、70较对照组均有所改善，尤其ACR20改善程度与对照组相比，差异有统计学意义（Z=1．671，P=0．00094）。联合治疗组患者外周血Th17细胞无显著变化[（0周（1．1±0．6）％；18周（1．1±0．3）％]、Th1细胞比例降低[0周（7．1±3．9）％；18周（4．2±2．8）％]，调节性T细胞比例明显升高[0周（91．5±0．8）％；18周（3．0±0．6）％，t=2．301，P=0．048]；对照组Th1比例下降[0周（9．1±3．1）％；18周（5．8±2．6）％]，调节性T细胞比例略升高[0周（1．2±0．6％）；18周（2．2±0．6）％]。2组Th17、Th1细胞的转录因子RORC、T-bet mRNA表达水平降低，调节性T细胞转录因子Foxp3的表达水平均升高。结论anti-TNF rcMAb联合甲氨蝶呤治疗对RA患者疗效显著，可能通过影响患者外周血Th细胞亚群发挥其治疗作用。