miRNA的生物学特性和功能

近年来,在小分子RNA中发现了一类与基因表达调节密切相关的分子—微RNA(miRNA)。miRNA是一类真核生物内源性小分子单链RNA,长度通常为21～22个核苷酸,能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对引起靶mRNA的降解或者抑制其翻译,从而对基因进行转录后表达的调控。miRNA具有控制基因表达及细胞分化、增殖和凋亡等多种功能,可能对基因功能研究、人类疾病防治及生物进化探索有重要意义。该文对miRNA的生物学特性及功能进行综述。

Hec1基因表达沉默对胃癌细胞凋亡及分裂周期的影响

目的研究癌症高表达(Hec1)基因表达沉默对胃癌细胞AGS分裂周期及细胞凋亡的影响。方法应用siRNA使Hec1基因表达下调,通过实时定量PCR检测Hec1mRNA表达抑制率;流式细胞仪检测细胞周期变化,经AnnexinV/PI双染色检测细胞凋亡率。结果胃癌细胞AGS转染Hec1siRNA48h后,Hec1基因表达抑制率达到90%;流式细胞仪检测发现,细胞G2/M期比例显著高于各对照组(P<0.05),细胞分裂被阻滞,出现明显凋亡;形态学检测发现,Hec1siRNA转染48h后处于分裂中期细胞高于各对照组,转染72h后细胞呈明显凋亡形态学改变。AnnexinV/PI双染色法显示Hec1基因沉默后细胞凋亡率高于对照(P<0.05)。结论抑制Hec1基因表达,可以明显阻滞细胞分裂并停留在有丝分裂中期,同时诱导细胞凋亡。

热CO_2气腹对结肠癌细胞的杀伤作用

目的体外研究热CO2气腹对结肠癌细胞的杀伤作用，探讨其作为结肠癌腹膜转移处理新方法的可能性。方法建立体外热CO2气腹实验模型，WST-8法检测热CO2气腹（42℃-44℃，2—4h）对结肠癌细胞株COLO205的细胞毒作用；流式细胞术、Hoechst 33342／PI荧光显微镜、透射电镜等明确细胞死亡机制；PT100温标及pH计检测细胞外环境温度和pH值改变；细胞外酸化抑制试验明确细胞外酸化的作用。结果细胞毒检测表明热CO2气腹对COLO205细胞有显著的杀伤作用；流式细胞术及细胞形态学观察表明，诱导细胞凋亡是其主要作用方式。热CO2作用后细胞外环境pH值从7．4降低至6．7；羟乙基哌嗪乙磺酸抑制细胞外酸化可显著抑制细胞杀伤。结论热CO2气腹通过诱导细胞凋亡杀伤结肠癌细胞；细胞杀伤作用与热作用及CO2酸化增敏有关。热CO2气腹具有应用于结肠癌腹膜转移处理的潜质。

钙黏蛋白12在结肠癌细胞株与结肠直肠癌组织中的表达及其影响

目的:研究钙黏蛋白12(cadherin-12,CDH-12)在结肠癌细胞株与结肠直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞株增殖、侵袭、迁移的影响。方法:应用实时PCR和Western印迹法在7株结肠癌细胞株中筛选CDH-12高表达细胞株;shRNA瞬转干扰高表达细胞株SW1116,Western印迹法验证干扰效果;CCK-8检测癌细胞增殖活性变化;transwell实验验证癌细胞迁移、侵袭能力的变化;组织芯片免疫组织化学技术检测CDH-12在结肠直肠癌组织中的表达。结果:实时PCR和Western印迹结果显示CDH-12在细胞株中表达,SW1116和LoVo两个细胞株高表达CDH-12,在成功下调SW1116细胞中CDH-12表达之后,SW1116结肠癌细胞株的增殖、迁移、侵袭能力较对照组明显下降;免疫组化染色结果显示,CDH-12在结肠直肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织中的表达。结论:CDH-12在结肠直肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,证实了CDH-12为癌基因的可能性;下调CDH-12在结肠癌细胞株SW1116的表达可明显抑制细胞的增殖、迁移、侵袭能力,显示其在肿瘤细胞生长和转移中的重要作用。

沉默CCL19对结直肠癌增殖、迁移、侵袭和促血管形成的影响

目的研究趋化因子CCL19在结直肠肿瘤中的作用。方法采用Real—TimePCR和Westernblotting技术筛选高表达CCL19的细胞株SW620细胞作为研究对象，并用siRNA沉默SW620中的CCL19基因。分别采用细胞增殖实验、Transwell迁移、侵袭实验和小管形成实验来检测SW620细胞的增殖、迁移、侵袭和促血管形成能力的变化。结果Westernblotting和Real—TimePCR证实SW620中CCL19相对其他细胞株高表达。经siRNA-CCL19干扰后，SW620细胞在48～120h内细胞增殖能力显著上升（P〈0．05），细胞迁移、侵袭能力亦明显上升（P〈0．05），促血管形成能力明显增强。结论SW620是相对高表达CCL19的细胞株，沉默CCL19基因后可以明显促进SW620细胞在体外的增殖、迁移、侵袭和促血管形成能力，因此认为CCL19在结直肠癌发展中起着抑制作用，并有应用于抗癌药物研究的前景。

趋化因子CCL19在结直肠癌中的表达和作用

目的观察趋化因子CCL19在结直肠癌组织中的表达,探讨其对结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法收集确诊为结直肠恶性肿瘤并手术切除患者(n=85)的肿瘤组织及癌旁正常组织,运用实时定量PCR和组织微阵列免疫组化技术检测CCL19的表达水平;以实时定量PCR、蛋白质印迹技术筛选高表达CCL19受体CCR7的人结直肠癌细胞株SW620细胞作为研究对象,并给予重组人CCL19(rh-CCL19)刺激,通过细胞增殖实验、划痕实验、Transwell实验来检测SW620细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果结直肠癌组织中的CCL19表达要明显低于癌旁正常组织(P<0.05),且CCL19表达量与肿瘤大小和浸润深度有关(P<0.01)。在CCR7高表达的SW620细胞中,加入rh-CCL19后,其细胞增殖、迁移及侵袭能力下降(P<0.05)。结论 CCL19在结直肠癌组织中的表达量低于癌旁正常组织,且与肿瘤大小和浸润深度有关;CCL19可抑制人结直肠癌细胞株SW620细胞增殖、迁移和侵袭能力,提示CCL19具有抑制结直肠癌的作用。

胆囊胆固醇息肉和胆囊结石发病关系的研究

目的探讨胆囊胆固醇息肉和胆囊结石的发生关系。方法选择2008年4～9月上海交通大学医学院附属瑞金医院外科微创中心行腹腔镜胆囊切除术病人62例,分别收集病人的胆石、胆汁及胆囊壁全层组织,其中胆固醇息肉31例,胆固醇胆囊结石18例,对照组13例。入院后上午餐前及餐后1h行B超胆囊三径测量,计算胆囊排空率对比显示胆囊功能。测定结石胆固醇含量及胆汁胆固醇、磷脂、胆汁酸浓度,胆囊壁组织做病理检查。结果胆固醇息肉组病人平均胆囊排空率为(47.3±18.6)%,较健康成人平均胆囊排空率(71.7±8.1)%明显降低,其差异有统计学意义(P<0.01),而胆固醇息肉组和胆固醇结石组病人平均胆囊排空率(47.6±23.7)%比较,差异无统计学意义。胆固醇息肉组胆汁胆固醇饱和指数为(1.0±0.2),较对照组胆固醇饱和指数(0.6±0.3)明显增高,其差异有统计学意义(P<0.01),而胆固醇息肉组和胆固醇结石组胆固醇饱和指数(1.0±0.2)比较,差异无统计学意义。31例胆固醇息肉病人中,合并胆囊结石13例,结石发病率为41.9%。结论胆囊胆固醇息肉的存在可以促使胆囊结石形成。

PHF10磷酸化多克隆抗体的制备与其在胃癌细胞PHF10磷酸化水平检测中的应用

目的 制备PHD指蛋白 10（PHF10）磷酸化多克隆抗体并用于PHF10蛋白的研究,探讨其在胃癌发生发展中的作用与机制.方法 结构预测后应用固相法合成磷酸化多肽.应用磷酸化多肽免疫家兔得到多克隆抗体,并利用Dotblot方法进行此抗体特异性效价的鉴定,结果显示PHF10最低阳性检测浓度为7.8μg/L.利用PHF10磷酸化多抗对8株胃癌细胞和胃黏膜永生化细胞PHF10蛋白磷酸化水平进行检测,胃癌细胞株PH F10磷酸化水平明显高于胃黏膜永生化细胞GES-1.结果 制备出的PHF10蛋白磷酸化多克隆抗体效价较高,可用于磷酸化PHF10蛋白的鉴定.结论 此多克隆抗体可用于PHF10蛋白的研究.