单纯型痉挛性截瘫的遗传学研究进展

遗传性痉挛性截瘫（hereditaryspasticparaplegia，HSP）是一组以对称性双下肢进行性肌无力和肌张力增高为主要表现的神经系统遗传变性病。国外HSP估计发病率为9．6／10万，国内尚无其流行病学调查结果。婴儿期至成年期皆可起病，病程可长可短。根据临床表现，该疾病可分为单纯型和复杂型HSP，单纯型指双下肢进行性痉挛性肌无力，可伴有膀胱功能障碍和深感觉异常，而复杂型是在同时存在单纯型的临床表现基础上，伴有其他神经症状（如白内障、视网膜色素变性、智力发育缺陷、共济失调等）。

酸敏感离子通道1α介导缺氧皮质神经元损伤及相关机制的探讨

目的探讨缺氧条件下阻断酸敏感离子通道1α(acid sensing ion channels 1α,ASIC1α)对大鼠皮质神经元存活及细胞内钙离子水平的影响,以及缺氧对皮质神经元ASIC1表达的影响。方法通过使用ASIC1α阻断剂、N甲基D门冬氨酸(NMDA)受体阻断剂、电压门控通道阻断剂,利用fura-3/AM荧光显像,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验等技术,比较观察对缺氧皮质神经元存活以及钙离子水平的影响,进一步利用Western印迹法检测ASIC1的表达变化。结果酸性环境中,缺氧皮质神经元形态明显改变,细胞内钙离子浓度升高;与加入NMDA受体阻断剂、电压门控通道阻断剂相比较,加入ASIC1α阻断剂明显抑制细胞内钙离子水平升高(P<0.05),对神经元起到保护作用。随缺氧时间的延长,神经元ASIC1蛋白表达增加。结论酸性环境中,缺氧皮质神经元的损伤与ASIC1α开放以及表达增加有关;阻断ASIC1α具有神经保护作用。

D2/D3受体激动药罗匹尼罗对抗鱼藤酮介导多巴胺能细胞凋亡的研究

目的:探讨D2/D3多巴胺受体激动药罗匹尼罗对多巴胺能细胞是否具有抗凋亡作用并研究其机制。方法:使用多巴胺能细胞株SH-SY5Y,以高剂量呼吸链抑制药鱼藤酮诱导细胞凋亡建立细胞凋亡模型。通过Hoechst染色观察并计数凋亡的细胞,应用免疫印迹(Westernblot)方法检测促凋亡基因caspase 9, cleaved caspase 9,cleaved caspase 3,PARP,cleaved PARP的表达。结果:高剂量鱼藤酮处理细胞24h后其凋亡比例明显升高,罗匹尼罗(10^(-5),10^(-4)mol·L^(-1))预处理2h能显著减少细胞凋亡的比例。免疫印迹方法显示10^(-4)mol·L^(-1)罗匹尼罗预处理2h能减少caspase 9,caspase 3,PARP的剪切。结论:罗匹尼罗能有效抑制鱼藤酮诱导细胞凋亡,其机制可能是通过抑制内源性通路中caspase 9剪切而实现的。

阿尔采末病模式生物研究进展

随着家族性阿尔采未病的研究的发展,人们建立了很多阿尔采末病的模式生物模型,如线虫、果蝇和小鼠模型,这些模型是研究阿尔采末病神经病理变化非常有效的模型。本文主要介绍了各种转基因阿尔采末病模型的研究特点,以及利用这些动物模型寻找新的神经保护药物和药物治疗靶点的研究进展。

氧化应激与神经退行性疾病

自由基氧化应激损伤学说是近年来研究的热点。对阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)、肌萎缩侧索硬化症(ALS)和亨廷顿病(HD)等神经退行性疾病特定的遗传和环境因素的研究表明,自由基增多、脂质过氧化、钙稳态失调、细胞色素C释放,是氧化应激增强的主要原因,最终导致神经元凋亡/死亡的发生。氧化应激的增强可能是这些神经退行性疾病基础。随着对神经元凋亡/死亡机制的认识深入,氧化应激在这些疾病中的地位和作用也受到极大的关注。

阿尔采末病的实验性治疗研究进展

随着人们对阿尔采末病(AD)发病机制的深入研究,未来AD的治疗也将从传统的抗乙酰胆碱酶疗法转变为针对淀粉样斑块形成,淀粉样多肽介导的毒性作用及神经原纤维缠结形成的多发病机制的研究。这篇综述将对包括以分泌酶为基础的治疗、免疫治疗、抗神经原纤维缠结的治疗以及传统中医治疗在内的各种新的实验性疗法做一个大体的论述。

阿尔茨海默病小鼠大脑和脊髓自噬变化的研究

目的研究阿尔茨海默病(AD)小鼠大脑和脊髓自噬变化情况。方法分离3月、8月和11月龄AD小鼠和同龄正常对照小鼠(n=6)的大脑和脊髓,左侧半脑和脊髓腰段用于组织切片的制备,右侧半脑及剩余脊髓用于提取蛋白。采用免疫组织化学方法观察脑内和脊髓淀粉样斑块;激光共聚焦显微镜观察自噬指标LC3在脑内和脊髓运动神经元中的分布情况;Westernblotting检测8月龄小鼠大脑及脊髓LC3-II和Beclin 1蛋白表达水平;Nissl染色计数脊髓运动神经元。结果免疫组织化学检测结果显示:3月龄AD小鼠脑内无明显淀粉样斑块沉积,8月龄时皮层和海马出现大量斑块,11月龄时斑块数量明显增多;AD小鼠脊髓腰段运动神经元内存在淀粉样蛋白,但未检测到细胞外斑块沉积。激光共聚焦显微镜观察结果显示:8月龄AD小鼠大脑皮层LC3阳性自噬小泡数量多于对照小鼠;3月龄AD小鼠脊髓运动神经元内存在LC3阳性自噬小泡,自噬小泡数量在8月龄和11月龄时明显增多。Western blotting结果显示:与8月龄对照小鼠比较,8月龄AD小鼠脑组织LC3-II蛋白表达升高(P<0.01),脑组织Beclin 1蛋白表达降低(P<0.05),脊髓LC3-II蛋白表达升高(P<0.05),脊髓Beclin 1蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。Nissl染色结果显示:与8月龄对照小鼠比较,8月龄AD小鼠脊髓腰段运动神经元数量无明显变化(P>0.05)。结论 AD小鼠大脑和脊髓存在自噬改变,自噬水平的变化可能与细胞内淀粉样蛋白有关。

缺血性脑卒中转化医学的研究与发展

转化医学是近年来医学相关领域提出的新概念，其试图在基础与临床之间建立更直接的联系．以促进基础研究向临床应用的转化．以及将临床问题向基础研究人员反馈和修正．从而更好地提高全面预防、快速诊断、有效治疗的总体水平．实现人类健康事业的真正发展。

原发性低钾型周期性麻痹致病基因筛查及其临床特征分析

目的筛查原发性低钾型周期性麻痹(HypoPP)患者的致病基因突变位点,并总结其临床特征。方法对35例HypoPP患者进行病史资料的搜集和相关的辅助检查,并应用PCR和DNA测序技术对SCN4A、CACNA1S、KCNJ2、KCNJ5、KCNE3基因进行检测。选取200名汉族健康志愿者作为正常对照。结果 35例患者均有发作性肌无力,29例患者血钾降低,6例患者发作期血钾正常。所有患者在补钾治疗后肌无力症状均得到缓解。2例家族性HypoPP患者分别存在SCN4A基因c.2024G>A和c.2015G>A突变,均为已报道突变。1例Andersen-Tawil综合征患者存在KCNJ2基因(c.919A>G)新突变,该患者的父母及其200名健康对照中未发现此突变。其余的29例散发和3例家族性患者未发现存在SCN4A、CACNA1S、KCNJ2、KCNJ5、KCNE3基因突变。结论低钾型周期性麻痹具有临床及遗传异质性,家族性低钾型周期性麻痹患者可优先进行SCN4A基因热点突变筛查。对于伴有发育异常及心律失常的周期性麻痹患者,可优先行KCNJ2及KCNJ5基因筛查。

饥饿诱导胶质瘤细胞自噬发生及Beclin-1表达的变化

目的探讨饥饿诱导大鼠胶质瘤细胞C6自噬的发生及自噬相关蛋白Beclin-1的变化。方法在培养大鼠胶质瘤细胞C6至对数生长期后,以无氨基酸培养液EBSS(Earle's balanced salt)代替DMEM培养液培养细胞,培养1、3、6、12、18h后收集细胞,采用蛋白质印迹分析和免疫荧光检测特异性标记自噬的微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain3,LC-3)以及自噬相关蛋白Beclin-1,采用透射电镜观察自噬体。结果饥饿处理1h后胶质瘤细胞C6中LC-3表达开始增加,并随着饥饿时间延长而逐渐增加,12h达到高峰后开始下降;免疫荧光下可见点状自噬体;透射电镜下观察到自噬体的形成。饥饿处理1h后胶质瘤细胞C6中Beclin-1表达开始升高,3h达到高峰后逐渐下降;免疫荧光下观察到Beclin-1表达增高。结论饥饿可以诱导胶质瘤细胞C6发生自噬,Beclin-1与饥饿诱导的胶质瘤细胞C6的自噬相关,为进一步研究Beclin-1在胶质瘤细胞自噬中的作用机制打下基础。

慢性睡眠剥夺对小鼠学习记忆及神经元自噬和凋亡的影响

目的 通过建立小鼠慢性睡眠剥夺模型,观察长期睡眠剥夺对小鼠学习记忆以及对神经元细胞自噬和凋亡的影响.方法 C57BL/6小鼠20只,应用随机数字表进行随机分组,睡眠剥夺组和对照组各10只.采用改良的多平台法对睡眠剥夺组小鼠建立慢性睡眠剥夺模型,2个月后通过IntelliCage全自动动物行为学检测系统检测小鼠的学习记忆能力,蛋白免疫印迹法检测微管相关蛋白-1轻链3 （LC3）-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达,采用激光共聚焦显微镜观察海马和皮质神经元内的自噬小体,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位末端标记法（TUNEL）染色观察海马和皮质神经元凋亡.结果 与对照组相比,睡眠剥夺组小鼠表现出明显的空间学习能力下降,其错误的来访率明显增高;此外,睡眠剥夺组小鼠脑组织LC3-Ⅱ（睡眠剥夺组1.681±0.186,对照组1.125±0.048,t=2.892,P=0.027 6）和Beclin-1（睡眠剥夺组1.144±0.048,对照组1.006±0.017,t=2.721,P=0.018 6）蛋白表达显著升高,海马和皮质脑区LC3阳性细胞数增多（海马睡眠剥夺组1.665±0.153,对照组0.819 ±0.071,t=5.024,P=0.002 4;皮质睡眠剥夺组1.925±0.175,对照组1.195±0.111,t=3.521,P=0.012 5）;同时,TUNEL染色显示睡眠剥夺组小鼠海马和皮质凋亡阳性细胞百分比（％）显著升高（海马睡眠剥夺组47.24 ±4.15,对照组19.26±3.72,t=5.025,P=0.007 4;皮质睡眠剥夺组42.25±1.25,对照组27.50±3.23,t=4.262,P=0.005 3）.结论 慢性睡眠剥夺能够造成小鼠学习记忆能力下降,并上调自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达,增加自噬小体数目,促进神经元凋亡,提示慢性睡眠剥夺造成的认知损害可能与其诱导自噬和细胞凋亡有关.

长时程深部脑刺激外侧苍白球对转基因Huntington病大鼠认知和运动的影响(英文)

我们研究了深部脑刺激(deep brain stimulation, DBS)对转基因Huntington病大鼠认知能力和运动功能的影响。实验结果表明:电极植入手术能改善Huntington病大鼠的认知能力,例如:在选择反应时间实验(choice reaction time task,CRT task)中,反应准确率增加,偏倚率减少。但对不同基因型大鼠,改善程度相同。在对大鼠外侧苍白球部(GPe)进行长时间深部脑刺激后,反应准确率增加,不同基因型大鼠的增加幅度有所不同。另外,深部脑刺激后, CRT实验中的运动时间和反应时间并没有变化。但是纯合子大鼠的舞蹈样运动明显改善。本研究结果表明深部脑刺激转基因Huntington病大鼠的GPe能明显改善其认知能力和运动功能,这预示着DBS在Huntington病的治疗中将有很大的应用前景。

携带PRRT2基因c.649dupC突变的发作性运动诱发性运动障碍临床表型总结

目的通过分析93例携带PRRT2基因c.649dupC突变的发作性运动诱发性运动障碍(paroxysmal kine⁃sigenic dyskinesia,PKD)患者的临床特点,总结该基因型的临床表型特征。方法收集93例携带PRRT2基因热点突变(c.649dupC)的原发性PKD患者临床资料,采用自行设计的发作性运动诱发性运动障碍登记表记录并整理,就其临床表型进行总结分析,并比较男性与女性以及家族性与散发性患者的临床表型差异。结果93例携带PRRT2基因热点突变的PKD患者男女比例为2.72∶1,平均发病年龄为(9.93±3.52)岁,平均就诊年龄为(23.98±8.92)岁;单纯型54例(58.06%)、复杂型39例(41.94%);87例(93.55%)发作前有预感;发作形式包括肌张力障碍44例(47.31%),舞蹈样动作5例(5.38%),或混合发作(47.31%)。散发性58例(62.37%)、家族性35例(37.63%),外显率为67.05%。62例(66.67%)服用抗癫药物患者中46例(74.19%)症状完全控制,14例(22.58%)发作频率下降但偶有发作,2例(3.23%)未见明显缓解。男性组面部累及比例低于女性组(P=0.017),家族性组面部累及比例低于散发性组(P=0.011)。结论PRRT2基因c.649dupC突变具有基因型-表型异质性,该基因型更容易表现为复杂型PKD,具有外显不全的遗传特点。

干细胞临床治疗的安全性

干细胞是未完全分化的细胞，具有一定的可塑性。它们既能不断增殖，也能在某种刺激下转变为祖细胞进而分化成各种细胞类型，也就是说，干细胞的主要特征是自新和多潜能分化。因此，干细胞成为理想的细胞移植来源。

酸性环境介导皮质神经元损伤及阻断酸敏感离子通道1α的神经保护作用

目的探讨脑梗死模型中酸性环境能否介导皮质神经元损伤及阻断酸敏感离子通道1α(acidsensing ion channels1α,ASIC1α)的神经保护作用。方法制作缺氧细胞模型、脑梗死动物模型,检测ASIC1α阻断剂对乳酸脱氢酸(lactate dehydrogenase,LDH)释放率、大鼠行为学、脑梗死体积以及ASIC1蛋白表达的影响。结果酸性环境可以损伤皮质神经元,加重缺氧对细胞的毒性作用,经侧脑室注射ASIC1α阻断剂可以改善脑梗死大鼠的行为学改变,梗死体积明显减小(P<0.05);随梗死时间延长,缺血半暗带ASIC1表达增加,在缺血后24h表达量较明显。结论酸性环境导致皮质神经元损伤,其损伤机制与缺血后神经元ASIC1α开放以及表达增加有关;阻断ASIC1α具有神经保护作用。

帕金森病性别差异的生物学机制

帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是一种比较常见的神经退行性疾病，多发于中老年期，以进行性中脑黑质多巴胺能神经元损害为特点。PD的病因和发病机制尚未完全明确，流行病学调查显示其发病率男性高于女性，并且在疾病的起始、症状体征以及对治疗的反应均存有性别差异。我们主要论述PD的性别差异及其生物学机制的研究情况。

肌萎缩侧索硬化小鼠脊髓铁离子浓度及铁离子螯合剂的神经保护作用

目的探讨肌萎缩侧索硬化(ALS)小鼠脊髓中铁离子的异常变化和铁离子螯合剂的神经保护作用及其可能机制。方法SOD1-G93A转基因小鼠腹腔注射铁离子螯合剂VK-28(5mg·kg-1)及M30(5mg·kg-1)后,记录小鼠发病及生存时间的改变。试剂盒测定脊髓组织中铁离子和丙二醛(MDA)浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活性。显微镜下观察脊髓运动神经元的状态及胶质细胞的激活。结果与正常对照组小鼠相比,90和120日龄转基因小鼠的脊髓中铁离子浓度分别增高42%(P<0.05)和82%(P<0.01)。与转基因模型组相比,铁离子螯合剂VK-28和M30能够降低铁离子浓度(μg·g-1蛋白,90d:1784±s132,2103±983vs.2398±243,均P<0.05;120d:2080±118,2483±134vs.3180±201,均P<0.01),延迟其发病时间[(116±4)d,(110±4)dvs.(104.5±1.7)d;均P<0.05]及其生存期[(139±4)d,(134.6±2.1)dvs.(126.5±2.2)d;P<0.01,P<0.05],并使小鼠脊髓前角运动神经元存活的数目明显增多(P<0.01),减少脊髓组织中增多的MDA并使降低的SOD活性增加(P<0.05,P<0.01),以及抑制星形胶质细胞和小胶质细胞的激活(P<0.01)。结论SOD1-G93A转基因ALS小鼠脊髓组织铁离子浓度升高,VK-28及M30可能通过降低脊髓内异常升高的铁离子浓度和减少氧离子自由基而发挥神经保护作用。

SOD1基因突变引起的家族性ALS发病机制研究进展

肌萎缩侧索硬化症(Amyotrophic lateral sclerosis, ALS)是运动神经元疾病(motor neuron disease, MND)中最为常见的类型,表现为脊髓前角和脑干运动神经元以及大脑皮质锥体细胞的渐进性变性,从而引起上、下运动神经元均受损.……

阿尔采末病免疫治疗的动物实验与临床试验进展

阿尔采末病是老年痴呆发生的主要原因,如何控制和缓解阿尔采末病是近年来研究热点。免疫治疗在清除脑组织淀粉样蛋白和改善认知功能方面有明显优势,随着一系列动物实验和临床试验的开展,免疫治疗应用于阿尔采末病将成为可能。本文将从主动免疫治疗和被动免疫治疗2个方面,综述阿尔采末病免疫治疗的动物实验和临床试验研究进展。