全生物化组织工程血管构建的初步研究

为探索在体外初步构建全生物化组织工程血管,采用以酶消化为主的方法制备猪颈总动脉脱细胞支架,再种植犬胸主动脉的平滑肌细胞,培养四周。经组织学染色和电镜观察显示:在猪颈总动脉脱细胞支架上,犬血管平滑肌细胞大量生长,组织学和电镜结构与正常血管壁结构类似。结果表明,我们初步成功地构建了全生物化组织工程血管,为临床血管替代物的基础研究提供了有意义的实验资料。

大鼠选择性神经损伤实验模型的建立

目的 :选择性切断脊神经前根和后根 ,建立单纯运动神经和感觉神经损伤的动物模型。方法 :选用成年SD大鼠 ,切断一侧L4 ～L6 脊神经前根、后根或坐骨神经 ,观察大鼠行为学变化 ,测定萎缩肌肉湿重 ,并作出综合评价。结果 :2、4、10周三时段内各组行为学变化结果比较 ,失神经支配骨骼肌萎缩程度以坐骨神经切断组最为明显 ,前根切断组次之 ,后根切断组再次。结论 :选择性切断大鼠前根或后根完全能模拟单纯运动神经或者感觉神经的损伤效应 。

切应力条件下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞整合素β_1和F-actin的变化

目的 探讨与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞力学信号转导的机制 ,研究切应力对联合培养的内皮细胞表面整合素 β1和F actin的影响。方法 应用免疫荧光双重标记、激光共聚焦扫描显微镜和计算机图象分析等技术 ,观察了在 2Pa层流切应力的作用下 ,与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞表面整合素 β1的含量及细胞骨架F actin的变化 ,时相点分别取 1h、6h、12h和 2 4h。同时 ,以静态条件下联合培养的内皮细胞为对照组。结果 静态条件下联合培养的内皮细胞表面整合素 β1含量少 ,F actin含量亦少 ;在 2Pa层流切应力的作用下 ,随着时间延长 ,整合素 β1表达逐渐增多 ,并且有沿F actin分布的趋势 ,在 12h达到峰值 ,后又下降 ;F actin含量持续增加直至 2 4h。结论 结果提示整合素 β1作为重要的粘附分子 ,与细胞骨架F actin的相互协作 。

卡托普利对主动脉缩窄性高血压大鼠主动脉PTEN表达的影响

为探讨肿瘤抑制因子PTEN在血管紧张素II(AngII)介导的高血压动脉重建中的作用 ,观察了PTEN在高血压主动脉中的表达及血管紧张素转换酶抑制剂卡普托利对其表达的影响。缩窄SD大鼠主动脉复制高血压模型 ,将动物分为对照组 ,高血压组和高血压 +卡托普利组。术后 2 8d ,取主动脉以RT PCR法测定PTENmRNA的表达。免疫组化法检测PTEN蛋白在主动脉的表达及定位。结果显示 ,对照组主动脉PTENmRNA表达显著高于高血压组 ,给予卡托普利的高血压大鼠主动脉PTENmRNA表达显著高于高血压组 ,与对照组相似。高血压大鼠主动脉PTEN免疫染色强度低于卡托普利组和对照组。结果表明 ,PTEN在高血压主动脉的表达减少 ,卡普托利逆转了高血压诱导的PTEN表达减少。提示血管紧张素II和压力可能参与PTEN表达的调控 ,PTEN在高血压诱导的动脉重建过程中发挥作用。

肝前型门静脉高压兔门脉系统血管应力的研究

门脉高压症是肝硬化常见的病理生理改变。本研究采用两步门静脉结扎法制备门脉高压症(PHT)兔模型;检测不同时间点门静脉及小肠系膜曲张静脉的直径,不同程度曲张静脉及门静脉主干的血流动力学和应力(压力、剪应力和周向应力)大小。随着小肠系膜曲张静脉直径的增大,PHT兔门脉与小肠系膜静脉压力显著增加,剪应力减小,周向应力增大;两部位间应力(压力、剪应力和周向应力)呈直线正相关。研究表明,门脉高压时门脉系统处于低剪应力与高周向应力状态,这可能是门脉高压症并发症发生的力学基础。

切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞PDGF-B含量的变化

目的 探讨切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞 (VSMC)对内皮细胞 (EC)PDGF B含量变化的影响 ,为组织工程血管和预防血管移植物再缩窄研究提供一些实验资料。方法 应用免疫细胞化学方法和图像分析技术 ,以静态条件下单独培养的EC和联合培养的EC为两对照组 ,研究了切应力作用下单独培养的EC和与VSMC联合培养EC的PDGF B含量的变化。结果 静态条件下联合培养EC的PDGF B的含量比单独培养的EC减少 ;切应力作用下 ,联合培养EC的PDGF B含量在切应力作用 1h左右有瞬时上升 ,随后下降至低于联合培养条件下的静态水平 ,且瞬时上升的时间点比单独培养的EC提前。结论 切应力作用下 ,与VSMC联合培养EC的PDGF B含量下降 ,这可能有利于抑制VSMC的增殖 。

低切应力对体外培养动脉壁细胞PDGF表达的影响

为了研究切应力对完整血管的生物学作用 ,探讨应力引起血管重建过程中生长因子的变化 ,用血管应力培养系统体外培养猪颈总动脉 ,通过免疫组织化学、抗体夹心法酶联免疫吸附测定实验 (EL ISA)和计算机图像分析等方法 ,观察了低切应力作用下动脉壁细胞 PDGF- A、PDGF- B表达变化情况。结果显示 ,低切应力作用下体外培养动脉 EC中 PDGF- B及 VSMC中 PDGF- A的合成与分泌皆增加。PDGF表达上升 ,促进了 VSMC表型转换与增殖。在低切应力引起的血管重建中 ,这一机制可能起着重要作用。

切应力对支架边缘内皮细胞生长因子表达的影响(英文)

背景:支架植入血管后,支架及其附近血液动力学发生了变化。切应力对支架边缘内皮细胞生长因子血小板源性生长因子A,B和碱性纤维生长因子的分泌表达与未植入支架时是否不同?目的:观察切应力对支架边缘内皮细胞生长因子表达的影响。设计:观察对比实验。单位:皖南医学院弋矶山医院心内科,上海交通大学医学院生物力学实验室。材料:实验于2006-04/10于上海交通大学医学院生物力学实验室完成。胰蛋白酶(Hyclon公司),M199培养基(高糖,Gibco BRL公司);胎牛血清(杭州四季青生物工程材料研究所),血小板源性生长因子,Heparin,Hepes均为Sigma公司产品;胸腺嘧啶(Thymide)、兔抗人Ⅷ因子单克隆抗体、生物素化马抗兔IgG与碘化丙锭为Sigma公司提供;青/链霉素为上海生工公司提供;新生儿脐带由上海市第五人民医院产房提供;Trizol(Invitrogene公司),RT-PCR试剂盒(Fermentas公司),目的基因引物由上海生工公司合成。方法:改进传统平行平板流动腔,设计成矩形和具有切应力梯度两种模型的平行平板流动腔,分别作为矩形受力组和梯度受力组(具有切应力),同时设立静止组,前两组分别施加11.37dyne/cm2和5.66￣14.38dyne/cm2的剪切力,分别受力3,6,12h。主要观察指标:采用RT-PCR测定各组受力不同时间点人脐静脉内皮细胞中血小板源性生长因子A,B与碱性纤维生长因子mRNA的表达变化。结果:与静止组相比,梯度受力组细胞在受力3h血小板源性生长因子A,B与碱性纤维生长因子mRNA表达水平均已达到峰值,且血小板源性生长因子AmRNA表达水平延续至12h,矩形受力组上述各生长因子的表达峰值均出现于受力6h。结论:支架植入术后继发于剪切力改变而导致血小板源性生长因子A,B及碱性纤维生长因子诱导增加可能是引起支架内再狭窄过程中血管内膜增生的原因之一。