人体组织学教学的实践探讨

人体组织学的内容需要借助于显微镜技术加以描述，名词繁多，且不能直观感知，刚接触基础医学知识的二年级学生普遍认为是一门较枯燥的学科，学习积极性不高，因此如何在教学中充分利用人体组织学的特点，吸引学生的注意力，提高学生对人体组织学重要性的认识，让学生们轻松自觉地学习人体组织学知识，是所有人体组织学教学工作者需要面对的挑战。

人细胞核自身抗原精子蛋白的重组表达及多克隆抗体制备

目的:获得纯化的人细胞核自身抗原精子蛋白(hNASP)及其多克隆抗体,为其功能研究做准备。方法:提取人睾丸组织总RNA,用自行设计的引物,PCR扩增hNASP的一段序列,PCR产物经TA克隆后,通过BamHⅠ和HindⅢ双酶切克隆到pET-28 a(+)中。在E.coliBL21中,用异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达H is融合蛋白。样品超声处理后,经镍离子亲和树脂进行亲和层析纯化。用纯化的重组蛋白免疫家兔获取多克隆抗体。结果:对表达重组蛋白的质粒进行DNA测序以及表达的重组蛋白经过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,证实获取了目的蛋白。ELISA证实免疫家兔后获得高效价的抗体。结论:用上述原核生物表达的方法可以得到纯化的hNASP蛋白,用纯化的蛋白免疫家兔也能获得高效价的抗体。

利用流式分选技术富集小鼠单倍体精子细胞

目的:建立并完善流式分选单倍体精子细胞的方法。方法:制备小鼠睾丸单细胞悬液;活细胞DNA染料Hoechst 33342孵育细胞;利用流式细胞术分选富集单倍体圆形精子细胞或长型精子细胞;在分选富集得到的精子细胞中,通过RT-PCR方法检测多种组蛋白乙酰化修饰酶基因的表达情况;检测组蛋白乙酰基转移酶抑制剂姜黄素对上述基因表达的影响。结果:用Hoechst 33342染色结合流式分选方法可以高效地富集高纯度的精子细胞,还可以进一步纯化圆形精子细胞与长型精子细胞。RT-PCR结果表明,与睾丸整体组织相比,精子细胞中组蛋白乙酰化修饰酶基因的表达具有特异性,并受姜黄素处理的影响。结论:该流式分选方法提高了富集单倍体精子细胞的效率和纯度,为阐明精子形成的机制提供了简便易学、适于推广的技术平台。

重组Zonadhesin蛋白D4结构域对小鼠体外受精的影响

目的:研究Zonadhesin蛋白D4domain在受精过程中的作用。方法:将小鼠Zonadhesin D4结构域分亚结构域(VWDsubdomain及余C-端片段)克隆,在E.coli诱导表达目的蛋白,将纯化重组蛋白片段为抗原,制备兔抗鼠D4结构域多克隆抗体,免疫印迹法、精子间接免疫荧光染色鉴定多克隆抗体的特异性及D4结构域在小鼠精子表达。用多抗处理获能小鼠精子,然后与小鼠超排卵子进行体外受精及精子-透明带结合实验。结果:D4亚结构域成功克隆表达,制备了能特异性识别精子天然Zonadhesin D4的多克隆抗体,多抗处理组精子与卵透明带结合数与对照组差异无统计学意义,卵子的受精率也无明显差异。结论:抗重组Zonadhesin D4结构域的多抗对小鼠体外受精无抑制作用。

雌激素对青春期大鼠Sertoli细胞及血睾屏障的影响

目的:研究在Sertoli细胞分化和成熟阶段,外源性雌激素对Sertoli细胞FasL表达以及血睾屏障的影响,进一步讨论影响血睾屏障的相关因素及其可能机制。方法:体内体外分别给与青春期SD大鼠大剂量的雌激素(二乙烯雌酚和雌二醇),运用免疫荧光方法和Western印迹观察Sertoli细胞内FasL的表达以及电镜下血睾屏障结构的变化。结果:外源性大剂量雌激素作用下,Sertoli细胞内FasL表达量明显增强(P<0.05);同时出现Sertoli细胞膜和生精上皮血睾屏障部位FasL的表达量上升;在18d实验组,电镜显示示踪剂镧透过血睾屏障,到达生精上皮全层。结论:外源性大剂量雌激素能使Sertoli细胞内FasL的表达量和分布区域发生改变并影响血睾屏障的结构。

戊四氮慢性致痫大鼠海马星形胶质细胞的激活

目的：研究慢性癫痫大鼠点燃时海马星形胶质细胞的激活情况。方法：采用免疫组化和双重免疫荧光标记法观察戊四氮慢性癫痫大鼠点燃后海马NF-kBp65和胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的变化。结果：癫痫发作1 h,CA1区出现NF-kBp65-IR阳性细胞,4 h胶质细胞p65-IR维持在高水平,并持续至发作后12 h；发作1 h,CA1区GFAP-IR开始增强,4～8 h观察到明显浓染和突起增多的GFAP-IR阳性细胞,并持续至24 h；GFAP/p65一IR阳性细胞发作后1 h可观察到,4 h达最高峰,24 h恢复至对照组水平。结论：戊四氮致痫大鼠点燃时,星形胶质细胞的这种早期而持续的激活提示该细胞在慢性癫痫的复发中可能起到重要作用。

小鼠杀菌性或通透性增强蛋白片段BPI_(889-1497)在大肠杆菌的表达及其抗血清的制备

英国科学家Weiss等1978年首次发现并描述了杀菌性或通透性增强蛋白（bactericidal/permeability increasing protein,BPI）。成熟的BPI蛋白由456个氨基酸组成,相对分子质量（Mr）大约56 000。BPI蛋白最早在人中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒中分离得到。研究表明,BPI在人中性粒细胞中占较大比重,其含量可以达到细胞总蛋白的0.15%～1.00%,

磷酸二酯酶5(PDE5)在人增生前列腺移行带中的表达及分布

目的:探讨磷酸二酯酶5在人前列腺移行带组织中的表达与分布。方法:应用免疫组化SP法,选择前列腺增生患者34例,检测PDE5表达及分布。结果:34例标本中PDE5均呈阳性表达。PDE5在前列腺移行带的腺组织上皮普遍呈中等表达,间质部分弱表达。结论:PDE5在人增生前列腺组织中分布,但分布不均,表明不同PDE5可能行使不同的功能。