清胰汤调控PI3K/AKT信号通路对重症急性胰腺炎大鼠的干预效果

目的分析清胰汤通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对重症急性胰腺炎大鼠的干预效果。方法选取48只健康SPF级SD大鼠,选取8只大鼠分别作为对照组和假手术组,另外32只大鼠建立重症急性胰腺炎模型,其中32只大鼠建模成功,并随机分为模型组、清胰汤组,每组16只。观察4组大鼠病理组织学、淀粉酶、炎性细胞因子、尿素氮、肌酐、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、PI3K/AKT通路相关mRNA表达量、PI3K/AKT通路。结果与对照组比较,假手术组、模型组、清胰汤组6 h血清淀粉酶、尿素氮、肌酐升高,12 h血清淀粉酶、尿素氮、肌酐升高(P<0.05);与假手术组比较,模型组6 h血清淀粉酶、尿素氮、肌酐升高,12 h血清淀粉酶、尿素氮、肌酐升高,清胰汤组6 h血清淀粉酶、尿素氮、肌酐降低,12 h血清淀粉酶、尿素氮、肌酐降低(P<0.05);与模型组比较,清胰汤组6 h血清淀粉酶、尿素氮、肌酐降低,12 h血清淀粉酶、尿素氮、肌酐降低(P<0.05)。与对照组比较,假手术组、模型组、清胰汤组6 h TNF-α、IL-6、MDA升高,IL-4、SOD降低,12 h TNF-α、IL-6、MDA升高,IL-4、SOD降低(P<0.05);与假手术组比较,模型组6 h TNF-α、IL-6、MDA升高,IL-4、SOD降低,12 h TNF-α、IL-6、MDA升高,IL-4、SOD降低,清胰汤组6 hTNF-α、IL-6、MDA降低,IL-4、SOD升高,12 hTNF-α、IL-6、MDA降低,IL-4、SOD升高(P<0.05);与模型组比较,清胰汤组6 h TNF-α、IL-6、MDA降低,IL-4、SOD升高,12 h TNF-α、IL-6、MDA降低,IL-4、SOD升高(P<0.05)。与对照组比较,假手术组、模型组、清胰汤组PI3K mRNA、AKT mRNA、PI3K、AKT表达量升高(P<0.05);与假手术组比较,模型组、清胰汤组PI3K mRNA、AKT mRNA、PI3K、AKT表达量升高(P<0.05);与模型组比较,清胰汤组PI3K mRNA、AKT mRNA、PI3K、AKT表达量降低(P<0.05)。结论清胰汤可改善重症急性胰腺炎模型大鼠病理组织学,降低炎性反应、尿素氮及肌酐,其作用机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。

活血清解汤对重症急性胰腺炎大鼠肠道免疫屏障功能的影响及机制

背景与目的:重症急性胰腺炎(SAP)易并发肠道免疫屏障功能障碍,笔者前期发现活血清解汤可缓解SAP,但其作用是否与肠道免疫屏障功能有关尚不清楚。因此,本研究探讨活血清解汤对SAP大鼠肠道免疫屏障功能的作用及机制。方法:将SD大鼠随机分成假手术组、SAP模型组(模型组)、SAP模型+活血清解汤治疗组(治疗组),SAP模型采用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射法诱导,治疗组造模后给予活血清解汤灌胃,假手术组与模型组给予等体积生理盐水代替。分别在术后6、12 h处死动物,ELISA检测各组血清中的促炎因子TNF-α、抗炎因子IL-4、血淀粉酶及脂肪酶的指标变化;HE染色检测胰腺及小肠组织的病理变化;qRT-PCR及Western blot检测小肠组织巨噬细胞M1型标志物iNOS及M2型标志物Arg-1的表达。将大鼠小肠巨噬细胞分别用牛磺胆酸钠、活血清解汤、牛磺胆酸钠+活血清解汤处理,以无处理的大鼠小肠巨噬细胞为空白对照,用qRT-PCR及Western blot检测各组细胞NF-κB、iNOS、TNF-α、IL-4、Arg-1、TIPE2和PPAR-γ的表达。结果:体内实验中,与假手术组比较,模型组与治疗组术后的TNF-α、IL-4、血淀粉酶、脂肪酶水平均有不同程度升高(部分P<0.05),但治疗组TNF-α、血淀粉酶、脂肪酶升高的程度明显低于模型组,而IL-4升高的水平明显大于模型组(均P<0.05);模型组与治疗组术后胰腺与小肠组织均出现明显的病理损伤,但治疗组的损伤程度小于模型组,且随时间延长,模型组的损伤程度加重,治疗组则减轻,模型组与治疗组胰腺与小肠组织病理评分差异均有统计学意义(均P<0.05);iNOS蛋白与mRNA的表达在模型组小肠组织中表达明显升高,而在治疗组的小肠组织中明显降低(均P<0.05),Arg-1蛋白与mRNA的表达模型组小肠组织后期(12 h)明显升高,而在治疗组的早期(6 h)与后期(12 h)均明显升高,且升高程度大于模型组(均P<0.05)。体外实验中,单独牛磺胆酸钠处理后的大鼠小肠巨噬细胞的NF-κB、iNOS、TNF-α蛋白与m RNA表达水平明显上升(均P<0.05),而Arg-1、IL-4、TIPE2、PPAR-γ蛋白及mRNA表达无明显变化(均P>0.05);单独活血清解汤处理后,大鼠小肠巨噬细胞的Arg-1、IL-4、TIPE2及PPAR-γ蛋白及m RNA表达水平明显升高(均P<0.05),而NF-κB、iNOS、TNF-α蛋白及mRNA表达无明显变化(均P>0.05);与单独牛磺胆酸钠处理比较,牛磺胆酸钠+活血清解汤处理的大鼠小肠巨噬细胞的NF-κB、iNOS及TNF-α蛋白及mRNA表达水平明显下降,而Arg-1、IL-4、TIPE2及PPAR-γ蛋白及mRNA表达水平明显增加(均P<0.05)。结论:中药活血清解汤对SAP大鼠的肠道免疫屏障功能有保护作用,其作用机制可能与调控小肠巨噬细胞由M1型向M2型转化,促进抗炎因子表达,抑制促炎因子的释放,进而缓解全身炎症反应有关。