CD8+T细胞在葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠急性结肠炎中的致病性研究

目的·通过葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠急性结肠炎模型,观察CD8+T细胞在小鼠急性结肠炎发病中的作用。方法·给予野生型C57BL/6小鼠和CD8敲除(CD8-/-)小鼠饮用质量浓度为2%的DSS溶液诱导急性结肠炎模型,观察体质量动态变化、结肠长度及病理改变、肠炎疾病活动度变化。诱导10 d后收集小鼠远端结肠,抽提总RNA,采用实时荧光定量PCR检测肠炎小鼠结肠组织中炎症细胞因子Il1b、Il6、Il17a、Ifng、Tnf、Il10和Tgfb1 mRNA表达水平。通过苏木精-伊红(H-E)染色评估结肠组织病理学改变,通过免疫荧光染色观察结肠组织中CD8+T细胞的浸润情况。采用质量浓度为3%和4%的DSS溶液诱导肠炎后观察小鼠存活率。结果·2%DSS诱导急性结肠炎后,CD8-/-小鼠体质量下降速度较慢,在第9日呈现上升趋势,CD8-/-小鼠结肠组织病理改变较轻;与野生型小鼠比较,CD8-/-小鼠结肠中促炎症细胞因子Il1b、Il6、Il17a、Ifng和Tnf mRNA表达水平较低(均P<0.05)。使用2%DSS诱导结肠炎后第10日,免疫荧光染色检测结果显示,野生型小鼠肠道固有层中浸润大量CD8+T细胞,与未造模小鼠的差异具有统计学意义(P=0.001)。经3%和4%DSS诱导急性结肠炎后,WT小鼠存活率为37.5%和0,CD8-/-小鼠存活率为66.7%和100%;与WT小鼠比较,CD8-/-小鼠存活率高(P=0.025,P=0.001)。结论·CD8+T细胞促进DSS诱导的小鼠急性结肠炎的发生。

STAT3对免疫缺陷鼠过继转移CD8^+T细胞的调节作用

目的·探讨转录因子STAT3对CD8^+T细胞在免疫缺陷Rag1^(-/-)小鼠中的增殖及活化的内在调控作用。方法·流式分选CD45.1小鼠和CD45.2-CD8(ΔStat3)小鼠的Na?ve CD8^+T细胞,等数量混合并用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)标记后尾静脉过继转移到Rag1^(-/-)小鼠。细胞转移10 d后,分离脾脏和淋巴结并收集细胞,用流式细胞术检测脾脏、淋巴结中的CD8^+T细胞的比率、增殖情况;用佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)和离子霉素(ionomycin,Ion)刺激后检测细胞因子和杀伤性分子的表达情况;运用t检验分析Stat3敲除后对CD8^+T细胞活化和效应分子表达的影响。结果·在脾脏、腹股沟和肠系膜淋巴结中,野生型(wild type,WT) CD8^+T细胞的比例显著高于ΔStat3 CD8^+T细胞(76.2%vs23.4%,82.1%vs 17.4%,64.5%vs 32.3%,均P=0.008);腹股沟淋巴结中WT CD8^+T细胞活化的CD44^+T细胞比例和细胞数量显著高于ΔStat3 CD8^+T细胞(均P=0.008)。脾脏、腹股沟淋巴结和肠系膜淋巴结中,WT CD8^+T细胞的TNF-α、IFN-γ、Gra B、CD107a的表达水平显著高于ΔStat3 CD8^+T细胞(均P<0.05)。结论·Rag1^(-/-)小鼠过继转移Na?ve CD8^+T细胞是研究信号通路/转录因子调控CD8^+T细胞功能的理想体内实验模型,STAT3可内在调控CD8^+T细胞的活化、增殖和效应功能。