不同预激方案诱导白血病细胞株凋亡的机制研究

目的:旨在了解不同预激方案作用于急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞株HL-60和急性单核细胞白血病(acute monocytic leukemia,AMOL)细胞株U937的体外效应及其机制。方法:设置对照组(未给予药物处理),阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C)、阿克拉霉素(aclarubicin,Acla)和米托蒽醌(mitoxantrone,Mito)单药组,Ara-C联合Acla组以及Mito联合Ara-C的双药联合组,粒细胞集落刺激因子(granulocyte-colony stimulating factor,G-SCF)预激联合Ara-C和Acla(CAG方案)以及G-CSF预激联合Mito和Ara-C(MAG方案)的三药联合组。药物处理各组细胞24和48h后,观察细胞学形态;采用CCK-8法检测各组2种白血病细胞的生长抑制率;FCM检测各组的细胞凋亡率和细胞分化抗原CD11b的表达率;应用FCM检测与细胞凋亡相关的线粒体膜电位(JC-1法)及caspase-3活性的变化。结果:CAG和MAG方案作用48h后,HL-60和U937细胞形态学变化表现为凋亡小体明显增多;各组药物作用48h后,HL-60和U937细胞的生长均受到抑制,三药联合组的细胞存活率明显下降,并呈时间依赖效应。除Ara-C单药组外,其余各组U937细胞的凋亡率均高于HL-60细胞;各组之间细胞分化抗原CD11b的表达率差异无统计学意义。药物作用后,HL-60和U937细胞线粒体膜电位降低,且三药联合组明显高于单药组和对照组(P<0.05);三药联合组和单药组的caspase-3荧光强度较对照组显著增强(P<0.05)。结论:CAG和MAG方案主要通过诱导白血病细胞凋亡而发挥治疗效应,其作用机制可能与降低线粒体膜电位继而激活caspase-3从而诱导白血病细胞凋亡有关。

HAG方案促白血病细胞株凋亡的机制

目的探讨HAG方案对白血病细胞株HL．60和U937的体外作用效果及机制，为临床急性白血病治疗提供指导。方法以HL-60及U937为实验模型，体外分为单药组，阿糖胞苷联合高三尖杉酯碱组（HA）和以粒细胞集落刺激因子（G-CSF）为预激的HAG三药组，分别作用24、48h后收集细胞，进行细胞计数、细胞形态观察，CCK-8法检测不同药物的组合对两种细胞株的生长抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡标志AnnexinV和PI、细胞分化抗原cD11b、线粒体膜电位JC-1及Caspase．3。结果G．CSF预激24h后，S期细胞明显增多（P〈0．05）。经HAG作用48h后，HL-60和U937细胞数量明显减少，形态观察显示凋亡小体增多，早期凋亡标志AnnexinV明显增高，三药联合组与单药组及两药联合组比较差异有统计学意义（P〈0．05），且对U937细胞株凋亡作用优于HL-60细胞株。CD11b在三组间表达差异无统计学意义（P〉0．05）。药物作用后HL-60和U937线粒体膜电位崩塌的细胞比例增加，三药组显著高于单药组及对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；药物作用后Caspase．3被激活，三药组及单药组与对照组相比，Caspase．3的荧光强度显著升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HAG的体外研究证实该方案主要通过降低线粒体膜电位途径从而起到诱导肿瘤细胞凋亡的作用。

斑马鱼：人类血液疾病的良好模型

斑马鱼（zebrafish,Danio rerio）又名蓝条鱼、花条鱼等,原产于南亚热带,观赏鱼,属鲤科短担尼尔属.一百多年前,由于其胚胎透明,易于观察与操作,斑马鱼成为研究胚胎形成与发育的经典模型.

2-脱氧-D-葡萄糖对非霍奇金淋巴瘤细胞株Namalwa和SU-DHL-4糖酵解通路的干预研究

目的:研究糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)对人类非霍奇金淋巴瘤细胞株Namalwa、SU-DHL-4的作用效应及机制。方法:采用锥虫蓝拒染法检测细胞增殖,D-葡萄糖[HK法]检测试剂盒检测葡萄糖浓度,乳酸测试盒检测糖酵解途径终产物乳酸含量,反转录实时定量PCR(RTQ-PCR)检测糖酵解途径关键酶基因的转录水平,流式细胞术检测细胞周期。以健康人外周血梯度离心法分离所得的淋巴细胞为正常对照组。结果:淋巴瘤细胞株Namalwa和SU-DHL-4中糖酵解相关基因HK1、LDHA、GLUT1、HIF-1α在转录水平明显高于正常对照。2-DG能抑制淋巴瘤细胞株葡萄糖消耗,减少乳酸生成,将细胞周期阻滞于G0/G1期,致使细胞增殖受抑。结论:淋巴瘤细胞株Namalwa、SU-DHL-4存在糖酵解异常,2-DG通过抑制淋巴瘤细胞株糖酵解通路,可干扰细胞能量代谢,阻断细胞周期,使细胞增殖受抑,从而发挥抗肿瘤作用。

拉米夫定预防B细胞非霍奇金淋巴瘤患者利妥昔单抗化疗后乙型肝炎病毒再激活的临床分析

目的研究利妥昔单抗联合化疗治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤（B—NHL）合并乙型肝炎病毒（HBV）携带患者的安全性，探讨拉米夫定预防性治疗的价值。方法回顾性分析含利妥昔单抗联合化疗前后B—NHL患者乙型肝炎五项、HBV．DNA和肝功能指标变化。将39例HBV核心抗体（HBcAb）（＋）／HBV表面抗体（HBsAb）（-）的B—NHL患者分为拉米夫定预防组和对照组，比较两组化疗后HBV再激活、肝功能损害等指标。结果108例接受利妥昔单抗联合化疗的B—NHL患者中，15例患者为HBV表面抗体（HBsAg）（＋），占所有患者的13．89％；39例为HBsAg（-）／HBcAb（＋）患者，占所有患者的36．11％。15例HBsAg（＋）的患者中HBV再激活率为13．3％，13例拉米夫定预防患者中1例（7．7％）HBV再激活，2例未预防的患者中1例HBV再激活。39例HBsAg（-）／HBcAb（＋）患者中HBV再激活率为7．7％（3例），14例拉米夫定预防组HBV再激活率为0，25例未预防的患者中3例（12％）HBV再激活。结论B—NHL合并HBV携带患者在利妥昔单抗联合化疗导致HBV再激活的风险是可控的，预防性使用拉米夫定能明显降低HBV再激活。