高亲和力单克隆抗体CL15识别的表位

鉴定抗磷脂综合征患者来源的抗纤溶酶单抗CL15所识别的结构域，并运用生物信息学和计算机辅助设计对CL15进行表位分析。使用分子克隆的方法克隆并纯化了纤溶酶的结构域，ELISA方法检测CL15对天然纤溶酶和微小纤溶酶的结合能力。根据CL15的抗体的互补区（CDR）的已知序列，在PBD蛋白库中进行同源比较，获得了同源性较高的单抗IMFA的Fab段的晶状结构，用计算机软件把CL15的CDR区序列优化进入IMFA后，根据结构域的空间结构与CL15进行对接。结果，高亲和力结合纤溶酶的单抗CL15识别纤溶酶的结构域，通过对CL15的晶体结构的同源模建，计算机模拟与微小纤溶酶结合，CL15在纤溶酶的酶活性区的606～789中的部分氨基酸序列有明显的相互作用，存在表位为空问构象，能将纤溶酶的丝氨酸活化中心屏蔽。CL15能识别微小纤溶酶，抗原表位在纤溶酶的丝氨酸的活性中心区域。CL15能阻断丝氨酸蛋白酶的活性中心的关键氨基酸，降低纤溶酶的活性，可能是最终导致抗磷脂综合征病人血栓形成的原因之一。

系统性红斑狼疮患者干扰素调节因子IRF1 IRF4 IRF8基因表达的研究

目的研究干扰素调节因子(IRF)家族中IRF1、IRF4、IRF8基因的实时定量表达水平与系统性红斑狼疮(SLE)的关联性。方法收集45例SLE患者与37名正常对照人群的临床资料,取外周血抽提总RNA并反转录为cDNA,以实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法在ABI PRISM 7900 HT实时定量PCR仪上检测患者组和对照组的IRF1、IRF4、IRF8的mRNA定量表达水平(以-ΔΔCt值表示)的差异。结果正常人外周血IRF1 mRNA、IRF4 mRNA、IRF8 mRNA的表达分别是-3．90±0．19、-8．04±0．25和3．60±0．15。与正常人相比,SLE患者组IRF1 mRNA表达水平差异无统计学意义(P＞0．05),而IRF4 mRNA的表达明显增高(-8．82±0．18,P=0．011)、IRF8 mRNA表达低于正常人(3．09±0．13,P=0．012)。结论SLE患者外周血存在IRF表达异常。

趋化因子CXCL9基因SNPrs2276886与系统性红斑狼疮相关性研究

目的分析趋化因子CXCL9基因SNPrs2276886在中国汉族人群中的分布情况以及与系统性红斑狼疮（SLE）遗传易感性的关系。方法①抽提482例SLE患者[其中包括253例狼疮肾炎（LN）患者]外周血DNA，经聚合酶链反应（PCR）扩增后，通过Pyrosequencing法进行等位基因分型。②80例患者同时留取RNA样本并反转录为cDNA，以实时荧光定量PCR方法检测CXCL9基因的表达水平。结果SLE组和LN组等位基因T的频率高于正常对照组（OR分别为1.346和1.347，P〈0.05），Tr基因型的频率也显著高于正常人群（X^2分别是6.397和3.941，P〈0.05）。CXCL9mRNA在rs2276886 TT型个体中的表达（3.9±2.0）高于CC型纯合子（2.5±2.1），P〈0.05。结论证实了中国人群中CXCL9基因SNPrs2276886作为一种遗传因素影响对疾病的易感性，等位基因T对于SLE是一种遗传易感标记。该SNP可能从转录水平上决定了基因的分泌水平，从而参与SLE的发病。

信号转导与转录激活因子2基因在外周血中的高表达与系统性红斑狼疮的病情活动相关

目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）中信号转导与转录激活因子2（STAT2）实时定量表达与SLE疾病特异性和病情活动度的相关性。方法收集144例SLE患者、27例非SLE患者与58名健康对照者的临床资料，取外周血抽提总RNA并逆转录成cDNA，运用SYBR green dyeⅠ实时定量聚合酶链反应（real—time PCR）法检测患者组和对照组的STAT2mRNA表达水平的差异，并与病情活动度进行分组比较，分析其意义。结果SLE患者组的STAT2定量表达（5．2±1．7）高于非SLE患者组和健康对照组（4．3±1．1，4．5±1．2，P均〈0．01）；SLE活动组的STAT2表达（5．2±1．5）高于非活动组（4．8±2．9，P〈0．01）；SLE患者组的STAT2表达与SLE疾病活动指数（SLEDAI）-2000和尿蛋白值之间呈正相关（r=0．317，0．309，P均〈0．01），与血清补体C3水平呈负相关（r=-0．449，P〈0．01）。结论转录因子STAT2在外周血细胞中的异常表达与SLE的发病机制有关，STAT2mRNA定量表达水平的升高与SLE患者病情活动相关。