胎儿期铅暴露水平与脐带血钙、铁、锌含量的相关研究

【目的】研究胎儿期铅暴露水平与胎儿体内钙、铁、锌等矿物元素含量的相关关系。【方法】以脐血血铅含量作为胎儿期铅暴露的指标,脐血钙、铁、锌含量作为胎儿体内相应元素含量的指标,采用BUCK-210型原子吸收光谱仪石磨炉原子吸收光谱法和分光光度法检测100份脐带血标本四种元素的含量。【结果】胎儿体内血铅水平处于在CDC标准的Ⅰ级(<0.483μmol/L)、Ⅱ-A(0.483-0.676μmol/L)水平时,即与二价元素钙、铁含量呈显著负相关(P<0.05);血铅≥0.247μmol/L者,其脐血钙、铁含量明显低于血铅水平<0.247μmol/L者,差异有显著性(P<0.05)。【结论】在认为相对安全的铅暴露水平,随着胎儿体内血铅水平的上升,二价元素钙、铁含量有下降趋势,亦即铅作为一种外来毒素,有可能干扰胎儿体内的正常矿物元素代谢。

Ⅳ型糖原累积病5例临床和基因分析

目的探讨糖原累积病Ⅳ型(GSD Ⅳ)的临床、实验室检查及基因突变特点。方法分析5例GSD Ⅳ患儿的临床表现、生化指标、壳三糖酶活性及治疗随访情况。结果患儿男3例、女2例,于4个月~5岁2个月因肝脾肿大及肝功能异常就诊。2例伴运动发育落后和肌无力,但肌酸激酶水平正常;4例肝脏活检示肝糖原沉积和不同程度肝纤维化。靶向测序发现5例患儿均携带GBE1基因复合杂合突变,共发现2种已报道突变(p.R515C,p.R524Q)和7种新突变,新突变包含5种错义突变(p.I460T、p.F76S、p.F538V、p.L650R、p.W455R),1种插入突变(c.141_142ins GCGC)及1种大片段缺失(外显子3-7),确诊为肝型GSD Ⅳ型。2例因肝硬化死亡;1例因肝硬化行亲体肝移植,移植前血壳三糖酶活性显著升高而移植后明显下降,移植后4个月肝酶恢复正常;另2例生长发育和肝功能基本正常,1例未行特殊治疗,1例服用生玉米淀粉,其血壳三糖酶活性正常。结论 GSD Ⅳ的临床表现异质性大,靶向测序可快速明确诊断,壳三糖酶有助于判断预后。

碱性成纤维细胞生长因子和Noggin诱导人羊水来源干细胞向神经细胞分化的差异比较

背景:相对于成体干细胞和胚胎干细胞自身存在的问题,羊水来源的干细胞系的建立,能为每一个个体建立一份自身的、具有高度增殖分化能力的干细胞储备,有望成为神经性退行性疾病细胞治疗的理想细胞来源。目的:观察Noggin和碱性成纤维细胞生长因子对人羊水来源干细胞向神经细胞分化的影响。方法:羊水标本来自怀孕16～22周行产前诊断的孕妇,在超声引导下行羊膜腔穿刺取得。利用CD117抗体,选用免疫磁珠法从人孕中期羊水标本中分离获得羊水干细胞,培养扩增后,通过流式细胞仪检测表面抗原表达进行鉴定。选取生长状态良好的第3代羊水干细胞,利用无血清的神经诱导培养液诱导其向神经细胞分化,分为空白对照组、基础诱导液组、Noggin诱导组和碱性成纤维细胞生长因子诱导组。倒置相差显微镜观察诱导后细胞形态的变化,细胞免疫荧光检测巢蛋白、β-Ⅲtubulin和神经丝蛋白在诱导后细胞中的表达。结果与结论:利用免疫磁珠方法分离出的羊水干细胞呈CD44和HLA-ABC表达阳性,CD45和HLA-DR表达阴性。诱导2周后,碱性成纤维细胞生长因子诱导组光镜下细胞形态发生显著变化,免疫荧光染色巢蛋白、β-Ⅲtubulin和神经丝蛋白表达阳性率较高。Noggin诱导组细胞形态和染色结果与基础诱导液组无显著性差异。提示利用羊水来源的干细胞诱导分化为神经细胞的过程中碱性成纤维细胞生长因子的作用远优于Noggin。

5例糖原贮积症Ⅸc型患儿临床和PHKG2基因突变分析

目的分析5例糖原贮积症(GSD)Ⅸc型患儿的临床、生化及基因突变特点。方法回顾分析5例GSD Ⅸc型患儿的临床情况,并采用靶向测序技术进行基因分析,Sanger测序验证所发现的PHKG2基因突变及其父母来源。结果5例患儿均表现为明显肝大和矮小,4例有运动耐力差;均有空腹低血糖,肝酶中重度升高,血三酰甘油升高;肝脏超声示无肝硬化。靶向测序发现5例患儿均携带PHKG2基因纯合或复合杂合致病或可能致病突变,发现1种已报道突变p.E157K和5种新突变(p.E56X,p.R185X,c.79_88delins TCTGGTCG,c.761del C,p.R279C),p.E157K为患儿的热点突变(50%)。结论靶向测序有助于确诊GSD Ⅸc型,p.E157K为热点突变。

全国城市学龄儿童睡眠状况研究

目的掌握全国城市学龄儿童的睡眠时间，分析这一年龄阶段儿童主要存在的睡眠问题及变化规律。方法采用分级整群抽样，于2005年11—12月对我国9城市、55所小学的19299名学龄儿童进行问卷调查，调查内容包括儿童个人基本情况（采用自制问卷）、睡眠习惯和睡眠问题（采用中文版儿童睡眠习惯问卷）。结果我国城市学龄儿童平均每日睡眠时间平时为9h10min（标准差48min），周末为9h48min（标准差63min），睡眠不足发生率平时为71．4％，周末为41．8％。各类型睡眠问题发生率波动于14．5％（睡眠呼吸障碍）-75．3％（白天嗜睡）。男童与女童相比，睡眠焦虑的发生率略低（X^2=19．42，P〈0．01），但异态睡眠（X^2=13．76，P〈0．01）和睡眠呼吸障碍（X^2=119．83，P〈0．01）的发生率则高于女童。除夜醒问题外，其他类型睡眠问题均呈显著的年龄别差异。结论我国城市学龄儿童睡眠状况值得忧虑，儿童睡眠健康问题应作为一重要“公共卫生问题”，给予足够的重视。

单纯性圆锥动脉干畸形患者染色体22q11.2微缺失的研究

目的心血管畸形是22q11.2缺失综合征常见的临床表现,随着研究的深入,该综合征发生率逐渐提高。该文就单纯性心脏圆锥动脉干畸形患者染色体22q11.2微缺失发生率进行研究。方法对24例单纯型圆锥动脉干畸形患者,包括2例永存动脉干,5例肺动脉闭锁/室间隔缺损,13例法洛四联症,4例右室双出口进行22q11.2内位点DNA探针荧光原位杂交(FISH)检测。结果24例单纯性圆锥动脉干畸形患者中仅1例患者有22q11.2缺失,发生率为4.2%,低于以往报道。结论尽管22q11.2缺失在伴其他系统异常的心脏圆锥动脉干畸形患者中较常见,单纯性圆锥动脉干畸形患者很少发现该缺失。

儿童睡眠习惯问卷中文版制定及测量性能考核

目的将儿童睡眠习惯问卷(CSHQ)引入国内,评价其在健康学龄儿童中应用的信度和效度,为类似研究提供比较成熟的工具。方法采用分级整群抽样,对我国9城市、55所小学的一到六年级20 457名学龄儿童进行了问卷调查,调查内容包括:儿童家庭、个人基本情况(采用自制问卷),睡眠习惯和睡眠问题(采用 CSHQ)。结果中文版 CSHQ 总问卷内部一致性 Cronbach's α系数为0.73,各层面 Cronbach's α系数为0.42～0.69;总问卷的平行信度组内相关系数(ICCs)为0.89,各层面的平行信度 ICCs 范围为0.83～0.92;总问卷的重测信度 ICCs 为0.85,各个层面的 ICCs 范围为0.60～0.88;对 CSHQ 的8个层面进行因子分析,共提取到3个公因子,能解释总变异的58.63%,在相应层面的因子负荷均大于0.5,提示该问卷结构与理论模型基本一致。结论 CSHQ 中文版具有较好的信度和效度,可用于我国学龄儿童睡眠状况研究。

谷固醇血症三例的临床、基因分析及治疗效果

目的研究谷固醇血症的临床、基因分析及治疗效果。方法回顾性分析了2016年6月—2017年6月因皮肤黄瘤病就诊的3例患儿临床和实验室检查特点，通过全外显子测序对3例患儿致病基因进行分析，采用Sanger测序方法对所发现的ABCG5和ABCG8基因变异及父母来源进行验证，气相色谱质谱分析患儿植物固醇水平。结果3例患儿男1例、女2例，于15月龄～6岁2月龄因关节附近的皮肤皱褶处多发线状或颗粒状黄瘤就诊，3例患儿血总胆固醇分别为14.45、15.47和15.85 mmol/L（正常范围3.36～6.46），低密度脂蛋白胆固醇分别为9.02、13.54和12.47 mmol/L（正常范围〈3.36）。全外显子测序发现2例携带ABCG5基因复合杂合变异，1例携带ABCG8基因复合杂合变异，共发现3种ABCG5基因变异，包含2种已报道变异（p. N437K，p.R446X）和1种新变异（p.Q251X）及2种ABCG8基因新变异（p.R263Q，c.1528_1530delATC）。3例患儿的菜油固醇分别为111.35、102.86和58.91 μmol/L（正常范围0.01～10.00），豆固醇分别为14.97、29.43、17.79 μmol/L（正常范围0.10～8.50），β-谷固醇分别为231.20、177.66和114.20 μmol/L（正常范围1.00～15.00），确诊为谷固醇血症。采取限制植物固醇和动物固醇的饮食治疗后，3例患儿血脂基本恢复正常，其中2例患儿皮肤黄瘤变小甚至消失，另一例未见改变。结论谷固醇血症患儿主要表现为关节附近的皮肤黄瘤，血总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇及植物固醇明显升高。

重视儿童心肌病的病因诊断

心肌病是一组异质性心肌疾病。过去曾定义心肌病为原因不明的心肌疾病。心肌病等同原发性或特发性心肌病。随着对该疾病病因及发病机制了解的增多，心肌病重新定义为心肌结构及功能异常的疾病，而不包括可以引起心肌异常的冠状动脉心脏病、高血压、心脏瓣膜疾病及先天性心脏病。有明确病因的则为特异性心肌病或继发性心肌病。根据解剖形态及病理生理，

新生儿鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症一例及孕母围产期管理

目的提高对新生儿鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症（ornithine carbamoyltransferase deficiency，OTCD）的临床和基因特征的认识，并探讨新生儿期发病的OTCD患儿治疗及迟发型OTCD孕妇的围产期综合管理。方法总结2013年4月上海交通大学医学院附属新华医院收治的1例OTCD患儿及其母亲的临床资料，并对该家系鸟氨酸氨甲酰基转移酶（ornithine transcarbamylase，OTC）基因进行分析。结果患儿生后开始出现血氨进行性升高，生后48h血氨升高至1020μmol／L。入院第3天家属放弃治疗，患儿死亡。患儿母亲为围产期发病的OTCD患者，经药物及限制蛋白等饮食治疗，围产期及产后血氨水平基本控制在正常范围。患儿血串联质谱分析显示精氨酸升高（97．43μmol／L，参考范围：1．00～25．00μmol／L）、瓜氨酸正常（27．43μmol／L，参考范围：4．00～30．00μmol／L）、鸟氨酸升高（161．66μmol／L，参考范围：10．00～120．00μmol／L）、蛋氨酸升高（70．45μmol／L，参考范围：10．00～50．00μmol／L）；尿气相质谱分析提示尿嘧啶也升高（67．11μmol／mol肌酐）、乳清酸升高（1372．66μmol／mol肌酐，参考范围：0．00～1．50μmol／mol肌酐）。患儿母亲血串联质谱显示精氨酸正常（8．44μmol／L，参考范围：1．50～25．00μmol／L）、瓜氨酸正常（8．41μmol／L，参考范围：7．00～35．00μmol／L）、谷氨酸升高（279．15μmol／L，参考范围：45．00～200．00μmol／L）；尿气相质谱分析显示尿嘧啶升高（51．55μmol／mol肌酐，参考范围：0．00～7．00μmol／mol肌酐）、乳清酸升高（38．75μmol／mol肌酐，参考范围：0．00～1．50μmol／mol肌酐）。患儿OTC基因的第6外显子上存在c．583G〉A（G195R）纯合突变，患儿母亲及外祖母OTC基因的第6外显子上存在C．583G〉A（G195R）杂合突变。结论综合管理有助于使OTCD孕妇顺利渡过围产期。新生儿期起病的男性OTCD患者预后不佳。

极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症11例的临床和ACADVL基因突变谱分析

目的 探讨极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（VLCADD）的临床表现,实验室检查特点以及基因型与表型的相关性.方法 对2006年9月至2014年5月在上海新华医院儿科就诊的11例极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的临床表现、实验室检查、基因型、诊治和预后等进行分析.11例患儿中男9例、女2例,就诊年龄2d～17岁,诊断主要依靠血串联质谱和基因分析结合临床及其他检查.结果 11例均有血十四烯酰基肉碱（C14∶1）特异性升高.6例为新生儿早发型,3例为婴儿型,2例为成人迟发型.其中4例新生儿早发型和2例婴儿型在生后2～8个月死亡,目前存活的2例新生儿早发型患儿均通过新生儿疾病筛查得以早期诊断和治疗.11例中共检出17种ACADVL基因突变,检出率95.45％（21/22）,包括11种已知突变（p.S22X,p.G43D,p.A213T,p.C215R,p.G222R,p.W427X,p.R450H,p.R456H,p.R511Q,c.296-297delCA,c.1605＋ 1G＞T）和6种新突变（p.S72F,p.Q100X,p.M437T,p.D466Y,c.1315delG insAC,IVS7 ＋4 A＞G）.p.R450H检出率最高,占总突变的13.63％ （3/22）,其次为S22X和D466Y突变,各占9.09％（2/22）.结论 11例VLCADD患儿的ACADVL基因突变谱具有高度异质性,新生儿型和婴儿型较成人迟发型患者死亡率高,提示基因型和表型间存在一定相关性.早期的诊断和治疗对患者的预后有重要意义.

两例22q13缺失综合征患儿的临床及遗传学分析

目的明确两例发育落后儿童的遗传学病因及临床特点。方法应用常规G显带技术分析患儿及其父母的外周血染色体核型，应用单核苷酸多态性微阵列芯片（single nucleotide polymorphism array，SNParray）检测患儿潜在的染色体微缺失／重复，用荧光定量PCR验证芯片检测结果。结果患儿1表现为智力及语言发育落后、癫痫、自闭症样行为、轻度面容异常；患儿2主要表现为智力及语言发育落后，无明显面容异常。SNParray分析提示两例患儿在22q13．33区分别存在69kb和587kb的杂合缺失，两个缺失均涉及22q最末端的SHANK3及ACR基因，荧光定量PCR证实两例患儿均存在SHANK3的新发杂合缺失，确诊为22q13缺失综合征。结论SHANK3单倍体剂量不足与患儿的临床表现相关。SNParray分析可发现染色体微缺失，为遗传咨询提供重要依据。

婴儿期诊断的一例孤立性17，20碳链裂解酶缺乏症临床和基因分析

目的 分析孤立性17，20碳链裂解酶缺乏症婴儿的临床和基因突变特点。方法 对1例8月龄46，XY，女性外阴表型的患儿临床表现、实验室检查和相关基因进行分析。结果 患儿因＂双侧腹股沟部包块，46，XY性腺发育不全＂就诊，其血压正常。实验室检查显示孕酮29.35（参考范围0.09-1.00）nmol/L，17羟-孕酮10.9（参考范围0.6-2.6）nmol/L，睾酮0.7（参考范围0.1-3.1）nmol/L，硫酸脱氢表雄酮〈0.15（参考范围0.80-5.6）mg/L，雄烯二酮〈0.3 （参考范围0.6-3.1） μg/L，血钠、钾、皮质醇、促肾上腺皮质激素水平正常。黄体生成素6.6（参考范围0.6-1.7）U/L，卵泡刺激素1.8 （参考范围0.5-3.7）U/L，雌二醇37.66（参考范围73.4-146.8）pmol/L。提取患儿的外周血白细胞DNA，采用下一代基因测序技术对200余个性发育相关基因进行分析，并对所发现的突变Sanger测序验证，患儿携带分别来自父母等位基因的CYP17A1基因的复合杂合突变c.1226C〉G（p.Pro409Arg，P409R）和c.707T〉G（p.Val236Gly, V236G），V236G为可能致病的新突变，结合临床该患儿确诊为孤立性17，20碳链裂解酶缺乏症。结论 孤立性17，20碳链裂解酶缺乏症婴儿表现为46，XY性腺发育不全，血压正常，孕酮和17OHP水平升高，患儿携带CYP17A1基因的P409R和V236G复合杂合突变。

脆性X综合征FMR1基因AGG排布式分析

目的研究中国正常人群FMR1基因与其不稳定扩增相关的（CGG）n重复序列的多态性及AGG排布式。方法应用AmplideX FMR1 PCRKit试剂盒扩增随机选取的380条x染色体，其中男性176例，女性102例，将11例脆性x综合征前突变携带者、10例脆性X综合征全突变患者作为阳性对照，用GeneMapperV4．0软件分析毛细管电泳结果，用SPSS11．0软件进行数据分析。结果女性样本杂合子比例为64．70％。在正常男性和女性样本中检测到的等位基因数分别为15和14种，AGG排布式为26和27种，男性（CGG）n重复数范围为17～45，女性为2l～44，其中1例为灰区携带者。男性和女性最大频率等位基因数均为29，其次为30、36，（CGG）n重复数为28的等位基因缺如。AGG排布式以9A9A9最常见。在正常人群中，99．21％有不同形式和数目的AGG嵌入，其中6A嵌入模块所占的比例高达10．02％，且多分布在较大的重复数片段中，而57．58％对照样本无AGG嵌入，且无1例患者样本有6A嵌入。正常男性、女性（CGG）n重复数的频数分布、AGG排布式差异均无统计学意义（P〉0．05），AGG数目在正常人群与对照间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论AGG数目及排布式可能对保持中国大陆人群（CGG）n稳定性有重要的意义，9A9A6A9可能为亚洲人群阻止（CGG）n不稳定扩增的一种特殊的排布式。