神经母细胞瘤循环肿瘤细胞分离与鉴定方法的建立及临床应用

目的建立一种神经母细胞瘤(NB)循环肿瘤细胞(CTCs)的分离和鉴定方法,初步探讨其测定NB患者CTCs的临床价值。方法应用CD56免疫磁珠阳性分选结合免疫荧光染色方法,对IMR32细胞和20例非血液肿瘤疾病患儿的外周血样本进行处理,通过统计捕获到的DAPI^+/GD2^+/CD45^-细胞数目,计算该方法分离和鉴定NB细胞的敏感性和特异性;检测12例初发晚期NB患儿治疗前及2疗程化疗后外周血中的CTCs数量。结果 10个以内IMR32细胞组,CTCs捕获的敏感性为(80±6.73)%;10～100个IMR32细胞组,CTCs捕获的敏感性为(79.14±3.97)%。20例非血液肿瘤疾病患儿的外周血中均未检测到DAPI^+/GD2^+/CD45^-细胞的存在,提示该方法捕获CTCs的特异性为100%。12例Ⅲ期或Ⅳ期NB患儿,治疗前有9例检测出CTCs,阳性率为75%;化疗2个疗程后,9例患儿CTCs数目均有不同程度减少,该动态变化趋势与患儿血清NSE水平、24h尿VMA水平及骨髓MRD变化相吻合,而影像学评估显示3例为部分反应(PR),6例为混合反应(MR),3例无反应(NR)。结论免疫磁珠阳性分选结合免疫荧光染色的方法对于NB患儿CTCs的捕获具有良好的敏感性和特异性,CTCs数目动态变化比影像学检测可更灵敏地反映疗效,该方法为进一步探讨CTCs在NB儿童疗效评估及复发风险预测中的价值提供了技术手段。

循环肿瘤细胞对神经母细胞瘤转移的诊断价值及疾病进展的预测价值

目的探讨循环肿瘤细胞(CTCs)数目对神经母细胞瘤(NB)转移的诊断价值及疾病进展的预测价值。方法采用CD56免疫磁珠阳性分选和免疫荧光鉴定的方法,检测2015年11月—2017年3月我院收治的25例NB患儿CTCs,其中DAPI^+/GD2^+/CD45^-的细胞被认为是CTCs。结果治疗后发生肿瘤进展的患儿在初诊时NSE水平较高(P=0.010)、CTCs数目较多(P=0.015)、2个疗程化疗后CTCs检出率更高(P=0.028)。在4例骨髓NB细胞免疫表型流式检查阴性的患儿外周血中检测到CTCs,其中3人发生疾病进展并死亡。初诊时CTCs数目≥11个/3mL的患儿中位无进展生存时间较短(19.4个月vs.32.5个月,P=0.007)。结论初诊时NB患儿CTCs数目对于肿瘤转移早期诊断、疾病进展具有预测价值。对于骨髓流式检测阴性的患儿,外周血CTCs动态检测可作为监测NB进展的辅助手段。

儿童肾透明细胞肉瘤的多学科诊治与随访

目的·探讨儿童肾透明细胞肉瘤的临床特点与多学科联合治疗。方法·收集2011年1月—2016年1月上海交通大学医学院附属新华医院收治的7例肾透明细胞肉瘤患儿的资料,对临床表现、影像学和病理学特点及治疗和随访情况等进行回顾性分析。结果·7例患儿中,男6例,女1例;中位年龄为28个月(4~59个月);I期3例,Ⅲ期2例,Ⅳ期2例。经小儿血液/肿瘤科、儿外科、病理科、放射科与放疗科等多学科讨论和评估后,纳入CCCG-WT-2009方案治疗。中位随访时间为22个月(8~56)个月;6例存活,1例死亡。结论·多学科联合诊治模式能有效改善儿童肾透明细胞肉瘤的预后,CCCG-WT-2009方案对早期儿童肾透明细胞肉瘤的治疗效果好,治愈率高;晚期儿童肾透明细胞肉瘤的治疗有待进一步探讨和完善。

儿童横纹肌肉瘤预后因素分析

儿童横纹肌肉瘤（rhabdomyosarcoma,RMS）是起源于原始间叶组织的恶性肿瘤,为儿童期最常见的软组织肉瘤,数据显示RMS约占儿童软组织肿瘤的54%～70%,占0～14岁儿童所有恶性肿瘤的3.5%。美国14岁以下儿童/青少年的RMS年发病率为4.5/百万,50%以上患儿的发病年龄在1～10岁。

基于分子靶标检测的58例难治或复发恶性实体肿瘤患儿个体化治疗

目的探讨基于分子靶标检测的个体化治疗在提高难治或复发恶性实体肿瘤患儿预后中的临床应用价值。方法收集2012年9月1日至2019年3月31日在上海交通大学医学院附属新华医院诊治的恶性实体肿瘤患儿的临床信息,采用免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR、二代测序的方法,检测并分析常用抗肿瘤药物的分子靶标。比较个体化治疗组与舒缓治疗组患儿的肿瘤缓解率及生存率。结果172例患儿接受分子靶标检测,其中13例标本采集于首次化疗前,159例标本采集于新辅助化疗后。结果显示,除甲氨蝶呤外的常用化疗药物均存在天然耐药,蒽环类药物在化疗后耐药率从41.9%上升至78.3%(P<0.05)。29例初发且难治患儿中,个体化治疗组的中位生存时间[(6.0±4.6)个月]及预期2年生存率[(39.2±22.6)%]均大于舒缓治疗组的[(1.5±1.4)个月,0](均P<0.05)。29例复发患儿中,个体化治疗组的中位生存时间[(6.0±2.3)个月]大于舒缓治疗组的[(1.0±0.5)个月](P<0.05),但预期2年生存率2组间差异无统计学意义(P=0.292)。结论可尝试扩展甲氨蝶呤在儿童恶性实体肿瘤治疗中的应用范围。基于分子靶标检测的个体化治疗可提高难治性恶性实体肿瘤患儿的总体生存率,而复发患儿的再治疗方案有待进一步探讨。

多学科综合治疗47例儿童肝母细胞瘤的疗效评估

目的分析应用《儿童肝母细胞瘤多学科诊疗规范》（武汉方案）治疗肝母细胞瘤（HB）的临床疗效，评估该方案的可行性和有效性，为进一步优化HB治疗方案提供依据。方法回顾性分析2008年1月至2013年12月上海交通大学医学院附属新华医院收治并纳入武汉方案治疗的47例HB患儿的临床、影像、病理、化疗及手术记录，分析上述因素对预后的影响。结果47例患儿（男33例，女14例），男女比例为2．4：1．0，中位诊断年龄为13．3（1．3—126．0）个月。5年总体生存率为（83．5±5．9）％，5年无事件生存率为（76．2±6．3）％，高危组和标危组5年总体生存率分别为（59．2±16．9）％和（91．2±4．9）％。单因素分析提示发病年龄≤3岁（P=0．001）、手术完整切除（P：0．000）、确诊时无肝外转移（P：0．002）、新辅助化疗后延期手术（P=0．000）的患儿预后较好。多因素分析提示手术完整切除[北美儿童肿瘤协作组（COG）I期，r=0．064，95％C10．007～0．565，P=0．013]可作为判断预后的独立因素。本组仅1例（2．1％）患儿在治疗过程中因并发严重感染死亡。结论化疗可有效提高手术切除的完整率，应用武汉方案治疗儿童HB的不良反应较小，总体生存率及无病生存率接近国外文献报道的水平，说明该方案对治疗我国HB患儿具有一定的有效性和可行性，但方案仍需要对手术切除指征、按照危险度分层化疗等方面进一步优化。

UBE2C在神经母细胞瘤组织表达及临床意义分析

目的通过检测泛素偶联酶2c（UBE2C）在神经母细胞瘤（NB）患儿中的表达情况，分析其表达与NB患儿的临床特征及预后的相关性。方法收集上海交通大学医学院附属新华医院2012年1月至2015年1月51例NB患儿术后石蜡包埋的组织样本，通过免疫组织化学方法检测其UBE2C蛋白的表达水平。回顾性分析NB患儿的临床特征，采用Kaplan—Meier法分析其生存曲线。结果51例患儿中，男女比例为1．8：1，中位诊断年龄为36个月（3．3～156．0个月），中位随访时间为25．6个月（5．5～42．7个月）。免疫组化结果显示，Ⅲ、Ⅳ期患儿UBE2C蛋白表达的阳性率（90．0％）明显高于Ⅰ、Ⅱ、IVS期患儿（47．6％）（P〈0．001）；复发NB患儿的UBE2C表达阳性率（91．3％）明显高于无复发者（57．1％）（P=0．001）。生存曲线分析显示，UBE2C蛋白阳性表达组预后较差（P=0．006）。结论UBE2C的表达与NB的分期及复发密切相关，UBE2C表达阳性提示NB患儿预后不良。UBE2C可能在NB侵袭、转移和复发过程中发挥重要的作用，有望成为NB潜在的生物标记物和治疗新靶点。