应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌对厄他培南的水解能力

目的应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测产KPC-2、NDM-1、VIM-2、IMP-1与IMP-4型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌水解厄他培南的能力。方法收集2009年6月-2013年12月上海交通大学医学院附属新华医院各种临床标本中分离的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE),用改良Hodge试验进行产碳青霉烯酶的表型筛选,用PCR扩增方法检测其碳青霉烯酶基因,并经测序确认。应用MALDI-TOF MS进行厄他培南水解预试验以确定最适厄他培南浓度及孵育时间,随后采用预试验中的最适条件,应用MALDI-TOF MS检测CRE水解厄他培南的能力。结果 108株CRE中,有102株改良Hodge试验阳性,其中90株产KPC-2、4株产NDM-1、3株产VIM-2、2株产IMP-1、2株产IMP-4、1株同时产KPC-2和IMP-4型碳青霉烯酶,且在2 h内均能水解厄他培南;另外6株CRE改良Hodge试验阴性,未检测出上述碳青霉烯酶基因,且不水解厄他培南。结论临床微生物实验室应用MALDI-TOF MS能够快速准确检测CRE水解厄他培南的能力,筛查产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌,为临床早期合理使用碳青霉烯类抗生素提供依据。

碳青霉烯类抗菌药物灭活试验筛查产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的效能评价

目的评估碳青霉烯类抗菌药物灭活试验(CIM)快速筛查产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的应用价值。方法以碳青霉烯酶基因聚合酶链反应(PCR)及测序结果为金标准,用CIM在154株肠杆菌科细菌(分离于临床样本)中筛查产碳青霉烯酶的细菌,并与改良Hodge试验结果进行比较。结果 CIM的符合率、特异性和敏感性分别为99.4%、96.6%和100.0%,改良Hodge试验的符合率、特异性和敏感性分别为98.7%、93.1%和100.0%。结论与改良Hodge试验相比,CIM具有符合率和特异性高、结果易于观察等优势,适合在各级医院的微生物实验室中推广使用。

分离自血培养肺炎克雷伯菌的毒力基因及患者临床特征分析

目的·检测分离自血培养的肺炎克雷伯菌的毒力基因,以及分析高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella pneumoniae,hvKP)和经典肺炎克雷伯菌(classic Klebsiella pneumoniae,cKP)感染患者的临床特征。方法·收集上海交通大学医学院附属新华医院2016年10月-2018年3月分离自血培养的肺炎克雷伯菌80株。采用黏液丝试验筛选高黏液性肺炎克雷伯菌(hypermucoviscous Klebsiella pneumoniae,HMKP),通过扩增wzi基因的方法进行荚膜血清分型,PCR方法检测hvKP常见的rmpA、magA、aerobactin等22种毒力基因,采用多位点序列分型方法对菌株进行基因分型,收集并分析患者的相关临床资料。结果·黏液丝试验结果显示,80株肺炎克雷伯菌中有9株为HMKP;毒力基因检测结果显示,10株为hvKP,magA、allS、iucA、iroN、kfu、wcaG、rmpA2、iutA、pLVPK、terW、silS基因在hvKP中检出率均显著高于cKP,差异具有统计学意义(均P<0.05)。荚膜血清分型以K14.K64型为主(24/80),多位点序列分型以ST11型为主(43/80)。与cKP相比,hvKP引起的血流感染以社区获得性较多,科室分布以急诊重症监护室为主,糖尿病患者比例高,合并肝脓肿的比例高。结论·上海交通大学医学院附属新华医院分离自血培养的肺炎克雷伯菌以cKP为主,大部分c KP为K14.K64/ST11型,且多为医院获得性感染;hvKP感染患者合并肝脓肿的比例较高。

1例产ESBL肺炎克雷伯菌伴生物被膜形成致化脓性关节炎患者的药学实践

临床药师会诊1例左侧髋关节清创术后感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)肺炎克雷伯菌(KP)致化脓性关节炎病例,根据病原菌药敏试验结果及抗菌药物药动学/药效学,结合患者病情,分析药敏结果和关节腔药物分布浓度,选择联合抗菌药物治疗方案,经外科积极清创换药,多次调整抗感染治疗方案,足疗程治疗,患者病情得到有效控制,治愈出院。临床药师通过全程参与临床治疗,发挥药学学科专长,协助临床医师制定个体化的治疗方案,监控肝肾功能、血钠水平,评估感染相关炎症指标的变化,保障了患者合理使用抗菌药物,提高了临床药物治疗的有效性和安全性。

肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制研究

目的探讨临床标本中分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制。方法收集2010年1月—2013年12月临床标本中分离的CRKP。采用Vitek-2 Compact全自动微生物分析系统进行鉴定并联合纸片扩散法(K-B法)进行药物敏感性试验,Microflex^(TM)MALDI-TOF MS进行菌种复核。改良Hodge试验筛查碳青霉烯酶表型;PCR方法检测bla_(KPC)、bla_(GES)、bla_(IMP)、bla_(VIM)、bla_(NDM-1)和bla_(OXA-48)等碳青霉烯酶基因及AmpC酶基因,并对阳性扩增产物进行基因测序;SDS-PAGE检测菌株外膜蛋白Ompk35和Ompk36的表达情况;对携带碳青霉烯酶基因的菌株进行质粒转移接合试验。结果 75株CRKP中,有71株改良Hodge试验阳性,其中69株携带bla_(KPC-2)基因合并Ompk36变异(68株)或Ompk36缺失(1株);1株携带bla_(IMP-4)基因合并Ompk35和Ompk36变异,1株携带bla_(NDM-1)和bla_(CIT-1)基因合并Ompk35和Ompk36变异。4株改良Hodge试验阴性的菌株中,3株DHA4基因阳性合并Ompk36缺失(1株)或Ompk36变异(2株),另1株未检测到耐药基因但Ompk36缺失。仅4株产碳青霉烯酶菌株(4/71)转移接合试验成功。结论临床标本分离的CRKP对碳青霉烯类抗生素的主要耐药机制为产KPC-2酶合并外膜蛋白表达异常。需加强院内感染预防控制措施,防止此类菌株的播散。

ST571型产NDM-1肺炎克雷伯菌检出及分子流行病学研究

目的探讨产新德里金属-β-内酰胺酶1(NDM-1)肺炎克雷伯菌检出的分子流行病学意义。方法实验菌株为从临床标本中分离到的1株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌。采用VITEK-2 Compact全自动微生物分析系统进行鉴定及药敏试验,PCR及测序方法检测NDM-1等碳青霉烯酶基因的表达,并对菌株进行质粒转移接合试验及多位点序列分型(MLST)。经检索Pub Med收集其他地区产NDM-1肺炎克雷伯菌的MLST数据,采用e BURST V3软件及Tree drawing软件进行分析。结果该菌株对包括碳青霉烯类在内的多种抗生素均高度耐药,携带NDM-1基因,MLST为ST571含有该基因的质粒通过接合方式成功转移到受体菌。共收集源自28个国家的238株产NDM-1肺炎克雷伯菌的MLST信息,包含41个ST型,CC258(clone complex)为主要流行株。结论我国首次检出ST571型产NDM-1肺炎克雷伯菌,耐药基因可能通过质粒进行传播。产NDM-1肺炎克雷伯菌的分子分型呈多样化,以CC258流行最广,本实验菌株与该克隆复合体菌株的亲缘关系甚远。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱在革兰阴性杆菌对β内酰胺类抗生素耐药性检测中的应用进展

β内酰胺类抗生素是一类临床应用最为广泛的抗菌药物,它通过干扰细菌细胞壁肽聚糖的交联结构发挥杀菌作用。该类抗生素包括青霉素及其衍生物、头孢菌素、单酰胺环类和碳青霉烯类等,其中尤以碳青霉烯类抗生素的抗菌活性最强。2013年CHINET细菌耐药性监测数据显示：肠杆菌科细菌对头孢菌素的耐药率约为20%,对碳青霉烯类抗生素的耐药率接近7%;不发酵糖革兰阴性杆菌对头孢菌素和碳青霉烯类抗生素耐药率均接近50%。