四例遗传性异常纤维蛋白原血症患者基因型和凝血功能分析

目的研究遗传性异常纤维蛋白原血症患者表型、基因型及功能。方法对4例遗传性异常纤维蛋白原血症患者及其家系成员行常规凝血及抗凝检测。分别用免疫比浊法和Clauss法测定血浆纤维蛋白原（Fg）抗原和活性，用Western blot法检测Fg三条肽链的分子量；分别进行血浆Fg凝固率、Fg动态聚集功能、纤维蛋白动态溶解功能检测；抽提患者及家系成员DNA，PCR扩增Fg3个基因FGA、FGB和FGG所有外显子及其侧翼序列，DNA直接测序并进行基因分析。结果4例患者活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）以及抗凝指标（抗凝血酶活性、蛋白C活性和蛋白S活性）均正常，凝血酶时间（TT）和蕲蛇酶时间（RT）明显延长；Fg活性降低（分别为0．54、0．52、0．43和0．50g／L），Fg抗原基本正常（分别为2．0、2．9、1．7和2．3g／L）；Western blot未检测到异常条带；患者血浆Fg凝固率降低至50％左右；Fg动态聚集开始时间延迟、最大聚集率下降；纤维蛋白凝块溶解速率降低；基因分析发现4例患者均发生了Ad链16位精氨酸的改变，3例为FGAg．1203G—A，导致Arg16His杂合错义突变，1例为FGAg．1202c—T，导致Arg16Cys杂合错义突变。结论4例患者Fg分子的凝固率降低、聚集和纤溶功能异常均由A“链16位精氨酸杂合错义突变所致。

二例Ⅰ型抗凝血酶缺陷症患者反复发生静脉血栓的分子机制研究

目的对2例Ⅰ型抗凝血酶（AT）缺陷症家系进行表型诊断、基因分析，并探讨其静脉血栓发生的分子机制。方法常规筛查凝血功能，凝血酶生成试验评估高凝状态。用ELISA法及稀释的蝰蛇毒法分别检测抗心磷脂抗体（ACA）及狼疮抗凝物质（LA）。用发色底物法或凝固法检测蛋白C、蛋白S和抗凝血酶活性（PC：A，PS：A及AT：A），用免疫比浊法检测抗凝血酶抗原（AT：Ag）。Western blot方法分析血浆中AT的含量及相对分子质量。用PCR方法扩增AT基因的全部外显子及侧翼序列，用DNA直接测序法进行基因分析，并对静脉血栓相关的基因多态性进行筛查。用定点突变法构建ATAla404Asp突变体表达质粒，脂质体介导瞬时转染293T细胞，检测细胞上清液和裂解液中AT：Ag。结果2例先证者的凝血筛查指标均未见异常，凝血酶生成试验显示先证者1的凝血酶生成潜力（ETP）和生成峰值分别为正常人的2．8倍和1．5倍，表明体内呈现明显高凝状态。PC：A、PS：A、ACA及LA检测均未见异常。先证者1、2的AT：A分别为45％和32％，AT：Ag分别为121mg／L和158mg／L。血浆Western blot结果显示2例先证者AT含量较正常混合血浆减少，但相对分子质量正常。基因分析发现2例先证者各携带一个杂合突变，分别为g．3291c—T（Thr9811e）和g．13863C→A（Ala404Asp），未发现静脉血栓相关的基因多态性。体外转染实验结果显示Ala404Asp突变质粒转染细胞的上清液和裂解液中的AT：Ag分别为野生型的4．8％和60．6％。结论Thi9811e和Ala404Asp两种AT突变与先证者1、2反复静脉血栓发生明显相关。其中Ala404Asp突变为国际首次报道。其分子发病机制研究显示Ala404Asp突变蛋白存在分泌障碍和细胞内降解增多，导致Ⅰ型AT缺陷症。