急性白血病凝血因子活性的变化及其临床意义

白血病浸润全身各个脏器,常伴有出凝血、抗凝及纤溶系统的功能紊乱^（[1]）。而出血是急性白血病常见的临床表现和主要死亡原因之一^（[2]）。该类疾病的出血机制错综复杂。凝血因子在凝血过程中发挥重要作用,为探讨凝血因子在急性白血病中的作用,本研究检测了100例急性白血病患者在不同时期凝血因子Ⅱ,Ⅴ,Ⅶ,Ⅷ,Ⅸ,Ⅹ,Ⅺ,Ⅻ的活化蛋白（FⅡ：C,FⅤ：C,FⅦ：C.

乳腺癌病人的21基因复发风险评分与临床病理特征

目的:分析激素受体阳性的早期乳腺癌病人21基因复发风险评分(recurrence score,RS)与临床病理特征的相关性,并比较不同管腔(luminal)型乳腺癌划分标准与RS的关系。方法:收集2014年1月至2015年6月瑞金医院乳腺疾病诊治中心手术治疗后接受21基因检测的早期女性乳腺癌病人,回顾分析RS与临床病理特征的相关性。结果:共入组379例病人,其中低危RS 86例(22.7%),中危RS 229例(60.4%),高危RS 64例(16.9%)。单因素分析结果显示,在不同雌激素受体、孕激素受体(progesterone receptor,PgR)、Ki67表达及组织学分级的乳腺癌病人中,RS存在统计学差异(P值分别为0.011,<0.001,<0.001,<0.001)。多因素分析表明,PgR、Ki67表达及组织学分级是RS评分的独立影响因素(P值分别为0.001,0.006,0.045)。分别以Ki67≥14%和≥20%作为luminal A型和luminal B型乳腺癌的划分标准,进行RS的分层分析显示,两者的RS较为一致。结论 :在激素受体阳性早期乳腺癌病人中,Pg R、Ki67及组织学分级是影响RS的独立影响因素。根据Ki67不同表达水平进行luminal A型和luminal B型乳腺癌的划分,不影响RS。

3个遗传性出血性毛细血管扩张症家系临床和基因诊断研究

目的对遗传性出血性毛细血管扩张症(HHT)家系做临床诊断并探索其分子发病机制。方法收集3个疑似HHT患者的病史、临床表型和家族史等基本资料,对患者凝血功能相关指标做实验室检测,排除凝血系统异常。采用直接测序法对HHT相关基因ENG和ACVRL1做序列分析,寻找致病突变;将所发现的突变重新扩增PCR产物反向测序以证实。比对新的基因突变,筛查100个正常人、单核苷酸多态性数据库、人类基因突变数据库和HHT基因变异数据库以排除多态性。结果 3个家系中均存在出血、毛细血管扩张、阳性家族史等HHT典型临床特点,凝血功能均未发现异常。基因测序显示突变均存在于ACVRL1基因上,3个家系携带的突变分别是g.18349C>A,p.Ser462X、g.12876G>T,p.Glu281X和g.12079G>T,p.Val228Phe,其中g.18349C>A,p.Ser462X和g.12079G>T,p.Val228Phe为新发致病突变。在100个正常人和数据库中均未发现相关突变;3个突变均导致ACVRL1基因编码的ALK-1蛋白激酶功能区内的氨基酸发生改变。结论在这3个有典型HHT表现的家系中,发生在ALK-1蛋白激酶功能区内氨基酸的改变是其分子水平的致病原因。

UniCel DxH800 Coulter血液分析仪血小板计数准确性评价

目的：评估UniCel DxH 800 Coulter血液分析仪（简称UniCel DxH 800）血小板计数的准确性。方法按照美国临床和实验室标准化协会（CLSI）EP9-A2文件的要求，将UniCel DxH 800血小板计数结果与国际参考方法（流式细胞术）检测结果进行比对。选取556例临床标本（乙二胺四乙酸二钾抗凝），其中包括血小板计数〈50.0×10^9/L的标本113例，经手工分类含巨大血小板的标本36例。所有标本同时进行UniCel DxH 800及Coulter EPICS XL流式细胞仪检测。流式细胞术采用CD41以及CD61双抗标记法。结果UniCel DxH 800血小板计数结果与流式细胞术结果之间具有较好的相关性（相关系数为0.9943）。对于血小板计数〈50.0×10^9/L的标本也能较准确定量（相关系数为0.9480）。对极低血小板计数水平（〈20×10^9/L）、较低血小板计数水平[（20-50）×109/L]、低血小板计数水平[（50-100）×10^9/L]、正常血小板计数水平[（100-275）×10^9/L]及高血小板计数水平（〈275×10^9/L）临床标本的准确性均较高（预期偏移为12.5%，实际偏移分别为2.2%、2.5%、1.0%、0.6%和-1.7%）。对于含巨大血小板的标本，2种方法的相关系数也高达0.9868。结论 UniCel DxH 800用于检测正常和异常的临床标本血小板计数，结果准确性均较高。

不同血凝仪试剂放置仓内时间对纤维蛋白(原)降解产物结果的影响

纤维蛋白（原）降解产物（FDP）是血液中纤维蛋白和纤维蛋白原在纤溶酶作用下的降解产物[1]。大量文献证实,FDP是一项反映机体凝血和纤溶活力的指标,观察其变化可帮助多种疾病的临床诊断、疗效判定和预后评估,因此日益受到临床的重视[2]。目前,大部分医院已将该指标作为入院常规检查项目之一。严格把关FDP的检测质量,将FDP的真实水平反映给临床医生,协助医生正确评估患者的病情并进一步治疗尤其重要。

一个遗传性凝血因子Ⅷ缺陷症家系的基因诊断

目的：对1个遗传性凝血因子Ⅷ（FⅧ）缺陷症家系进行表型诊断、基因诊断和产前诊断，并进行文献回顾。方法用尿素溶解法以及REA-chrom FⅧ试剂盒检测患者及其家系成员血浆FⅧ活性（FⅧ∶C），用双抗体夹心法检测FⅧ抗原（FⅧ∶Ag），采用血栓弹力图（TEG）对先证者凝血功能进行评估。PCR扩增F13A1基因的15个外显子及其侧翼序列，PCR产物纯化后直接测序，并对家系成员F13A1基因相应的突变序列进行检测。结果先证者FⅧ尿素溶解试验阳性，FⅧ∶Ag＜1%，FⅧ∶C低于检测下限（＜3%）。基因检测发现先证者F13A1基因14号外显子存在双杂合突变（p.Arg662＊和p.Trp665＊），先证者母亲及父亲均存在相应位点的单杂合突变，胎儿携带与先证者相同的双杂合突变。结论加强对FⅧ结构与功能的了解，开展相关实验室诊断和基因诊断，可使患者得到及时的诊断和治疗。

抗膜突蛋白抗体在抗磷脂综合征中的初步研究

目的 :分析抗磷脂综合征患者抗膜突蛋白抗体表达情况,并探讨抗膜突蛋白抗体在抗磷脂抗体相关性血栓发生中可能的作用。方法:采用酶联免疫吸附试验检测70例抗磷脂综合征患者(包括50例抗磷脂抗体相关性血栓患者和20例抗磷脂抗体相关性反复流产者)及100名正常对照者的血清抗膜突蛋白抗体及其他自身抗体的阳性率。制备鼠源性单克隆抗膜突蛋白抗体,加入正常人富血小板血浆中,检测其诱导血小板聚集的能力;同时加入单克隆抗体和膜突蛋白,检测血小板聚集抑制率。结果:在50例抗磷脂抗体相关性血栓患者和20例抗磷脂抗体相关性反复流产患者中,抗N端膜突蛋白抗体阳性率分别为76%和65%,显著高于其他自身抗体(抗C端膜突蛋白抗体、抗血小板抗体、抗心磷脂抗体、抗β2糖蛋白Ⅰ抗体)的阳性率。鼠源性单克隆抗N端膜突蛋白抗体有诱导血小板聚集的作用,而该作用可被N端膜突蛋白抑制,但不能被二磷酸腺苷激活途径抑制物精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸四肽所抑制。结论:大部分抗磷脂抗体综合征患者存在抗N端膜突蛋白抗体阳性,且该抗体的产生可能与抗磷脂综合征患者血栓形成的发病机制相关。抗膜突蛋白抗体在诊断和治疗抗磷脂综合征中的应用值得进一步探索。

我国汉族人群FⅧ基因14号外显子poly A区缺失或插入A热点突变分析

目的:对FⅧ基因14号外显子poly A区缺失或插入A进行热点突变分析。方法:采用活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间、凝血酶时间、纤维蛋白原、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)及血管性血友病因子抗原及活性(vWF:Ag、vWF:Act)等测定进行血友病A表型诊断,用长链聚合酶链反应和双重PCR进行FⅧ基因内含子22倒位及内含子1倒位检测,采用直接核苷酸测序法检测FⅧ基因启动子区、各外显子及其侧翼序列中的突变。用AccuCopyTM多重基因拷贝数检测试剂盒对未找到突变的患者进行拷贝数检测,采用多重PCR扩增FⅧ基因内外6个短串联重复序列(FⅧUp226、FⅧUp146、FⅧInt13、FⅧInt25、FⅧDown48、DXS1073)进行遗传连锁分析。结果:在近4年检测的343个血友病A家系中,发生于FⅧ基因14号外显子poly A区的插入或缺失A突变共32例,占总血友病A家系的9.33%,占小片段插入或缺失突变的42.11%。这些家系中多数为散发(21例),无血友病家族史,其中10例先证者的FⅧ基因突变为de novo突变,且部分患者表现为轻型或中型血友病(FⅧ:C 2%～10%)。结论:FⅧ基因14号外显子A8/A9区的插入或缺失A为血友病A的突变热点,其致病机制可能与该区域的特殊结构导致的DNA聚合酶在DNA复制过程中的滑移、错配相关,而poly A区DNA复制、转录、蛋白翻译过程的二次错误又可能使患者的表型得到部分"纠正"。

一个X连锁遗传性铁粒幼细胞贫血家系的基因诊断及文献复习

铁粒幼细胞贫血（SA）是由多种原因引起血红素合成障碍、铁利用不良而导致血红蛋白合成不足的一组贫血综合征.SA患者多表现为小细胞、低色素性贫血,骨髓中可见大量（＞15％）环形铁粒幼细胞.SA分为获得性SA和遗传性SA（CSA）,CSA可由不同的基因突变所致,其中X-连锁铁粒幼细胞贫血（XLSA）最为常见.

一个Gilbert综合征家系的基因诊断和遗传分析

目的:对1例Gilbert综合征患者进行基因诊断,并对其家系成员进行相关基因UGT1A1检测及遗传学分析。方法:排除其他相关疾病,结合低热卡试验结果和病史特点确诊1例Gilbert综合征患者。抽取患者及其家系成员的外周静脉血,提取基因组DNA,用聚合酶链反应(PCR)方法扩增相关基因UGT1A1,扩增产物直接测序,比对鉴定。结果:Gilbert综合征先证者的血清总胆红素升高,并以间接胆红素升高为主。低热卡试验中,先证者限制热量摄入后血清胆红素较限制热量前升高2倍,有诊断意义。基因检测发现,先证者及其胞姐同为UGT1A1基因启动子区域TA盒TA插入的A(TA)7TAA型,其父母UGT1A1基因的TA盒区域均为A(TA)6/(TA)7TAA杂合型。结论 :UGT1A1基因启动子中的TA插入影响了先证者的胆红素代谢水平,此基因异常是导致Gilbert综合征家系发病的原因,且该突变的遗传方式符合常染色体隐性遗传。