纺锤体的无创伤性观测在辅助生殖技术中的应用

纺锤体的无创伤性观测在辅助生殖技术(ART)的各个方面得到广泛应用:通过对纺锤体的有无、位置和形态结构的观察预测卵的质量;研究卵对培养环境条件的敏感度从而进行培养条件的质量控制;减少胞浆内单精子注射(ICSI)过程中对纺锤体的损伤从而保证胞浆内单精子注射技术的安全性和有效性;应用于冷冻技术用以改进卵子冷冻的方法;另外,纺锤体的无创伤性观测大大提高了在核移植技术的效率。纺锤体提供了卵子的重要信息以帮助在辅助生殖技术中获得更好的结果。

生殖半克隆

到目前为止,已有近十种哺乳动物的克隆子代已经出生,即胚胎是由体细胞核移入去核卵子形成的。对于该技术在人类辅助生殖技术(ART)中的应用引起广泛的争论。基于这个背景,由一方配子核和另一方体细胞核合成、继承克隆技术的半克隆技术受到关注,但其在临床应用、生物学行为、伦理方面等还有很多不同意见,就上述几方面进行综述。

子宫内膜轻创对着床相关因子及IVF妊娠结局影响的研究

目的:探讨子宫内膜轻创术对提高子宫内膜容受性的价值及分子机理。方法:对120例不孕症患者行IVF140周期,随机分为行子宫内膜搔刮轻创术组60例(A组)及对照组60例(B组),采用内膜微活检的方法,在扫描电镜下观察胞饮突,免疫组化定位及半定量检测白血病抑制因子(LIF)、骨桥蛋白(OPN)。再将对照组未孕患者中的20例行轻创术(B2组),重复IVF,并进行相关因子测定。结果:A组和B组相关因子分别为:胞饮突丰富占63.33%和36.67%、LIF6.07±1.33和4.94±2.26、OPN6.36±1.49和5.28±2.06、单胚种植率27.8%和14.3%,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。B2组行轻创术前后比,分别为:胞饮突丰富10%vs50%,LIF4.50±0.82vs6.33±1.25,OPN5.06±0.98vs6.83±1.46,轻创术前后差异均有统计学意义(P<0.05)。按妊娠与否分组后,妊娠组(n=62)与非妊娠组(n=78)相关因子分别为:胞饮突丰富54.84%和25.64%,LIF6.94±1.03和4.24±1.84,OPN7.31±0.85和4.52±1.65,差异有统计学意义(P<0.05),且LIF与OPN间呈正相关。结论:胞饮突、LIF、OPN是子宫内膜着床期重要的相关因子,它们的高表达与子宫内膜容受性紧密相关。而轻创术可增强3者的表达,从而提高胚胎种植率,改善IVF妊娠结局。

冻融胚胎移植周期中胚胎因素的分析研究

目的:分析冻融胚胎移植周期中胚胎卵裂球损伤程度与有丝分裂的恢复对于临床结局的影响。方法:171例患者共进行冻融胚胎移植206个周期,采用慢速冷冻法冻存d3胚胎,快速解冻法复苏后继续培养4h后移植,根据复苏后卵裂球的损伤程度分为完整组、混合组和损伤组,另根据复苏后4h胚胎进行分裂的情况分为分裂组,混合组和未分裂组,比较各组间的临床妊娠率和单胚着床率。结果:206个周期共复苏胚胎632枚,复苏存活率85.44%(540/632),移植胚胎508个,周期妊娠率36.41%(75/206),单胚着床率19.88%(101/508),完整组与损伤组间、分裂组与未分裂组间的临床妊娠率和单胚着床率都有显著性差异(P<0.05)。结论:冻融胚胎移植周期中胚胎卵裂球的损伤程度与有丝分裂的恢复是影响临床结局的重要因素。

线粒体对卵母细胞发育潜能的影响与评估

线粒体作为能量供应源,对卵子发育潜能影响巨大。三磷酸腺苷(ATP)产生过少使胚胎发育不良或停滞,ATP产生过多伴随大量氧自由基产生,使核及线粒体发生不可逆损伤;线粒体分布不均出现胚胎各卵裂球大小不均、碎片多;线粒体对Ca2+的调节异常会导致受精失败;线粒体内膜电位是预示线粒体势能储备的指标,缺乏皮质周围高电位线粒体的卵子发育潜能差;线粒体DNA突变影响其呼吸功能或影响其复制时会对卵子的发育潜能造成影响;同时母系卵子线粒体损伤可遗传给子代,造成流产或子代异常。通过检测线粒体自发荧光及线粒体内膜电位,可从细胞器水平预测卵子发育潜能。

不同受体胞质对哺乳动物核移植效果的影响

核移植受体胞质提供了重构核去分化、恢复全能性所需的环境,对重构胚的发育潜能有着重要影响,目前用于核移植的受体胞质有卵母细胞、受精卵、2-细胞期卵裂球以及异种卵母细胞等,其中以去核成熟卵母细胞最为常用。本文从哺乳动物核移植受体的类型、细胞周期等方面,对核移植效果的影响进行综述。

445对不孕夫妇精液质量情况及相关社会因素分析

目的通过分析445对不孕夫妇精液质量及其相关社会因素,探讨影响不孕的危险因素。方法2008年1月—7月在上海瑞金医院生殖医学中心就诊的不育孕夫妇445对,先分析原/继发、不孕年限等基本情况以及精液质量各指标之间的相关情况,再根据男方精液质量情况分为3组,即精液正常组(83例)、少弱精子症组(344例)和无精子症组(18例)。采用病例-对照研究方法,回顾性分析3组患者男方年龄、体重指数、原/继发、不孕年限、吸烟及精索静脉曲张等因素,采用R×C表卡方检验进行统计比较。结果(1)原/继发不孕患者男性年龄及不孕年限存在差别;(2)精液质量各指标之间存在一定的相关关系,精子密度与A级、B级、C级、D级精子百分率明显相关;(3)与断发不孕相比,原发不孕与精液质量关系更为密切,精索静脉曲张也是影响精液质量的重要因素,吸烟、体重指数与不孕年限对精液质量影响不大。结论应提倡适龄婚育,降低不孕风险,如出现不孕情况,尽早到不孕专科检查治疗。

人废弃胚胎单卵裂球体外发育潜能研究

目的:探讨体外受精治疗周期废弃胚胎来源的单卵裂球体外发育潜能。方法:收集21例患者授精培养后第3日不适于移植和冷冻的废弃胚胎共60枚,其中2-细胞期胚胎10枚,3-细胞期胚胎8枚,4-细胞期胚胎26枚,5-细胞期胚胎12枚,6-细胞期胚胎4枚。采用化学法去除透明带并分割胚胎获得单卵裂球,继续体外培养,每24h观察卵裂球发育情况。结果:60枚胚胎共获得229枚单卵裂球。以分割取得单卵裂球日作为第1日(d1),继续培养,其发育似乎遵循d2分裂、d3紧密化、d4出现囊胚腔、d5扩张,延续分割前的程序,但提前进入紧密化期,致使囊胚细胞数少,囊胚期体积亦比正常胚胎小。其中,4-细胞期废弃胚胎来源的卵裂球分裂率、紧密化率、囊胚形成率显著高于来自其它细胞数的单卵裂球(P<0.05),且其大部分内细胞团(ICM)细胞的碱性磷酸酶(AKP)表达呈阳性。结论:废弃胚胎来源的单卵裂球能在体外继续发育至囊胚,发育潜能与供体胚胎发育质量密切相关,其发育似乎延续原有供体卵裂球的节律,而形成囊胚所需时间明显缩短,细胞数亦明显减少,但囊胚ICM细胞显示AKP阳性,深信其利用价值会得到进一步证实。

不同胚胎选择体系对IVF-ET妊娠结局的影响

目的:探讨IVF-ET周期中不同胚胎选择体系对妊娠结局的影响。方法:将530个IVF-ET周期随机分为3组,按不同的胚胎选择方法选择胚胎进行移植。A组:228个移植周期,根据d3胚胎常规评分方法选择胚胎;B组:140个移植周期,根据d3胚胎常规评分结合原核评分选择胚胎;C组:162个移植周期,根据d3胚胎常规评分结合胚胎早期分裂选择胚胎。将C组进一步分为移植胚胎中有早裂胚胎和无早裂胚胎二组。比较各组的临床妊娠率和单胚着床率。结果:B组的临床妊娠率和单胚种植率为37.86%和21.77%,与A组(33.33%和20.56%)比均无统计学差异(P>0.05);而C组(45.06%和30.88%)均显著高于A组(P<0.05);C组移植胚胎中有早裂胚胎者的临床妊娠率和单胚着床率为55.68%和38.38%,分别显著高于移植胚胎中不含早裂胚胎者(32.43%和21.94%)(P<0.05)。结论:d3胚胎常规评分结合胚胎早期分裂选择的胚胎移植,可以提高IVF-ET周期的临床妊娠率和单胚着床率。

人成熟卵母细胞玻璃化冷冻技术的临床应用

目的探讨玻璃化冷冻技术应用于人成熟卵母细胞冷冻保存的临床效果。方法使用开放式载体cryotop进行人成熟卵母细胞的玻璃化冻存,对10例患者的冷冻卵子复苏后进行卵母细胞浆内单精子(ICSI)注射后行胚胎移植,观察复苏卵母细胞受精、卵裂、胚胎发育及临床妊娠情况。结果 10例患者共86枚玻璃化冻存的成熟卵母细胞复苏后77枚存活,69枚正常受精,获得65枚胚胎,共移植17枚胚胎,3例患者获临床妊娠,其中2例双胎妊娠。结论玻璃化冷冻技术是有效地保存人成熟卵母细胞的方法,有一定的临床应用价值。

短时体外受精后原核形成观察的相关研究

目的通过追踪观察卵子短时体外受精后原核(pronucleus,PN)的出现情况,评价PN出现的时间在预测IVF周期受精情况的价值,并探讨其与胚胎质量的关系。方法2009年1月～5月在本中心接受IVF-ET助孕治疗的62个周期,对IVF卵数≥5的助孕周期进行观察。授精后4h脱颗粒并观察原核出现情况,6h、7h、8h、9h、10h分别观察一次并记录。D1(21h)换液并观察记录受精情况,D3天移植,对胚胎进行评分。结果共观察721枚行常规IVF的卵子,受精504枚,受精率为69.9%;4、6、7、8、9、10、21h的原核出现率分别为0%、2.91%、14.84%、29.68%、46.74%、56.59%、71.15%(相关系数为:r=0.768,P<0.01)。共获胚胎495枚,其中可用胚317枚,优质胚119枚,以上不同时间段出现原核的可用胚胎率分别为66.67%、64.29%、65.38%、64.71%、62.32%、62.24%(P>0.05),优质胚胎率为28.57%、26.19%、24.04%、23.53%、22.45%(P>0.05)。受精率≥65%的周期共41例,在授精后8h至少有一个原核出现,原核出现率为12.5～80%;受精率<65%的周期共21例,授精后8h原核出现率为0%,其中,完全未受精2例;0<受精率≤30%的周期有7例。结论IVF周期原核开始出现的时间为4～6h,原核出现时间与最终受精率之间存在相关性,原核出现越早受精失败或低受精的风险性越低;8h仍未出现原核的周期,受精失败或低受精率的风险较大;较受精后6h或更早,我们认为8h采取补救ICSI确定受精情况更方便、准确。原核出现时间与胚胎质量无明显关系。