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耗竭巨噬细胞抑制脂多糖诱导小鼠肾脏及全身炎症损伤的作用研究 被引量:3
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作者 安晓宁 魏兆楠 +3 位作者 沈艳 史浩 张文 陈永熙 《诊断学理论与实践》 2021年第2期195-200,共6页
目的:采用选择性集落刺激因子1受体抑制剂GW2580耗竭小鼠体内巨噬细胞,观察该作用对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠肾脏及全身炎症损伤的影响。方法:将9只雄性小鼠分为3组(每组3只),在GW2580(160 mg/kg)给药第0、4、7天分别... 目的:采用选择性集落刺激因子1受体抑制剂GW2580耗竭小鼠体内巨噬细胞,观察该作用对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠肾脏及全身炎症损伤的影响。方法:将9只雄性小鼠分为3组(每组3只),在GW2580(160 mg/kg)给药第0、4、7天分别处死1组小鼠,制备脾脏单细胞悬液后,采用流式细胞术检测脾脏细胞中各时间点巨噬细胞占总细胞数百分比的变化,评估GW2580耗竭巨噬细胞的效率。GW2580干预炎症反应实验中,将另9只小鼠分为正常对照组、LPS组和GW2580+LPS组,每组3只,正常对照组不予药物处理;LPS组予腹腔注射LPS后16 h处死小鼠;GW2580+LPS组首先进行1周的GW2580灌胃,第8天予腹腔注射LPS,16 h后处死小鼠。采用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的表达量;收集小鼠血液、尿液以及肾脏组织标本,检测尿蛋白、血清中的肌酐水平,并观察肾脏组织病理改变情况。结果:GW2580可显著减少小鼠脾脏中的巨噬细胞数量,给药第0、4、7天在脾脏细胞中巨噬细胞占总细胞数的百分比分别为7.42%、4.78%和3.50%,差异有统计学意义(P<0.05);在GW2580干预炎症反应实验中,LPS组TNF-α浓度为(126.4±16.47)pg/mL(1pg/mL=1 ng/L),正常对照组及GW2580+LPS组均低于最小检测值31.3 pg/mL。与LPS组相比,GW2580+LPS组小鼠的TNF-α水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);肾脏组织标本检查提示GW2580+LPS组小鼠肾组织中炎症细胞浸润减少,肾小管空泡变性减轻。结论:GW2580可减少小鼠体内巨噬细胞数量,抑制体内炎症因子TNF-α水平,从而减轻肾脏组织病理损伤。 展开更多
关键词 脂多糖 GW2580 巨噬细胞 肿瘤坏死因子Α
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氧化还原酶DHTKD1基因突变致病机制及小鼠模型研究进展
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作者 沈艳 徐汪洋 朱后保 《实验动物与比较医学》 CAS 2018年第6期468-472,共5页
氧化还原酶,脱氢酶E1和转酮酶结构域1(DHTKD1)通过催化2-酮己二酸氧化脱氢生成戊二酰辅酶A,终产物乙酰辅酶A进入三羧酸循环,产生三磷酸腺苷(ATP)为细胞机体提供能量。迄今为止,研究显示,DHTKD1基因多个位点的突变与线粒体功能障碍有关,... 氧化还原酶,脱氢酶E1和转酮酶结构域1(DHTKD1)通过催化2-酮己二酸氧化脱氢生成戊二酰辅酶A,终产物乙酰辅酶A进入三羧酸循环,产生三磷酸腺苷(ATP)为细胞机体提供能量。迄今为止,研究显示,DHTKD1基因多个位点的突变与线粒体功能障碍有关,最终导致人类遗传疾病的发生。本文重点阐述了DHTKD1基因突变与人类遗传病的相关性及其相应的机制,并对已有的2种基因敲除小鼠模型进行了比较探讨。 展开更多
关键词 脱氢酶E1和转酮酶结构域1(DHTKD1)基因 基因突变 遗传病 线粒体 小鼠模型
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砷剂对吉非替尼耐药非小细胞肺癌裸鼠皮下肿瘤的作用
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作者 沈艳 毛建华 +2 位作者 王华枫 阮铮 李祥瑞 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2022年第10期65-73,共9页
旨在研究三氧化二砷对吉非替尼耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株NCI-H1975建立的裸鼠皮下肿瘤模型的作用效果。将NCI-H1975细胞(8×106个/只)注射于裸鼠右腋下,待肿瘤长到100 mm3时,随机将小鼠分为3组,对照组(生理盐水200μL,腹腔注... 旨在研究三氧化二砷对吉非替尼耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株NCI-H1975建立的裸鼠皮下肿瘤模型的作用效果。将NCI-H1975细胞(8×106个/只)注射于裸鼠右腋下,待肿瘤长到100 mm3时,随机将小鼠分为3组,对照组(生理盐水200μL,腹腔注射),砷剂组(三氧化二砷5 mg/kg,腹腔注射)以及吉非替尼组(吉非替尼125 mg/kg,灌胃)。裸鼠接种肿瘤细胞待肉眼可见的肿瘤出现后,每天测量肿瘤的长径和短径,计算肿瘤体积。药物作用18 d时,对小鼠进行整体拍照后进行安乐死,分离肿瘤、肺、脾等脏器,分别进行病理和电镜检测。结果显示:与对照组和吉非替尼组相比,砷剂组小鼠的肿瘤体积、重量及脾脏指数显著(P<0.05)或极显著降低(P<0.0001,P<0.01);肿瘤组织病理观察发现,与对照组和吉非替尼组相比,砷剂组肿瘤内出现明显坏死灶;电镜结果显示,砷剂组肿瘤内部能观察到自噬体;肺部病理结果显示,与对照组和吉非替尼组相比,砷剂组的肺泡壁较薄,仅见少许淋巴细胞浸润。研究表明,在裸鼠体内,砷剂能够抑制吉非替尼耐药NSCLC皮下移植瘤生长,诱导肿瘤发生自噬和坏死,保护肺部结构的完整性。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 三氧化二砷 吉非替尼耐药 裸鼠 皮下移植瘤
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腺相关病毒包装条件优化及重组AAV8/hFⅧ基因治疗血友病A小鼠的实验研究
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作者 毛建华 沈艳 +3 位作者 王嫱 王韵 阮铮 奚晓东 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期34-39,共6页
目的评价携带人凝血因子FⅧ(hFⅧ)的重组腺相关病毒(AAV)血清型8(AAV8/hFⅧ)病毒治疗血友病A(HA)小鼠效果。方法应用pAAV-CB-EGFP,pH22(AAV2血清型)和pfΔ6(腺病毒辅助质粒)摸索在HEK-293细胞中AAV的包装条件,pH22、pfΔ6及pAAV-CB-EGF... 目的评价携带人凝血因子FⅧ(hFⅧ)的重组腺相关病毒(AAV)血清型8(AAV8/hFⅧ)病毒治疗血友病A(HA)小鼠效果。方法应用pAAV-CB-EGFP,pH22(AAV2血清型)和pfΔ6(腺病毒辅助质粒)摸索在HEK-293细胞中AAV的包装条件,pH22、pfΔ6及pAAV-CB-EGFP质粒按照1∶1∶1的比例进行转染,免疫荧光显微镜观察四个条件(包括10 cm培养皿转10μg质粒,20 cm培养皿分别转20、30和40μg质粒)的病毒包装效果。应用最佳包装条件在HEK-293细胞中包装AAV2-EGFP,通过冻融法获得AAV2粗提液,感染HEK-293细胞和16095细胞,应用荧光显微镜观察包装效果。应用最佳转染条件将pAAV-TTR-hFⅧ、pH28、pfΔ6按1∶1∶1的比例转染HEK-293细胞获得AAV8/hFⅧ,两轮的氯化铯梯度离心法纯化病毒,以8×10^12 vg/kg剂量经尾静脉注射HA小鼠进行基因治疗,活化部分凝血活酶时间(APTT)测定分析FⅧ的活性。结果20 cm培养皿转染20μg质粒的条件能够在24、48和72 h都达到最佳的转染效果,且该条件包装的AAV2粗提液在16095细胞中具有较高的感染率。HA小鼠体内AAV8/hFⅧ能够在注射后12周仍有维持在治疗水平的FⅧ活性。结论利用优化包装条件制备的AAV8/hFⅧ能够在HA小鼠体内有效维持治疗水平的FⅧ活性达12周。 展开更多
关键词 腺相关病毒 人凝血因子FⅧ 血友病A 基因治疗
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腺相关病毒载体血清型8递送的大鼠FVⅢ轻链对不同长度人FVⅢ重链活性的促进作用
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作者 毛建华 沈艳 +1 位作者 阮铮 奚晓东 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1817-1823,共7页
目的:研究大鼠FVⅢ轻链(rL C)对不同长度人FVⅢ重链(hHC,包括hHC745和hHC1690)活性的影响。方法:将hHC745、hHC1690、人FVⅢ轻链(hLC)和rL C分别克隆至含CB启动子的腺相关病毒血清型8(AAV8)表达载体中,采用HC和LC共表达的双链策略,转染2... 目的:研究大鼠FVⅢ轻链(rL C)对不同长度人FVⅢ重链(hHC,包括hHC745和hHC1690)活性的影响。方法:将hHC745、hHC1690、人FVⅢ轻链(hLC)和rL C分别克隆至含CB启动子的腺相关病毒血清型8(AAV8)表达载体中,采用HC和LC共表达的双链策略,转染293T细胞,收取转染后48 h的细胞培养上清;质粒经尾静脉高压注入血友病A(HA)小鼠,注射后48 h通过眼眶采血收集小鼠的外周血血浆。应用活化部分凝血活酶时间(aPTT)法检测FVⅢ的活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测FVⅢ的抗原表达量,计算比活性。结果:在293T细胞中,hHC745和hHC1690与rL C共表达时的FVⅢ活性显著高于与hLC共表达时的活性,分别提高到约4.6倍和2.9倍;ELISA结果表明hHC745和hHC1690与hLC和rL C共表达时的FVⅢ抗原表达无统计学差异;根据aPTT测得的FVⅢ活性与ELISA测得的FVⅢ抗原表达量计算的比活性结果显示,hHC745与rL C共表达时的比活性提高到与hLC共表达时的比活性的约4.1倍,而hHC1690与rL C共表达时的比活性提高到与hLC共表达时的约2.8倍。在高压注射的HA小鼠中,hHC745和hHC1690与rL C共表达时的FVⅢ活性显著高于与hLC共表达时的活性,活性分别提高到约5.1倍和2.1倍;ELISA结果同样显示,hHC745和hHC1690与hLC和rL C共表达时FVⅢ抗原表达无统计学差异;比活性结果表明,hHC745和hHC1690与rL C共表达时的比活性较与hLC共表达时的比活性显著提高,分别提高到约4.2倍和1.8倍;hHC1690与rL C共表达时的FVⅢ活性显著高于hHC745与rL C共表达时的活性。结论:rL C可以显著提高不同长度hF VⅢ重链(hHC745和hHC1690)的活性。 展开更多
关键词 大鼠凝血因子VⅢ轻链 人凝血因子VⅢ重链 血友病A 腺相关病毒载体血清型8 凝血因子VⅢ活性
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中药制剂毛萼乙素对免疫球蛋白类别转换的作用 被引量:1
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作者 任建婷 张洪信 +2 位作者 陆顺元 顾鸣敏 王铸钢 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期949-954,共6页
目的研究中药制剂毛萼乙素(EriB)对免疫球蛋白类别转换(CSR)的作用。方法以不同剂量的EriB(0、0.75、1.5和2.0μmol/L)处理脂多糖(LPS)刺激下的B淋巴细胞系1B4.B6细胞,采用MTT和流式细胞术检测细胞的生长状态,并分别采用ELISA、RT-PCR和... 目的研究中药制剂毛萼乙素(EriB)对免疫球蛋白类别转换(CSR)的作用。方法以不同剂量的EriB(0、0.75、1.5和2.0μmol/L)处理脂多糖(LPS)刺激下的B淋巴细胞系1B4.B6细胞,采用MTT和流式细胞术检测细胞的生长状态,并分别采用ELISA、RT-PCR和Western blotting方法检测免疫球蛋白的产生及其CSR的效率以及CSR相关基因的表达水平,采用报告基因法检测EriB对NF-κB的转录调控作用。结果随着EriB浓度的升高,B细胞增殖及CSR均出现障碍。进一步实验证实EriB通过抑制IKKα的活性阻断IκB磷酸化,进而抑制NF-κB1活化入核;同时直接抑制NF-κB1的转录从而导致其表达水平降低。结论EriB可通过NF-κB信号通路抑制CSR的发生。 展开更多
关键词 毛萼乙素 免疫球蛋白类别转换 NF-KB信号通路
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两种小鼠肺癌模型的构建及Micro PET-CT观察 被引量:2
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作者 沈艳 王韵 +2 位作者 张汝 阮铮 毛建华 《实验动物与比较医学》 CAS 2019年第1期39-45,共7页
目的比较尾静脉注射与肋间隙肺部原位注射人源非小细胞肺癌(NSCLC)细胞制备肺癌小鼠模型肿瘤形成情况的差异。方法使用NSCLC株NCI-H1975细胞,通过尾静脉注射以及经肋间隙肺部原位注射的方法制备NOD-SCID小鼠肺癌模型,于造模后15d,应用... 目的比较尾静脉注射与肋间隙肺部原位注射人源非小细胞肺癌(NSCLC)细胞制备肺癌小鼠模型肿瘤形成情况的差异。方法使用NSCLC株NCI-H1975细胞,通过尾静脉注射以及经肋间隙肺部原位注射的方法制备NOD-SCID小鼠肺癌模型,于造模后15d,应用小动物PET-CT技术观察小鼠肺部肿瘤形成情况:解剖小鼠,检测肺部病理改变。结果造模15d后,经尾静脉注射NCI-H1975细胞的小鼠在肺部不能检测到肿瘤,而经肋间隙肺部原位注射NCI-H1975细胞的小鼠能够在肺部检测到明显的肿瘤形成。结论肋间隙肺部原位注射肺癌细胞制备的肺癌小鼠模型肺部肿瘤形成均一、稳定、可重复、高效,是较好制备原位肺癌模型的方法. 展开更多
关键词 原位肺癌 小鼠模型 小动物PET-CT 尾静脉注射 肋间隙注射
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Rig-I对LPS诱导的巨噬细胞增殖、凋亡及功能的作用研究 被引量:5
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作者 王金霞 张洪信 +2 位作者 陆顺元 唐凌云 王铸钢 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2015年第6期852-858,共7页
该研究旨在探讨维甲酸诱导基因I(retinoic acid-inducible gene I,Rig-I)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的巨噬细胞增殖、凋亡和细胞因子分泌等生物学功能的影响及其作用机制。以不同剂量的LPS刺激Rig-I基因沉默和过表达的小鼠... 该研究旨在探讨维甲酸诱导基因I(retinoic acid-inducible gene I,Rig-I)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的巨噬细胞增殖、凋亡和细胞因子分泌等生物学功能的影响及其作用机制。以不同剂量的LPS刺激Rig-I基因沉默和过表达的小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞,采用CCK-8和流式细胞术检测细胞的生长状态,采用q PCR方法检测细胞因子TNF-α、IL-10、IL-1和IL-6相关基因的表达水平,并采用Western blot方法检测LPS诱导的TLR4信号通路的相关蛋白表达水平。CCK-8和流式细胞术结果显示,Rig-I促进巨噬细胞的增殖并抑制LPS诱导的细胞凋亡;q PCR结果表明,Rig-I促进巨噬细胞中TNF-α、IL-10、IL-1和IL-6基因的表达。进一步的实验证实,Rig-I通过激活AKT及其下游蛋白p-38、NF-κB和Bcl-x L等抑制细胞凋亡并促进细胞因子的表达。该研究首次证实了Rig-I可通过AKT信号通路对LPS诱导的巨噬细胞增殖、凋亡及功能进行调节。 展开更多
关键词 RIG-I 细胞因子 TLR4信号通路
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丝氨酸蛋白酶与生殖 被引量:3
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作者 尚璇 沈春玲 王铸钢 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2016年第9期1172-1179,共8页
丝氨酸蛋白酶是一类以丝氨酸为活性中心的蛋白水解酶,在哺乳动物的生命活动过程中扮演着重要的角色,在消化、凝血、凋亡和免疫系统中的作用早已被人们所熟知。近年来,随着对该蛋白酶家族研究的深入,发现丝氨酸蛋白酶在不明原因的不育患... 丝氨酸蛋白酶是一类以丝氨酸为活性中心的蛋白水解酶,在哺乳动物的生命活动过程中扮演着重要的角色,在消化、凝血、凋亡和免疫系统中的作用早已被人们所熟知。近年来,随着对该蛋白酶家族研究的深入,发现丝氨酸蛋白酶在不明原因的不育患者和ACR–/–(acrosin)、PCSK4–/–(proprotein convertase subtilisin/kexin type 4)、PRSS21–/–(protease,serine,21)、PRSS37–/–(protease,serine,37)、PCI–/–(protein C inhibitor)、SPINKL3–/–(serine protease inhibitor Kazal-type)等敲除小鼠模型中具有很高的出现频率。因此,该文简要介绍了丝氨酸蛋白酶家族特点,并在此基础上,着重阐述了其在生殖过程中的作用。 展开更多
关键词 丝氨酸蛋白酶 受精 精子发生 精卵结合 不育
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长链非编码RNA与雄性生殖 被引量:1
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作者 李朝杰 沈春玲 王铸钢 《中华生殖与避孕杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期674-679,共6页
长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)是指一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA,具有特定的二级结构和时空表达特异性,在物种间的同源性普遍很低。随着测序技术和生物信息学技术的不断发展以及研究的不断深入,先前被认为是基因... 长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)是指一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA,具有特定的二级结构和时空表达特异性,在物种间的同源性普遍很低。随着测序技术和生物信息学技术的不断发展以及研究的不断深入,先前被认为是基因组"噪音"的lncRNAs被证实参与了X染色体失活、基因组印记以及胚胎发育等众多生物学过程,并且与一些疾病的发生、发展有着密切的联系。近年来,一些研究表明lncRNAs在雄性生殖方面也发挥着独特的作用。本文主要论述lncRNAs的起源、作用机制,并总结其参与调控的雄性生殖过程及在男性不育相关疾病中的作用。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 雄性生殖 精子发生 男性不育
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速激肽受体2对小鼠溃疡性结肠炎的影响 被引量:2
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作者 毛钰蕾 周涛 +2 位作者 唐凌云 张洪信 王铸钢 《诊断学理论与实践》 2016年第6期578-581,共4页
目的:利用速激肽受体2(tachykinin receptor 2,Tacr2)基因敲除小鼠及诱导溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠模型,探讨Tacr2在小鼠UC发生、发展中的作用。方法 :小鼠按照基因型分成野生型组和基因敲除(纯合子)组,再按照给药与否... 目的:利用速激肽受体2(tachykinin receptor 2,Tacr2)基因敲除小鼠及诱导溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠模型,探讨Tacr2在小鼠UC发生、发展中的作用。方法 :小鼠按照基因型分成野生型组和基因敲除(纯合子)组,再按照给药与否进一步分成野生型造模组、纯合子造模组、野生型空白组、纯合子空白组。给造模组小鼠口服右旋葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)构建UC小鼠模型,观察其UC活动指数及结肠组织中病理学改变、炎症因子及上游转录因子核因子NF-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的变化。结果:Tacr2基因敲除的纯合子小鼠经DSS诱导的UC症状比野生型造模组小鼠明显加重。进一步分析基础状态下结肠的免疫活性,发现在基础状态下,纯合子小鼠与野生型小鼠相比,结肠免疫活性明显降低,表现为结肠黏膜中IL-1β、TNF-α、IL-6和NF-κB水平降低。结论:Tacr2对UC的发生、发展有抑制作用。 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 速激肽受体2 小鼠模型
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鼠源性髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体的制备及鉴定
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作者 安晓宁 魏兆楠 +2 位作者 倪莉燕 沈艳 陈永熙 《现代免疫学》 CAS 北大核心 2022年第3期218-223,共6页
采用鼠源性髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)与弗氏佐剂混合注射的方式制备小鼠MPO特异性抗中性粒细胞胞质抗体(anti-neutrophil cytoplasmic antibody,ANCA),并予以定性及定量检测。使用B6.129X1-Mpo^(tm1Lus)/J小鼠(即MPO敲除小鼠),... 采用鼠源性髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)与弗氏佐剂混合注射的方式制备小鼠MPO特异性抗中性粒细胞胞质抗体(anti-neutrophil cytoplasmic antibody,ANCA),并予以定性及定量检测。使用B6.129X1-Mpo^(tm1Lus)/J小鼠(即MPO敲除小鼠),将mMPO与完全/不完全弗氏佐剂混合,通过腹腔注射方式诱导小鼠产生适应性免疫应答。采用定性ELISA以及间接免疫荧光法检测小鼠血清ANCA水平;采用肌酐检测试剂盒(肌氨酸氧化酶法)检测小鼠血清肌酐水平以评估其肾功能。ELISA检测结果显示,实验组小鼠血清MPO-ANCA的光密度D(450 nm)值较对照组显著升高(P<0.001),约为对照组的5.6倍;间接免疫荧光法结果提示,实验组中性粒细胞胞质有较强的荧光信号,与MPO-ANCA的核周型特点相一致;H-E染色示部分肾小球囊壁层上皮细胞过度增殖;实验组与对照组小鼠血清肌酐水平检测结果差异不显著(P>0.05)。由此,注射MPO与弗氏佐剂混合液诱导MPO-/-小鼠产生了抗MPO-ANCA,ELISA和细胞免疫荧光实验均验证了抗体的生成,可为进一步构建实验性血管炎小鼠模型提供重要基础。 展开更多
关键词 髓过氧化物酶 抗中性粒细胞胞质抗体 血管炎
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