胰高血糖素样多肽1抑制高糖诱导的高迁移率组蛋白B1表达及机制研究

目的研究胰高血糖素样多肽1(glucagon like peptide 1,GLP-1)对高糖环境下培养的人视网膜微血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells,HRCEC)中,高迁移率组蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HM GB1)表达的影响及相关机制。方法高糖刺激HRCEC不同时间(24 h、48 h及96 h)后,分别使用不同浓度的GLP-1(10 mmol/L、100 nmol/L及1 000 nmol/L)刺激HRCEC 96 h后,分别通过RT-PCR、ELISA及Western Blot检测HMGB1的mRNA、分泌及蛋白水平。使用高糖和GLP-1刺激细胞1 h后,Western Blot检测HMGB1表达相关信号通路(p38 MAPK、JNK和NF-κB)磷酸化水平。结果相较于正常糖水平,高糖促使HMGB1的mRNA、分泌及蛋白水平显著升高,GLP-1可有效抑制这一效应。高糖可显著性激活p38 MAPK、JNK和NF-κB,而GLP-1则抑制高糖所诱导的这些信号通路激活。结论 GLP-1可能通过抑制高糖刺激下HMGB1的表达及炎症信号通路激活,从而抑制糖尿病视网膜病变的发生及发展。

糖基化终末产物调控糖尿病合并动脉粥样硬化中FSTL1表达的机制研究

目的:探讨糖基化终末产物(AGEs)参与调控糖尿病动脉粥样硬化中卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)表达的分子机制。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测糖尿病合并动脉粥样硬化患者血清中FSTL1及AGEs的表达水平,分析外周血中AGEs与FSTL1的相关性。构建糖基化终末产物受体(RAGE)基因敲除小鼠(以C57BL/6野生型小鼠为对照),体外培养小鼠原代巨噬细胞。采用Western blot法检测不同浓度的AGEs-BSA刺激巨噬细胞后FSTL1及其基因5′端启动子区域转录因子AP-1和c-Jun的表达情况,以及特异性抗体阻断RAGE后巨噬细胞FSTL1、AP-1和c-Jun的表达变化。结果:糖尿病合并动脉粥样硬化患者外周血中FSTL1与AGEs水平呈正相关(r=0.148,P=0.021)。AGEs-BSA促进巨噬细胞表达FSTL1和核转录因子AP-1及c-Jun。特异性阻断RAGE信号通路后,AGEs-BSA诱导的FSTL1、AP-1及c-Jun的表达水平明显降低。结论:AGEs-RAGE信号通路可通过调控巨噬细胞中转录因子AP-1及c-Jun的表达来调节FSTL1活性,进而参与糖尿病动脉粥样硬化的发生与发展。

卵泡抑素样蛋白1及其在心血管疾病中的作用研究进展

卵泡抑素样蛋白1（follistatin-like 1,FSTL1）是一种由间充质细胞系产生的糖化分泌蛋白,属于富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC）家族[1]。SPARC家族成员的钙离子结合域及类卵泡抑制素域均呈高度保守性。

徐黄合剂对糖尿病性下肢动脉硬化闭塞症的疗效观察

目的·观察徐黄合剂对糖尿病性下肢动脉硬化闭塞症(lower extremity atherosclerotic occlusive disease,LEAOD)的临床疗效。方法·采用随机数字表格法将68例糖尿病性LEAOD患者分为对照组33例和实验组35例。对照组予以口服阿托伐他汀钙片和贝前列素钠片,实验组在对照组的基础上加服徐黄合剂,2组疗程均为12周。分别于治疗前后记录2组患者的下肢动脉(胫前动脉、胫后动脉、足背动脉)内中膜厚度(intima-media thickness,IMT)、血液黏度、纤维蛋白原、血浆D-二聚体、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-Ch)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoproteincholesterol,HDL-Ch);每2周对2组患者测定1次血尿常规和肝肾功能。经治疗后,通过测定间歇性跛行距离评估2组患者的临床疗效。结果·经治疗后,实验组胫前动脉IMT、胫后动脉IMT、足背动脉IMT、血液黏度、纤维蛋白原、血浆D-二聚体、TC、LDLCh、HDL-Ch的改善均明显优于对照组(均P<0.05)。2组患者的血尿常规和肝肾功能均未出现异常。实验组总有效率为91.43%,明显高于对照组(75.76%)(P=0.014)。结论·徐黄合剂对糖尿病性LEAOD患者的疗效较为显著。

沉默信息调节因子1对急性心肌梗死小鼠的作用研究

目的 :探讨沉默信息调节因子1 (Sirtuin1,Sirt1)对急性心肌梗死(简称心梗)小鼠的作用及其机制。方法 :通过结扎小鼠心脏冠状动脉左前降支构建急性心梗小鼠模型,并于心梗后不同时间(1、3、5、7 d)收集梗死区及梗周区域组织(以假手术组心肌组织为对照),利用实时定量PCR检测Sirt1表达情况。另构建小鼠心梗模型,在心梗手术结扎成功的同时,用微量注射针在心梗组织周围注射Sirt1过表达慢病毒(以阴性对照慢病毒点注射组为对照),于术后7 d通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2, 3, 5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法检测心梗面积。体外培养小鼠原代心肌细胞,并于缺氧(2%O2)条件下,使用不同浓度(25、50及100μmol/L)白藜芦醇刺激小鼠原代心肌细胞,采用蛋白印迹法检测Sirt1和半胱氨酸蛋白酶3剪切体的表达水平,利用细胞凋亡检测试剂(TUNEL)检测细胞凋亡情况。结果:发现在梗死后1～7 d中,梗死区及梗周区组织中的Sirt1 mRNA表达水平呈显著下降趋势(P<0.05)。同时,相较于阴性对照慢病毒注射组,Sirt1过表达慢病毒注射组可显著性减小梗死面积[(15.68±3.28)%比(29.50±5.56)%,P<0.05]。随着白藜芦醇刺激浓度的增加,Sirt1蛋白表达水平呈剂量依赖型升高,而半胱氨酸蛋白酶3剪切体蛋白表达水平呈下降趋势;心肌细胞的凋亡也随刺激浓度的增加逐渐减少。结论:Sirt1在急性心梗组织中表达下降,过表达Sirt1可减少急性心梗后的心梗面积。