RANKL诱导内皮间质化促进乳腺癌骨转移

[目的]探讨核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)在乳腺癌骨转移中的作用及其机制。[方法]MDA-MB-231,BT549和MCF-7乳腺癌细胞体外培养,加入终浓度为200 ng/ml RANKL(RANKL组),或同体积双蒸水(Ctrl组),行transwell、单细胞钙成像、PCR和western blot检测。分离小鼠骨髓细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs),在培养其中加入乳腺癌细胞上清,行TRAP、ALP和von Kossa染色。[结果]RANKL在MDA-MB-231细胞[(1.7±0.1)个vs(1.0±0.1)个,P=0.002]、BT549细胞[(1.6±0.1)个vs(1.0±0.1)个,P=0.027]的相对迁移数显著高于Ctrl组。RANKL-200组MCF7[阳性数/总数(%),58/127(45.7)vs 3/118(2.5),P<0.001]和BT549细胞[阳性数/总数(%),51/224(22.8)vs 31/228(13.6),P=0.011]显著高于Ctrl组。PCR检测,RANKL-200组中MDA-MB-231细胞中的E-cadherin显著低于Ctrl组,N-cadherin、vimentin表达量显著高于Ctrl组。Western blot显示,N-cadherin相对表达水平依次为RANKL-500组>RANKL-200组>Ctrl组(P<0.05);而E-cad-herin蛋白表达水平依次为RANKL-500组<RANKL-200组<Ctrl组(P<0.05)。在小鼠骨髓细胞体外试验中,加入含RANKL上清组的TRAP染色阳性细胞数[(451.3±15.0)个vs(174.3±9.2)个,P<0.001]显著高于Ctrl组,而ALP染色和Von Kossa染色差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]RANKL诱导的钙信号经NF-κB通路增强乳腺癌细胞EMT过程进而促进乳腺癌的骨转移。